日本血吸虫蛋白水解酶对不同宿主血红蛋白降解作用的研究

日本血吸虫蛋白水解酶对不同宿主血红蛋白降解作用的研究 日本血吸虫蛋白水解酶对不同宿主血红蛋 白降解作用的研究 C吟.钦白"鬲确z欲中国寄生虫学与寄生虫病杂志19~9;(1):60 ———— 兰竺竺绛爵,一 日本血吸虫蛋白水解酶 对不同宿主血红蛋白降解作用的研究{. 2 / l武慢市职工医学院寄生虫学教研室武汉43O.162同济医科大学寄生虫学教研室 武汉4SOOSO 宋文刽玛友仁孔争'杨金兼 }———一———一 日本血吸虫的终宿主为哺乳动物,血吸虫在哺乳动物体 内生长发育的主要营养来源于宿主的血红蛋白(Hb).血吸 虫晡道中具有专一降解宿主血红蛋白的蛋白水解酵"一.不 同的哺乳动物对日本血吸虫的相容性不同?.本文就日本血 吸虫对不同宿主Hb的降解作用进行了研究. 与方法 1血吸虫蛋白水解酶的制备及酶活性测定 1.1家兔经腹部皮肤感染日本血暇虫尾蚴1000条,45d剖 杀按Dresden方法收集成虫.用生理盐水洗2次,蒸馏水 洗1次后嗳干水分,取成虫5O条,加pH4.0,02moi/L柠 檬酸盐缓冲液于玻璃研磨器中,置冰水浴,充分研磨,4?冷 授2h后.10000g离心1orain,用美国Pierce公司试荆盒 (BCA—reagent)测上清液蛋白质古量,分装后,置一4oc保 存备用. 1.2琅浓度为100rag/m1的人Hb80ml,蛋白古量为1 mg/mi的蛋白水解酶]20,加入pH4.0,0.04mol/L柠 檬酸盐缓冲液800中,置37?温育.2h内.每隔30rain, 移出200反应液,最后加入终禳度为7的三氰酷酸终止 反应,10000g离心10rain.用紫外分光光度计,于280nm 处,测不同时间反应液上清的哨光值,并绘制酶活性曲线 2血红蛋白的制备人血红蛋白由上海市医学生物化学研 究所提供,黄牛,绵羊,家兔和小鼠血红蛋白由Sigma公司 提供.家鸡血红蛋白制备方法如下:切断家鸡颈动脉,将血收 集于古柠檬酸抗凝剂的烧杯中,混匀后3000g离心5rain, 弃上清沉淀物用生理盐水洗3次后+加入2倍体积的pH 8.6巴比妥缓冲液,反复冻融后1o000g离心10rain.收集 上清,用上法测蛋白质古量后,置一4oc保存备用大鼠血红 蛋白的制备同家鸡. 3蛋白水解酶对不同宿主Hb降解能力的测定调整各待 测Fib的浓度至100mg/ml,各取8o,分别加入120的 ,再加入pH4.0 蛋白水解酶(蛋白质古量为1mg/m1)中 0.04mol/L柠檬酸盐缓冲液800,将总体积为1oo01的 反应液置37?温育2h后,加终浓度为7的三氯醋酸终 止反应+10oo0g离心10rain,用紫外分光光度计于280 nm处测各上清液的消光值. 结果与讨论 酶活性测定显示,由日本血吸虫提取的蛋白水解酶对人 Hb具有降解作用.在0,90mln内,降解程度随着时间延长 而呈线性增加.90rain后,Hb的降解程度趋于稳定.在相同 条件下,日本血吸虫蛋白水解酶对不同宿主Hb降解作用的 强弱依次为羊,人,黄牛,大鼠和鸡』,,牛,羊,兔和小鼠 Hb的降解作用无显着性差异(P>0.05),但均明显高于尢 鼠和鸡(P<0.05) 宿主对寄生虫的相容性和寄生虫对宿主的特异性是宿 主与寄生虫在长期进化过程中形成的,不仅与环境而且与两 者的遗传基因密切有关日本血吸虫对终宿主一一哺乳动物 的选择性范围较广.但不同哺乳动物对血吸虫的相容性有所 不周何毅勋等一在相同条件下,日本血吸虫在山羊,小 鼠,家大,家兔,穰,黄牛,豚鼠,绵羊,大鼠和猪体内的 发育率依次为60.3,59.359.0,52.3,46.0, 43.6,35.2,30.3,2O.9和8.5,马和水牛的均在 1%以下.在这些宿主中,成熟血吸虫的大小相关明显,雄虫 在黄牛体内着小,且大鼠未见虫卵',此结果进一步提示.营 养障碍可能是虫体在宿主体内正常笈育的重要原园之一.已 知在宿主血清中存在蛋白酶抑制物,日本血吸虫Hbase对 不同动物Hb降解能力的差异可能与此有关.对日本血吸虫 相窖性较差动物可能高于适宜的终宿主.羊,人黄牛,家兔 及小鼠为日本血吸虫适宜宿主,大鼠为日本血暇虫的非适宜 日本血吸虫蛋白 终宿主,而鸡为非终宿主本研究结果证明, 水解酶对适宜终宿主Hb的降解作用明显高于非适宜终宿 主及非终宿主(P<0.05)提示日本血吸虫在动物体内的发 育率.可能与血吸虫蛋白水解酶对不同动物Hb的降解能力 有关. 叁考文献 1TimmsAR,BuedlngE.Studiesofaproteolytlcenzymefrom 5chi~ommamamo~i,BrjPharmaco]1959I1468 2ZussmanRAtBaumanPM,PetruskaJCTherole0ingested hemoglobiaInthenutritionoiS~histosomamansoni.JParasito[ 】970{56I75 3赵感先,高淑棼主编.实用寄生虫病学.北京:人民卫生出版社, 1996:17,18 4DresdenMH,DeelderAM&histosomam~&oni{thio[prDI teinaseproperties0adultwormhemoglobinase"E:xpParasito] 1979;48}190 5赵慰先主编人体寄生虫学.第二版.北京:人民卫生出版社. 1994:339,340 1997年10B211=3收稿,1998年2月10日修回 (编辑:庄兆农)