槟榔碱论文：槟榔碱对胎鼠外周血细胞DNA的影响

槟榔碱论文：槟榔碱对胎鼠外周血细胞DNA的影响 槟榔碱论文:槟榔碱对胎鼠外周血细胞DNA的影响 【摘要】目的 通过检测槟榔碱对胎鼠外周血细胞dna损伤的程度和观察胎鼠生长发育情况，探讨槟榔碱对小鼠胚胎毒性的影响。方法 使用槟榔碱给雌鼠灌胃6—8周后，与雄鼠合笼，孕16d后各组随机取孕鼠6只，剖腹取胎鼠，检测各组胎鼠的外周血细胞dna损伤情况，并进行分析。孕19d后处死各组孕鼠，检测胎鼠的生长发育情况以及各组胎鼠的畸形发生率。结果 正常的对照组胎鼠外周血细胞dna出现典型的原型，而实验组的胎鼠外周血细胞dna出现特征性的彗星形态。于孕19d处死各组动物，发现实验组动物胎鼠的生长发育指标包括身长、体重、尾长小于对照组，畸形发生率高于对照组。结论 槟榔碱能对胎鼠外周血dna造成一定程度的损伤，并对胎鼠各项生长发育指标均有影响，推测槟榔碱对胚胎产生一定毒性影响。 【关键词】槟榔碱 dna损伤 胎鼠 生长发育 the effect of arecoline on the dna of fetal rat’s peripheral blood cell deng jie luo wen-qi* wang yu-jia yang jin peng rong li qiang (changsha medical university,changsha,hunan,410219) 【abstract】objective to study the effects of arecoline on the embryo toxic by means of examine the damage of dna in the peripheral blood cell andfetus’growth developmentmethods keep giving mice arecoline for 6-8 weeks by oral administration, let female mice get pregnate. after 16d later,get the fetus from6pregnant rats of each group, examine and analysis the damage of dna in the peripheral blood cell.after 19d, get all the rest of fetus, recording the growth,development and the rate of the foetal deformities. results the dna of contrast group’s form is normal, but the dna of experimental group has been damaged. the growing development include the length, weight, tail length and the rate of foetal deformities are irregular than contrast group. conclusion the arecoline have got definite damage action on dna in peripheral blood cell of fetus and have effects on fetus’ growing development, the result suggested that arecoline possessed some embryo toxic. 【key words】arecoline damage of dnafetal ratgrowing development 1 引言 全世界约有6亿槟榔嗜好者，而且近年来嚼食人数还有增加趋势。槟榔碱是从天然棕榈科植物槟榔的种子中提取的一种胺类生物碱，槟榔的化学成分复杂，而槟榔碱是槟榔的主要成分,有一定毒性。关于槟榔碱的毒理学作用已有许多报道，以往的研究表明，槟榔碱对小鼠骨髓细胞的dna有一定的损伤作用, 具有一定的遗传毒性 ，对胚胎发育具有延迟作用。但对于槟榔碱对是否会对孕鼠产生一定毒性反应，是否会通过孕鼠影响到胎鼠的相关报道很少，而生殖毒性却是在如今越来越受到人们的关注。本文旨在探讨槟榔碱对小鼠妊娠毒性和胎鼠外周血细胞dna的影响。 2 实验材料 2.1 实验小鼠 6—8周龄雌性昆明小鼠，购于湖南农业大学实验动物中心。 2.2 仪器 电泳仪: 北京君意东方电泳有限公司 荧光倒置显微镜:日本olympus公司 2.3 主要试剂 氢溴酸槟榔碱( arecoline hydrobromide ,arec) ,购自sigma 公司 彗星实验试剂盒:购于普洛麦格(北京)生物技术有限公司 scge碱性电泳缓冲液(ph13.0):naoh 12g，edta0.37224g，加ddh2o定容至1000ml。 scge中和液(ph7.5):tris 48.5g，加ddh2o定容至1000ml。 3 实验方法 3.1 小鼠妊娠毒性模型的建立 健康雌性昆明小鼠共45只，体重25g左右，未经产，鼠龄6—8周龄。随机分为3组，每组15只，第1组为空白对照组，第2实验对照组，第3组为实验组。实验组用槟榔碱灌胃(arec，40mg/kg)，1次/d，连续6—8周，实验对照组同对照组以相同的剂量和方式给小鼠灌生理盐水，空白对照组不做任何处理。连续灌胃6周后与正常雄鼠2:1合笼，次日检查阴栓，阳性者定为受孕0.5d。设空白对照为control组、连续6周生理盐水灌胃为w6p-组、连续6周槟榔碱灌胃为w6p+组。 3.2 碱性单细胞凝胶电泳(scge)检测槟榔碱对胎鼠外周血细胞dna的损伤孕16d后各组随机取6只孕鼠，剖腹取胎鼠，每胎取胎鼠6只，断头取全血，严格按照彗星实验试剂盒说明书制作切片。在荧光显微镜下观察实验结果，激发 光为波长540nm的绿光，得到黑色背景，红色dna彗星图像，拍照。选用彗星细胞发生率(%)和迁移距离判断外周血细胞dna损伤及其损伤程度。 3.3 各组胎鼠生长发育指标和畸形发生率 各组余下孕鼠19d后剖腹取胎鼠，统计control、w6p-、w6p+各组妊娠小鼠的胎鼠的畸形发生率和生长发育指标，采用spss 18.0 统计软件t检验，p0.05，无统计学意义。 表1 胎鼠外周血细胞dna损伤 注:a:与control组比较，p>0.05,b:与control比较，p 4.2 胎鼠生长发育指标和畸形发生率 由表2可见，w6p+ 组胎鼠畸形发生率高于w6p-组和control组，且w6p+组胎鼠的总数、体重、身长和尾长均明显低于w6p-组和control组，表明槟榔碱在孕鼠妊娠期对胚胎产生了一定的毒性作用，使胎鼠的生长发育受到影响。 5 讨论 生殖毒性指对雄性和雌性生殖功能或能力的损害和对后代的有害影响。生殖毒性即可发生于妊娠期，也可发生于妊娠前期和哺乳期。生殖发育毒物或其他环境因素与机体接触后, 可干扰生殖发育任何环节, 并且造成损伤作用。槟榔的有关毒性研究较多, 研究者采用不同的实验方法, 对食用槟榔进行了研究。结果表明, 槟榔对口腔粘膜细胞、人颊 部上皮细胞、免疫细胞、生殖功均能造成损害。本实验对槟榔碱是否对胎鼠外周血dna产生损伤作用以及对胎鼠生长发育的影响进行了研究。anupam chatterjee*, shampa deb认为，口服槟榔碱比静脉注射更加能诱导癌细胞的发生率，推迟细胞周期，而槟榔碱作为一种地方性传统咀嚼物，评价其毒性作用以口服方式建立模型更为恰当。所以本实验采用灌胃法建立动物模型。 实验用槟榔碱连续6—8周给小鼠灌胃，灌胃采用的计量是根据周绪正等对小鼠和大鼠口服氢溴酸槟榔碱的急性毒性试验数据所制定的,并且口服剂量大致与人体实际食用水平比较接近，其结果对评价槟榔碱对小鼠的生殖和胚胎发育毒性将具有更大的意义。建立雌鼠生殖毒性的模型后，合笼受孕，分为继续灌胃w6p+组和不继续灌胃w6p-组。tsai和ys,lee等发现槟榔碱能触发dna损伤，并抑制dna自我修复。于是在实验中利用单细胞凝胶电泳(scge)技术,检测胎鼠外周血细胞dna是否有损伤，统计各组的损伤情况。实验结果表明，w6p+组dna迁移距离与彗星发生率均[(28.20?5.6)μm，31%](图5-6)，明显高于 w6p-[(5.14?0.7)μm,2%]和 control组[(4.95?1.3)，μm,2,]，差异有统计意义，p<0.05。图1-4中有个别彗星拖尾现象，属正常的细胞凋亡，彗星发生率<5%表示无损伤。 有研究表示器官形成期雌鼠经口暴露诱变物质对子代胚胎的生长发育有影响, 表现为胎鼠的畸形发生率增加。本实验结果显示w6p+ 组胎鼠畸形发生率高于w6p-组和control组，且w6p+组胎鼠的总数、体重、身长和尾长均明显低于w6p-组和control组，提示槟榔碱在体内可抑制胚胎的生长发育，具有胚胎发育毒性，推测其原因可能是槟榔碱或其代谢产物对胚胎的毒作用，或者可能是槟榔碱对胎盘的损伤作用所致。dasgupta r,saha i,pal s等认为槟榔碱对小鼠免疫功能有影响，在胚胎发育过程中，诱变物质对胚胎的早期发育影响是极大的，提示孕妇在妊娠期要注意避免致畸原。 参考文献 [1] 黄永华.槟榔有效化学成分分析测定. 食品与机械,2002,7(3): 38-39. [2] 尹晓敏， 彭解英， 方厂云,等.槟榔碱诱导体外培养的血管内皮细胞凋亡研究.临床口腔医学杂志，2004，20(7):396-398.