HPLC法测定牛黄消炎片中大黄素与大黄酚的含量
HPLC法测定牛黄消炎片中大黄素与大黄
酚的含量
中国药事2008年第22卷第3期247
HPLC法测定牛黄消炎
董丽萍,刘传玲,姚尚辰,于
中国药品生物制品检定所)
片中大黄素与大黄酚的含量
勇,宋吉连(山东省威海市药品检验所,威海264200;
摘要:建立牛黄消炎片中大黄素,大黄酚的含量测定
.采用高效液相色谱法,KromasilC色谱
柱,流动相为甲醇一0.1磷酸(80:20),流速为0.8mL?rain,检测波长:254nm.大黄素对照品的线
性范围0.04,0.8/xg,r一0.9999,平均回收率为99.O6%o,RSD=0.61;大黄酚对照品的线性范围
0.0196~0.392/~g,r=0.9999,平均回收率为1'05.89,RSD=0.67.本法快速,灵敏,准确. 关键词:HPIC;牛黄消炎片;大黄素;大黄酚
中图分类号:R927.2文献标识码:A文章编号:1002—7777(2008)03—0247—03 DeterminationofEmodinandChrysophanolinNiuhuangXiaoyanTabletsbyHPLC
DongLiping,LiuChuanling,YaoShangchen,YuYongandSongJilian(WeihaiInstituteofDr
ug
Control,ShandongProvince,Weihai264200;NationalInstitutefortheControlofPharmace
uticaland
BiologicalProduts)
ABSTRACTAHPICmethodwasestablishedfordeterminationofemodinandchrysophanol
inNiuhuang
XiaoyanTablets.Themobilephasewasconsistedofmethanol一0.1H3PO4(80:2O).Theflowratewas
0.8mI?min,thedeterminationwavelengthwas254nm.Thestandardcureofemodinreferenc
ewas
linearovertherangeof0.04,0.8/,g.r一0.9999,theaveragerecoverywas99.06,RSD一0.61.the
standardcureofchrysophanolreferencewaslinearovertherangeof0.0196,0.392~g,r一0.9999,the
averagerecoverywas105.890A,RSD一0.67.ConclusionThemethodiSrapid,sensitiveandaccurate.
KEYWORDSHPLC;NiuhuangXiaoyanTablets;emodin;chrysophanol
牛黄消炎片由牛黄,珍珠母,大黄,雄黄等七
味药组成,具有清热解毒,消肿止痛之功效,用于
咽喉肿痛,疔,痈,疮疖等.该处方中的大黄,显
微特征[有时不明显.本文参考有关文献[1_6_,采
用高效液相色谱法测定牛黄消炎片中大黄素和大黄
酚的含量,分离度好,回收率高,在一定程度上能
有效控制牛黄消炎片的质量.
1仪器与试药
Agillent1100型组合式全自动高效液相色谱
仪,METTLERTOLEDOAG135电子天平.大黄
素,大黄酚对照品(中国药品生物制品检定所,供
含量测定用,批号分别为0756—200110,0796—
200208),牛黄消炎片为市售品(药都制药集团,
批号:060907;哈药集团世一堂,批号:0603316;
作者简介:董丽萍,大学本科,主管药师;Tel:(0631)5281272 哈尔滨华羽集团,批号:20060801).甲醇为色谱
纯,水为超纯水,其余试剂均为
纯.
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱:KromasilCl8(4.6ram×250mm,
5tim),流动相:甲醇一0.1磷酸(80:20),流速 0.8mI?min,检测波长:254nm,柱温:室温, 进样量:10ttL.
2.2对照品溶液的制备
精密称取大黄素,大黄酚对照品10mg, 9.8mg,分别置于50mL,100mI量瓶中,加甲醇 至刻度,然后精密量取大黄素,大黄酚溶液各10 mI,置于50mL量瓶中,加甲醇制得每1mL中含 大黄素40/,g,大黄酚19.6/,g的对照品混合溶液.
248中国药事2008年第22卷第3期 2.3供试品溶液的制备
取本品20片,去包衣,精密称定,求得平均 重量,取相当于5片的平均片重,精密称定,置 50mI锥形瓶中,加甲醇25mi,称定重量,加热 回流30min,放冷,再称定重量,用甲醇补足失重 量,滤过,取滤液10mI,置50mI圆底烧瓶中, 挥去甲醇,加2.5mol?I.的硫酸溶液10mI, 超声处理5min,再加氯仿10mI,加热流1h, 冷却,移至分液漏斗中.分取氯仿层.酸液用氯仿 提取2次,每次约8mI,合并氯仿液,以无水硫 酸钠脱水,氯仿液移至100mI锥形瓶中,挥去氯 仿,残渣加甲醇溶解.定容至10mI量瓶中,即得 供试品溶液.
2.4阴性对照溶液的制备
取不含大黄的本品6味药约0.25g.依2.3法 制得阴性对照溶液.
2.5空白对照试验
取上述对照品溶液,供试品溶液及阴性对照品
溶液,照2.1项色谱条件,各进样10ftI,得到高 效液相色谱,见图1.图谱
明彳此色条件下大 黄素,大黄酚与其他成分有较好分离.s;性对照图 谱与对照品色谱相同位置无干扰.理.板数按大 黄酚峰计算不低于3000.分离度符合曩卜 01020mlr
u}uumlr
a.对照品;b.样品;C.阴性对照.
图1牛黄消炎片HPIC色谱图
2.6
曲线的制备
精密吸取对照品溶液1,5,12,15,20ffI进 样,按2.1项色谱条件测定峰面积.以峰面积为纵 坐标,对照品大黄素,大黄酚浓度(g?mI) 为横坐标计算,分别得到回归方程为: l黄素一2.481214358×10X一7.739007727
r一0.9999
y大黄酚一8.95512516×l0.1.039431955×10 r一0.9999
线性范围:大黄素为0.04,0.8pg;大黄酚为 0.0196~0.392pg.
2.7精密度试验
取对照品溶液,重复进样5次,每次10ffL, 测得大黄素峰面积的RSD为0.23,大黄酚峰面 积的RSD为0.10.
2.8稳定性试验
取牛黄炎片样品溶液(批号为060907),在 0,0.5,1一7,9h分别进样10ffL,记录峰面
积,大黄素蜂面积的RSD为0.35(一6),大黄酚峰面积的RSD为0.60(===6),可见供试
品溶液在9h_J,i定.
2.9重忡.L-t,z
取牛茸消?片(批号为060907)平行样品5 份,按2.3试品溶液制备法制得5份供试品溶 液,按样r测定法测定,测得供试品中大黄酚平均 含量为36l_97ftg?g,RSD=0.30;大黄素平 均含量为87.67pg?g,RSD=0.29.表明本 法重现性好.
2.10回收率试验
采用加样回收法,分别精密称取已知含量的牛 黄消炎片(批号为060907,大黄酚含量为 361.97fig?g,大黄素含量为387.67fig?g)供 试品,精密称定,置50mI锥形瓶中,分别精密加 入2.2中对照品混合溶液5mI,精密加入甲醇 20mI,按2.3项下制备供试品溶液,各取10ffL 进样,记录色谱图,计算回收率,见表1,表2. (下转第250页)
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250中国药事2008年第22卷第3期 2.5线性关系考察
精密吸取血竭素高氯酸盐标准溶液0.25, 0.5,1.0,1.5,2.0,2.5mI,分置于10mI量
密吸取 瓶中,配成一系列对照品溶液.分别精
20p.L注入HPLC色谱仪,以进样浓度为横坐标,
以峰面积积分值为纵坐标,计算,回归方程: y一1.87323×10X一5.9298×10r=O.9995 表明血竭素高氯酸盐在0.0888,0.8880mg?mL. 浓度范围内呈良好的线性关系.
2.6精密度试验
精密吸取同--~Ict供试品溶液,分别重复进样5 次,测得峰面积平均值的RSD为0.70. 2.7重复性试验
取同一批号样品,取样6份,按上述方法制备供 试品溶液,测定,结果平均含量的RSD为1.91. 2.8稳定性试验
取同一份供试品溶液,分别在0,2,4,8, 12小时进样测定,结果表明供试品溶液在12小时 内稳定,RSD为1.22.
2.9阴性对照试验
按上述色谱条件,分别取对照品溶液,样品溶 液及阴性样品溶液各20ffL,注入色谱仪.测定, 阴性样品在血竭素高氯酸盐出峰处无干扰峰出现, 表明本法可行.见图1.
2.10回收率试验
精密称取已知含量的样品9份,分3组加入不 同体积的血竭素高氯酸盐对照品溶液(相当于样品 含量的5O,100,150),按上述方法测其含
量,计算回收率,平均回收率为97.48,RSD= 2.74
2.1l样品测定
按上述色谱条件测定3批样品含量,结果见表1. 246810'2'41et/rain a.对照品;b.样品;c.阴性对照;1.血竭素高氯酸盐.
图1伤科八厘散HPLC色谱图
表1样品含量测定结果(n=3)
3讨论
实验结果表明法专属性强,简单易行,阴性
无干扰,可满足伤科八厘散中的血竭素高氯酸盐的 含量测定要求.在供试品溶液制备中,比较了振摇 3,5,10min的提取效果,结果表明振摇3min已
提取完全.
参考文献:
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2.11样品测定
取3批样品,依2.3项分别测定结果.
表3样品测定结果(一3)
厂家及批号大黄素含量大黄酚含量
——
!些:坚:!
药都制药集团(060907)387.67361.97 哈药集团世一堂(0603316)426.53360.92 哈尔滨华羽集团(20060801)541.39459.09 3讨论
从精密度,重现性,稳定性及回收率的实验表
明,本方法灵敏,快捷,准确,可用于牛黄消炎片
中大黄素与大黄酚的测定.
参考文献:
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