毕业论文-胃复春片对幽门螺杆菌抑制作用的实验研究

毕业论文-胃复春片对幽门螺杆菌抑制作用的实验研究 胃复春片对幽门螺杆菌抑制作用的实验研究 幽门螺杆菌 近年来，临床治疗幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp） 遇到了很大困难，Hp耐药的问题日益严重，如何选择更有效的西药和研究中药对 Hp的治疗，是摆在消化科医生面前的重要任务之一。本实验选用中药胃复春片对 Hp的体外试验，旨在探讨中药胃复春片对幽门螺杆菌可能的抑制作用和临床意义。 1.1 实验材料 (1)菌种： Hp菌株NCTC11637由浙江大学医学院病原生物学系医学细 菌研究室提供。近期从临床胃炎或消化性溃疡患者胃黏膜活检标本中分离了60株 Hp，经系统细菌学鉴定证实为 Hp后保存于-70?。(2)药物：受试药物胃复 春片由杭州市胡庆余堂药业有限公司生产，每片重0.359g； 批号060618；国药准字 Z20040003。对照药丽珠得乐（枸橼酸铋钾颗粒），由丽珠集团丽珠制 药厂生产，国药准字H10900086。将胃复春片碾成粉末，加灭菌蒸馏水4?浸泡 24h，滤除残渣，100?水温15min灭菌。枸橼酸铋钾颗粒先用灭菌蒸馏水溶解， 然后0.22μm滤膜过滤除菌。上述试验药和对照药再用灭菌蒸馏水配制成所需 浓度的溶液。 1.2 实验方法 (1)细菌培养基：采用含5%脱纤维羊血的哥伦比亚琼脂（法国梅丽埃公 司），作为分离和培养 Hp的培养基，同时该培养基也作为药敏试验的基础培 养基。脱纤维羊血购自杭州康裕贸易有限公司， Hp培养时环境气体条件是 5%O2、10% CO2及85% N2（杭州特种气体厂提供）。(2)药敏试验培养基：将上 述哥伦比亚培养基加热充分溶解，冷却至60?左右时加入终浓度为5%脱纤维羊血，再分别加入不同稀释度的上述药物溶液，使培养基所含药物的浓度分别为 0.005、0.01、0.02、0.04、0.08、0.16、0.32、0.64、1.28、2.56、5.12、10.24 mg/ml，倾注平板，37?孵育24 h检菌合格后置4?备用。(3)药物最低抑菌浓度(MIC)测定：采用二倍平皿稀释法。刮取新鲜培养的 Hp菌苔，用灭菌生理盐水充分混匀，用麦氏比浊法配制成1×107/ ml的菌液。取各菌液5μl点种于含药物的平板上，37?培养72h后观察结果。以50%和90% Hp菌株的生长被抑制为该药物的50%最低抑菌浓度（MIC50）和90%最低抑菌浓度（MIC90）。实验中同时设置不加任何药物、正常培养的对照。 正常对照中60株 Hp均生长良好。受试药胃复春片和对照药丽珠得乐对60株 Hp临床分离菌株和标准菌株NCTC11637的MIC测定结果见1。表1 胃复春片和丽珠得乐对60株Hp及NCTC11637的MIC测定结果（略） Hp是一种微需氧的革兰阴性螺旋形细菌，主要栖居于人胃黏膜的黏液层，被 认为是慢性胃炎、消化性溃疡的重要致病因素，并与胃癌的发生也有一定关系。 新近研究发现Hp感染与胃肠外疾病如心血管疾病等也有一定相关性。因此，Hp 感染及其相关疾病已成为一个严重的问题。Hp在人群中感染率约为60%～70%，慢性胃炎或消化性溃疡患者中可高达70%～90%左右。人胃是Hp感染的主要栖居场所。随着对抗Hp感染治疗的深入，发现 Hp耐药的问题日益严重。据国外 资料报道，Hp对克拉霉素的耐药率在3%～14%［１～３］，对甲硝唑的耐药率 在20%～40%［４］，某些发展中国家可高达50%～80%［５］。国内资料显示， 克拉霉素的耐药率为6.1%～25%［６～９］，且有上升的趋势。 中成药胃复春片是纯中药制剂，临床广泛用于慢性浅表性胃炎、萎缩性胃炎、肠腺化生、 肠上皮不典型增生、功能性消化不良等症。本实验结果表明，胃复春片具有一 定的体外抑制 Hp作用，虽然达到MIC90所需的药物浓度是丽珠得乐的4倍。在先前作者的研究也表明，某些药物虽无具备直接抑制Hp的成分，但确有抑制 Hp的作用［１０］。国内应用中药对Hp治疗进行了许多研究，结果发现确有 30～40味中药或6个以上复方有不同程度的抗Hp作用。某些中药及非抗生素 类非铋剂类西药对 Hp的抑菌作用，推测除了直接作用外可能与其改变了Hp赖以生存的局部胃内环境有关。胃复春可能亦有此作用。椐此作者认为抗生素耐 药现象日益严重的今天，不断开发治疗Hp的新药，包括中西医结合治疗，是避 免耐药菌株产生的有效方法，中药及非抗生素类非铋剂类西药作为抗Hp的二线或后续治疗的作用，值得临床进一步研究。 1 Franzin L, Pennazio M, Caboli D, et al. Clarithromycin and amoxicillin susceptibility of Helicobacter pylori strains isolated from adult patients with gastric or duodenal ulcer in Italy. Curr Microbiol， 2000,40:96～100. 2 Taylor DE, Jiang Q, Fedorak RN, et al. Antibiotic susceptibilities of Helicobacter pylori strains isolated in the Province of Alberta. Can J Gastroenterol， 1998,12:295～298. 3 Savarino V, Zentilin P, Pivari M, et al. The impact of antibiotic resistance on the efficacy of the three 7-day regimens against Helicobacter pylori. Aliment Pharmacol Ther, 2002,14:893～900. 4 Pillotto A, Rassu M, Leandro G, et al. Prevalence of Helicobacter pylori resistance to antibiotics in Northeast Italy: a multicentre study. GISU. Interdisciplinary Group for the Study of Ulcer. Dig Liver Dis, 2000,32:763～768. 5 Torres J, Camorlinga-Ponce M, Perez-Perez G, et al. Increasing multidrug resistance in Helicobacter pylori strains isolated from children and adults in Mexico. J Clin Microbiol, 2001,39: 2677～2680. 6 张晓光，胡品津，陈为，等. 广东地区幽门螺杆菌耐药的调查.胃肠病学，2001，6(1)：A66. 7 成虹，胡伏莲.北京地区幽门螺杆菌耐药的临床研究. 胃肠病学，2001，6(1)：A31. 8 史彤，刘文忠，萧树东，等. 上海地区幽门螺杆菌对 抗生素耐药率的变迁. 中华内科杂志，2000，39（8）：576. 9 邵军，扬昭徐，唐明忠，等. 幽门螺杆菌对4种抗菌药物的敏感性检测及意义. 临床检验 杂志，2003，21（4）：219～220. 10 王杭勇，黄怀德，严杰. 麦滋林-S 对幽门螺旋菌的抑菌作用. 浙江医科大学学报，1994，23（1）：22～23.