胆胃舒颗粒对豚鼠胆囊平滑肌CCK-A受体的影响

胆胃舒颗粒对豚鼠胆囊平滑肌CCK-A受体的影响 胆胃舒颗粒对豚鼠胆囊平滑肌CCK-A受体 的影响 ? 14? [3]万诗燕,鲍幸兰,徐雪琴,等.拔河式大角度快速穿刺法在肿瘤 患者静脉穿刺中的应『}j[J].护理学杂志(综合版),2008,23 (4):27—28. [4]陈英,沈宏.减轻浅静脉输液穿刺疼痛的国内研究概 护理实践与研究2010年第7卷第8期(下半月版 况[J].实用医药杂志,2008,25(3):364—365. (收稿口期:2010—02—26) (本文编辑崔兰英) 胆胃舒颗粒对豚鼠胆囊平滑肌CCK—A受体的影响 郭莉芳刘辉贤邱锦芳王天星李恺郭绍举李健 摘要目的:探讨利胆健脾法在分子层面预防胆囊结石复发的机制.方法:将9O只豚鼠随机分为空白组,模型组和治疗组,每组3O只,分别 给豚鼠喂食饲料,致石饲料,致石饲料加胆胃舒颗粒,2个月后处死取材,用改良UPP法及放射配基结合法检测豚鼠胆囊壁CCK—A受体, 同时观察胆囊收缩率及结石形成率.结果:与模型组比较,治疗组豚鼠胆囊收缩率,CCK—A受体效果更好(P<0.05).结论:胆胃舒颗粒具有 预防结石复发的作用,其作用机制可能与调节胆囊壁CCK—A受体有关. 关键词胆胃舒颗粒;胆囊结石;胆囊收缩功能;CCK—A受体 TheinfluenceofDanweishuonCCK—Areceptorofcavygallbladdermusclestrip. GUOLifang,L1UHuixlan,Q1UJinfang,etal(ShenzhenTraiditionalChineseMedicineHos pital,Shenzhen518033) AbstractObjective:ToinvestigatetheLidanJianpitherapyusedtopreventtherecurrenceofg allstonediseaseatthemolecularleve1.Methods:90cases ofguineapigswererandomlydividedintoblankgroup.treatmentgroupandmodelgroup(30p erineachgroup),eachgroupwerefeedwithstandardfod— der,stonefodderandstonefoddercombinedwithDanweishuseparately.After2monthsallca vieswerekilled,andimprovedUPPandRBAmethodwere usedtodetecttheCCK— ARofgallbladderwal1.Thegallbladdershrinkagerateandstoneratewereobserved,too.Res ults:Comparedwithmodelgroup, theeffectofgallbladdershrinkagerateandCCK— ARintreatmentgroupweresignificantlybetter(P<0.05).Conclusion:Weidanshucanpre ventthere— currenceofgallstonediseaseandmechanismofactionmayberelatedtotheregulationofgallbl adderwallCCK—AR. KeywordsDanweishu;Cholecyslithiasis;Contractionfunctionofgallbladder;CCK—AR 保胆治疗胆囊结石的优点是既去结石又保留胆囊,保留 了胆道系统结构和功能的完整性,但其最大的问是如何防 止胆囊结石的复发.为此,2009年1,3月我们从动物实验人 手,探讨胆胃舒颗粒预防胆囊结石复发的机制,现将方法和 结果报道如下. 1材料及方法 1.1材料 1.1.1动物实验用Hartley豚鼠9O只,由广东省实验动物 中心提供.级别:普通级.体重:250—350g.许可证号:SCXX (粤)2003—0002. 1.1.2主要试剂(1)TRIZOL试剂,为美国Technolo—gics 公司产品.(2)逆转录试剂盒AccessRT—PCRSystem为美国 Promega公司生产.(3)豚鼠内参B—actin引物:上游(625 — 649,24bp):5'一ctgactgactacctcatgaagarc一3';下游 (872—852,21bp):5'一ggaaggaaggctggaagagtg一3'. PCR产物长度:248bp.(4)豚鼠CCK—A受体引物:上游 (367—386,20bp):5'一tcatccccaatctgctcaag一3'.下 作者单位:518033广州中医药大学附属深圳市中医院 郭莉芳:女,本科,主管护师 游(658—639,20bp):5'一cacatattcgcggtctggtt一3';PCR 产物长度:292bp. 1.1.3药品胆胃舒颗粒为我院消化科方,由我院制剂 室提供.组成:柴胡15g,白芍2Og,金钱草15g,白术15g,郁 金15g,内金15g,黄芪15g,田七5g,香附15g,蒲公英15g, 海螵蛸20g,甘草5g. 1.1.4饲料(1)标准豚鼠饲料.(2)胆固醇致石饲料.其 中标准豚鼠饲料95.45%,酪蛋白l%,蔗糖1.5%,猪油1%, 纤维素1%,胆酸0.02%,胆固醇0.05%.酪蛋白由广东环凯 微生物科技公司提供,批号:200703316;胆固醇由广州器化医 疗设备有限公司提供,批号:080608;纤维素由广州器化医疗 设备有限公司提供,批号:080403;胆酸为瑞士分装,批号: 375217/227103.饲料均由广东省动物中心提供.许可证号: SCXX(粤)2008—0009. 1.1.5所需主要仪器冻存管,液态氮罐. 1.1.6其他实验用的刀,剪,镊子及玻璃制品均200?高 温2h烘烤处理. 1.2方法 1.2.1动物分组将9O只豚鼠随机分为3组,每组30只. 空白组:喂养普通饲料4O只?d,;模型组:喂养胆固醇结 护理实践与研究2010年第7卷第8期(下半月版 石致石饲料40g/,只?d,;治疗组:喂养胆固醇致石饲料40 只?d,,并加用胆胃舒颗粒溶液2m1灌胃. 1.2.2处理(1)实验2个月后每组分为空腹组,餐后组两 亚组,空腹组禁食24h,在豚鼠眼眶处注射空气致死,剖开腹 腔,用血管钳阻断胆囊管,取下胆囊,用注射器抽出胆汁以备 检测.餐后组禁食12h后,给液体脂餐15ml/kg体重灌胃, 30min后剖腹取材,以备检测胆囊收缩功能.(2)胆囊平滑肌 组织样本的提取与保存:完整取下胆囊,纵形剪开,收集胆汁 沉积物,滤纸吸净;然后去掉黏膜及浆膜,保留平滑肌,最后将 平滑肌组织装人冻存管并置入液氮罐中保存. 1.2.3检测指标(1)胆囊平滑肌中CCK—A受体数量测定 按改良UPP法及放射配基结合法(RBA).将胆囊平滑肌置 于1Oml预冷的匀浆缓冲液中(含蔗糖250mmol/L,HEPES10 mmol/L,大豆胰蛋白酶抑制剂0.O1%)充分剪碎,于电动中 速匀浆器中匀浆(冰浴),每次3min,共3次.充分匀浆后, 转移至干净离心管,2500r/min(4?)离心5min.收集上清 液于干净离心管,收集沉淀于匀浆缓冲液,重新匀浆,离心,收 集上清液.然后,合并两上清液,20000r/min(4?)离心45 min,收集沉淀,加入HEPES缓冲液(含HEPES25mmol/L, MgC122.5mmol/L,NaC1137mmol/L,NaH2PO40.7mmol/L, Glucose10mmol/L,明胶1%)摇匀,即为粗制膜受体.部分 粗制膜受体以牛血清白蛋白为标准,用Lowery法测定蛋白含 量,其余用于配体结合反应.含膜蛋白50g的HEPES缓冲 液300分别和不同浓度的125I—BH—CCK—OP硫酸酯(1 ×10,1×10I9)反应,非特异性结合管另加入1000倍过 量的未标记CCK—OP硫酸酯.反应温度为25?,pH6.5,时 间30min,冰冷HEPES缓冲液900终止反应.离心法(4 ?,4500g,20min),收集沉淀,测定放射性计数,利用计算机 获得CCK—A受体的最大结合容量(数量).(2)胆囊成石状 况,胆囊收缩功能测定.胆囊成石情况判定:解剖胆囊,以肉 眼观察胆囊内有无胆石或胆泥,若胆汁内存在成型,粗大颗粒 者定性为结石,其成份用红外光谱分光光度计定性;胆囊收缩 功能:剖腹后自然状态下测量胆囊最长长径(L),及相互垂直 两横径(w,H),胆囊体积(v)=0.52xL×WXH(cm),胆囊 收缩功能=(餐前体积一餐后体积)/餐前体积x100%. I.3统计学方法 将所得数据用SPSS10.0软件进行统计分析,计量资料 采用t检验,计数资料采用Fisher确切概率法. 2结果 本研究共有7只动物死亡(占总样本数的5.6%),其中 模型组中有4只动物死亡,治疗组中有3只动物死亡. ? l5? 2.1各组动物胆结石发生情况 以肉眼所见棕黑色泥沙样结石及絮状沉淀物作红外光谱 鉴定为胆固醇结石作为成石标准:模型组成石率为92.30%,治 疗组成石率为14.81%,显着低于模型组(P<0.05).见表1. 表1各组动物成石率比较例 注:与模型组比较,?P<O.O1.{P<0.05 2.2各组豚鼠胆囊收缩功能比较(表2) 表2各组胆囊收缩功能比较(?.%) 注:与模型组比较,?P<O.01,}P<0.05 2.3各组CCK—A受体比较(表3) 表3各组胆囊组织CCK—A受体的变化(?s.fmo~mgpro) 注:与模型组比较,?P<0.01,}P<O.05 3讨论 胆囊结石是临床常见病,据中华外科学会胆道学组1995 年底公布的调查,胆囊结石几乎占胆石病的80%….中 医认为肝失疏泄,胆汁排泄不畅,淤滞日久,聚而成石.故各 种病理因素导致胆气不舒是胆囊结石的基本病机.我们科室 长期采用内镜微创保胆取石术(MC)方式,术后配合胆胃舒颗 粒,预防结石复发J. 胆胃舒颗粒专为胆结石术后防止结石复发设计,方中金 钱草,柴胡,郁金,香附等利胆,疏肝,止痛;黄芪,白术,海螵蛸 等健脾,益气,和胃;田七,鸡内金,郁金等活血,化瘀,散结;蒲 公英,金钱草等清热,化湿;白芍,甘草缓急止痛.能促进?肖化 系统功能,增强体质,明显促进胆汁分泌,代谢及排泄,增强胆 囊的收缩功能,排出胆囊内淤积及有形微粒,从而有效防止胆 囊结石的复发. 本研究显示,模型组的胆囊收缩功能明显低于治疗组,而 CCK—A受体较治疗组降低,说明CCK—A受体与胆囊收缩 (下转112页) ? l12? 3讨论 3.1健康教育对遵医行为的影响 遵医行为是指病人对医疗措施的遵从程度,为防止疾病 的发生,对病人进行健康教育与行为指导,可有效避免危险因 素导致疾病的发生或加重原有病情.据调查我国人群高血压 病服药率为24.8%J,遵医行为除了与服药的剂量,时间长 短和药物的副作用有关外,还与病人对疾病知识了解与正确 认识有关J.病人对高血压的认识及治疗状况,决定了对病 人的危害程度和预后,病人只有遵从医嘱,合理长期用药,才 能提高病人的生活质量,改善预后.本结果显示,健康教育后 病人的遵医行为有明显提高,提示在临床护理中,向病人进行 有关高血压疾病和保健知识的教育,解释治疗的意义和按时, 按量用药的重要性,任意停药危害的健康教育,可使病人对疾 病的基本知识有充分的了解,在治疗中保持与病人的联系,指 导和随访,可提高病人的遵医行为.说明开展健康教育,可使 病人进一步了解疾病知识,增强自我保健知识,有效地提高高 血压的控制率和病人遵医行为. 3.2加强护患沟通可提高病人遵医行为 高血压作为一种需终身服药控制的慢性病,对病人遵医 行为提出了很高的要求.病人的遵医行为受两方面的影响: (1)病人的医学知识,健康信念和文化素养.(2)医护人员是 护理实践与研究2010年第7卷第8期(下半月版 否用病人理解的方法与其沟通,对其进行健康教育].因此, 护理人员要明确高血压的护理目的不是单纯的降低血压,而 要着眼于护理一个高血压病人,与病人建立合作伙伴关系,尊 ,理解病人,为病人具备良好的遵医行为提供保障. 重,体谅 参考文献 [1]张伟嫦,张建华,焦淑燕,等.冠心病患者康复教育模式的探讨 [J].现代临床护理,2004,6(3):16一l8. [2]戴俊明,卫志华,张蓓燕,等.社区高血压病人的药物利用与依 从性关系分析[J].高血压杂志,2001.9(1):65—67. [3]顾大风,汤烈芳,张世美,等.影响基层高血压病人遵医行为的 因素调查[J].护理研究,2001,15(1)t14一l5. [4]孙孝芹,姚景鹏,任秀琴.老年高血压患者的血压观察时间[J]. 中华护理杂志,1998,33(2):73—75. [5]王保华,李富君.社区高血压患者药物治疗依从性的多因素分 析[J].现代中西医结合杂志,2005,14(7):976. [6]李肖静.健康教育干预对高血压患者服药依从性的影响[J].中 国老年保健医学,2005,3(2):55—56. [7]范珊红,化前珍,余咏.原发性高血压患者治疗依从性与健康 教育[J].中国健康教育,2006,22(3):227—228. (收稿日期:2010—02—02) (本文编辑崔兰英) (上接15页)功能呈正相关,这在基因水平上支持CCK受体 在胆囊结石形成中的重要作用,同时也说明CCK受体数目减 少有其分子病理基础,此结果与陈胜报道结果相一致;同 时,胆囊结石患者胆囊收缩功能下降与CCK—A受体下降相 关,郑培永等研究表明:病人胆囊组织中CCK—A受体有 降低的趋势.以上表明CCK—A受体在胆囊运动调节中起重 要作用,同时提示CCK—A受体减弱是胆石病患者胆囊收缩 功能减弱的重要原因:CCK—A受体下调,蛋白质合成减少, 从而胆囊对CCK敏感性降低,胆囊收缩减弱.主要表现为胆 汁淤积,胆固醇结晶析出,进而形成结石. 本研究还发现,治疗组的结石率明显低于模型组,而且胆 囊收缩功能,CCK—A受体最大结合容量均优于模型组,保证 了胆囊收缩功能,防止胆囊结石的发生.至于利胆健脾法为 主中药调节胆囊平滑肌CCK—A受体的作用机制,可能有上 调胆囊平滑肌CCK—A受体增加CCK与CCK—A受体的亲 和力,降低胆汁中胆固醇的浓度,减轻其对胆囊平滑肌细胞膜 的伤害,促进胆汁的肠肝循环的作用,详细机制尚需进一步的 研究. 参考文献 [1]中华外科学会胆道外科学组.我国胆石病十年来的变迁[J].中 华外科杂志,1995,33(11):652—658. 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