食物中钙的测定方法

食物中钙的测定方法 一、原子吸收光谱分光光度计法 1.原理 每种元素的原子能够吸收其特定波长的光能，而吸收的能量值与该光路中该元素的原子数目成正比。用特定波长的光照射这些原子，测量该波长的光被吸收的程度，用标准溶液制成校正曲线。根据被吸收的光量求出被测元素的含量。 2.适用范围 依据中华人民共和国国家标准，钙:GB12396-90。适用于所有食品及保健品中元素含量的测定，其元素含量在1mg/kg浓度以上。 3.仪器 原子吸收光谱分光光度计 4.试剂 (1) 硝酸(GB) 高氯酸(GB) (2) 混合酸消化液:硝酸+高氯酸 按4:1混合 (3) 0.01mol/L 8-羟基喹啉溶液: A. 配制1mol盐酸(GB)溶液 B. 称1克8-羟基喹啉,用1mol盐酸定溶至10mL C. 将上述溶液倒入容量瓶,定溶至1000mL。 (4) 1%镧溶液:称量11.725克La2O3(纯度为99.99%)，加25mL 盐酸(GB)，使之溶解，用去离子水定溶至1000mL，即成。 (5) 去离子水:(KΩ)80万以上。 (6) 国家标准物质研究中心提供的标准贮备液:钙标准溶液，标准液浓度均为1000μg/mL (7) 标准质控物:国家标准物质研究中心提供的猪肝粉，室温干燥保存。 (8)标准储备液配制:吸取以上钙标准溶液0.25mL,移入10 mL容量瓶中,然后用稀释用溶液(镧或8-羟基喹啉)定容至10mL。标准溶液须放聚乙烯瓶内，4?冰箱保存 5.操作步骤 5.1样品制备:每种样品采集的总重量不得少于1.5Kg，样品须打碎混匀后再称重。鲜样(如:蔬菜、水果、鲜鱼等)应先用水冲洗干净后，再用去离子水充分洗净，凉干后打碎称重。所有样品应放在塑料瓶或玻璃瓶中4?或室温保存。 5.2 样品消化:准确称取样品干样(0.3-0.7g左右),湿样(1.0g左右),饮料等其他液体样品(1.0-2.0g左右),然后将其放入50mL消化管中,加混酸15mL左右,过夜。次日，将消化管放入消化炉中，消化开始时可将温度调低(约130?左右)，然后逐步将温度调高(最终调至200?左右)进行消化，一直消化到样品冒白烟并使之变成无色或黄绿色为止。若样品未消化好可再加几毫升混酸，直到消化完全。消化完后，待凉，再加5mL去离子水，继续加热，直到消化管中的液体约剩2mL左右，取下，放凉，然后转移至10mL试管中，再用去离子水冲洗消化管2-3次，并最终定溶至10mL。 样品进行消化时，应同时进行空白消化。 5.3 测定:将标准储备液配置成不同浓度系列的标准稀释液，以备上机使用。 不同浓度系列标准稀释液的配制 元素 储备液浓度 吸取量 稀释体积 标准系列浓度 稀释用溶液 μg/mL mL mL μg/mL Ca 25 1.0 25 1.0 1%镧溶液 3.0 3.0 或 5.0 5.0 8-羟基喹啉溶液 实验条件:测定钙的波长为422.7nm仪器狭缝为0.5nm，灯位置、及电流等均按仪器使用说明调制至最佳状态，然后点火准备测定，首先，以各标准系列绘制标准曲线，然后逐一测定空白及样品，样品及空白均 应先用8-羟基喹啉或1%镧溶液稀释后上机测定。 6.计算 根据仪器测定出的数据，代入公式进行计算。 (c-c0)×V×f×100 X (mg/100g)= ---------------------------- m×1000 式中: c----测定样品中元素的浓度 mg/L c0---空白值 V----样品定溶体积 mL f-----稀释倍数 m----取样量 g (固体重量为g ，液体为mL) 钙的最低检出限为0.1μg/mL 7.注意事项 样品处理要防止污染，所用器皿均应使用塑料或玻璃制品，使用的试管器 皿均应在使用前泡酸，并用去离 子水冲洗干净，干燥后使用。样品消化时注意酸不要烧干，以免发生危险。 二、 滴定法 (EDTA法) 1原理 钙与氨羧络合剂能定量地形成金属络合物，其稳定性较钙与指示剂所形成的络合物为强。在适当的pH值范围内，以氨羧络合剂EDTA滴定，在达到定量点时，EDTA就自指示剂络合物中夺取钙离子，使溶液呈现 游离指示剂的颜色(终点)。根据EDTA络合剂用量，可计算钙的含量。 2.仪器 (1) 微量滴定管(1-2mL) (2) 碱式滴定管(50mL) (3) 刻度吸管(0.5-1mL) (4) 试管 3.试剂 (1) 硝酸(GB) 高氯酸(GB) (2) 混合酸消化液:硝酸+高氯酸 按4:1混合 (3) 25mol/L氢氧化钾溶液:称取71.13克氢氧化钾，用去离子水定容至1000mL (4) 1%氰化钠溶液:称取1.0克氰化钠，用去离子水定容至100mL (5) 0.05 mol/L柠檬酸钠溶液:称取14.7克柠檬酸钠，用去离子水定容至1000mL (6) EDTA溶液:称取4.50克EDTA(乙二胺四乙酸二钠)，用去离子水定容至1000mL使用时稀释10 倍即可。 (7) 钙红指示剂:称取0.1克钙红指示剂，用去离子水使其溶解并定容至100mL，此指示剂在4?冰箱 中可保存1个月。 (8) 去离子水:(KΩ)80万以上 以上试剂均需使用优级纯试剂，并放4?保存 (9) 氨羧络合剂为乙二胺四乙酸的二钠盐 (10) 国家标准物质研究中心: 钙标准溶液浓度为1000μg/mL (11) 钙标准储备液配制:取10mL标准溶液，移入100 mL容量瓶中，用去离子水定容至100mL 4.操作步骤 (1) 标定EDTA浓度:取0.5mL钙标准储备液，用EDTA溶液滴定，标定其EDTA的浓度，根据滴定结 果计算出每毫升EDTA相当于钙的毫克数，即滴定度T (2)样品及空白滴定:吸取0.1mL样品消化液及空白液于试管中，加1滴氰化钠溶液和0.1mL柠檬酸钠溶液，用滴定管加1.5mL氢氧化钾溶液，再加3滴钙红指示剂，立即以稀释10倍的EDTA溶液滴定，直 到指示剂由紫变蓝为止。 5.计算: T×(V-V0)×f×100 X (mg/100g)= --------------------------- m 式中:T---EDTA滴定度 mg/mL V----滴定样品时所用EDTA量 mL V0---滴定空白时所用EDTA量 mL v----样品定溶体积 mL f-----稀释倍数 m----取样量 g (固体重量为g ，液体为mL) 本方法的检测范围为:5-50μg 6.注意事项 样品处理要防止污染，所用器皿均应使用塑料或玻璃制品，使用的试管器 皿均应在使用前泡酸，并用去离子水冲洗干净，干燥后使用。样品消化时注意酸不要烧干，以免发生危险。加指示剂后，不要等太久，最 好加后立即。加氰化钠和柠檬酸钠目的是除去其他离子的干扰。滴定时的pH为12,24