仙茸壮阳口服液中淫羊藿苷的含量测定

仙茸壮阳口服液中淫羊藿苷的含量测定 仙茸壮阳口服液中淫羊藿苷的含量测定 药物鉴定2004年第13卷第ll期 仙茸壮阳口服液中淫羊藿苷的含量测定 张柳,何静文 (1.广东省佛山市药品检验所,广东佛山528000;2.佛山冯了性药业有限公司,广东佛山528000) 中图分类号:R284.1文献标识码:A文章编号:1006—4931(2004)11—0036一O2 摘要目的:建立仙茸壮阳口服液中淫羊藿苷的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱(HPLC)法,Cs枉,以水一乙腈一冰醋酸(75:24:1)为 流动相.检测波长为270nm.结果:淫羊藿苷在线性范围0.155—2.526tzg内,对照品浓度与峰面积线性关系良好,得线性方程为Y= 测定结果准确,31.165X+1.2676,r=1.000;加样回收率为98.9%.结论:HPLC法简便,重现性好,可用于仙茸壮阳口服液的质量控制. 关键词仙茸壮阳口服液;淫羊藿苷;高效液相色谱法;含量测定 仙茸壮阳口服液由淫羊藿,枸杞子,何首乌,鹿茸等8味中药 组成,具有补肾壮阳的功效,临床用于治疗体虚,阳萎,肾寒….方中 淫羊藿为君药,淫羊藿苷是其主要有效成分,故选作含量测定指 标,采用高效液相色谱法(HPLC法)测定其含量. 1仪器与试药 Agilent1100Series高效液相色谱仪;SP8810高效液相色谱仪; Spectral00紫外检测器;SP4270积分仪;UnlearnUV530紫外可见分 光光度计.淫羊藿苷对照品(批号:0737—200011,供含量测定用, 中国药品生物制品检定所).仙茸壮阳口服液(批号:2003020, 2003021,2003022,某药业有限公司).聚酰胺(80,100目,湖南澧 县化学试剂厂);乙腈:色谱纯(浙江黄岩化工实验厂);水为超纯 水;其他试剂均为分析纯. 2方法与结果 2,1色谱条件 采用Cs不锈钢柱(HypemilODS2,4.6mm×200mm,5m; FujiSilysia,4.6mill×150mm,5tzm);流动相:水一乙腈一冰醋酸 (75:24:1);流速:1.0mL/min;检测波长:270nmI;柱温:室温. 在此条件下,淫羊藿苷与其他成分能够较好地分离(图1). 2.2线性关系考察 05l0l52O2530 A 止一一一一,O5lO152O253O B 05 A.对照品溶液 l01520 C 1.淫羊藿苷 B.阴性样品溶液 2530 C.供试品溶液 精密称取淫羊藿苷对照品适量,加甲醇制成每lmL含淫羊藿图1高效液相色谱图 'l,,,,,,,',,,,,,,,',,,,,,,,,,,,,',,,',,,,',,,,,,,,',,,,,,,,',,,,,,,,',,,,',,,',,,,',,,,,,,,,,,,,,,,,',,, 品采用加样回收率测定法,即取麦白霉素片研细,称取适量,置100mL 量瓶中,以流动相溶解并稀释至刻度,滤过,精密量取适量,照前述 方法,精密加入标准品溶液,同法测定,结果见1. 表l不同厂家麦白霉素片回收率试验结果 注:A为舍肥久联制药有限公司提供的产品,B为重庆科瑞制药有限 责任公司提供的产品. 2.7干扰试验 按处方比例称取一定量空白辅料,按2.8项下方法测定,记录 色谱图,结果空白样品在麦迪霉素A,峰相应的保留时间无吸收峰 (见图1).另以二极管阵列检测器检查在本色谱条件下的主峰纯 度,结果显示麦迪霉素A峰与相邻峰的分离度良好,主峰纯度检 查结果显示麦迪霉素A,峰纯度较高. ? 36? 2.8样品含量测定 取不同厂家的麦白霉素片3批,每批各l0片,精密称定,研 细,精密称取适量,加流动相溶解并稀释成1mL中约含2mg的溶 液,按本色谱条件进行麦迪霉素A,的含量测定,采用外标法以峰 面积按标示量计算,测得结果见表2. 表2样品含量测定结果(%) 3讨论 上述结果表明,本方法回收率良好,辅料无干扰,主峰纯度高, 与相邻峰的分离度大于1.5,麦白霉素片中麦迪霉素A,的含量均 大于35%,故建议在麦白霉素片药品标准中规定麦迪霉素A,的含 量不得少于标示量的35%. 参考文献: 【l1WSt—cz一0019—89,中华人民共和国卫生部药品标准?抗生素药品 第一册【S】. 【2】wst一(x一011)一2002Z,国家药品标准?新药转正标准第二十八册 【S】 (收稿日期:2004一o4—29) 2004年第13卷第1l期 苷7.5,15.0,25.0,37.5,50.0,75.0,125.0Ixg的溶液.吸取 10ILL注入高效液相色谱仪,按含量测定方法测定面积.以对照品 溶液浓度作为横坐标,峰面积作为纵坐标,进行线性回归,得线性 方程为Y=31.165X+1.2676,r=1.000.在线性范围0.155, 2.526Ixg内对照品溶液浓度与峰面积线性关系良好. 23溶液的制备 对照品溶液:精密称取淫羊藿苷对照品适量,加甲醇制成每 1mL中含25g的溶液,即得. 供试品溶液:精密量取装量项下的本品2mL,加入到预先处理 好的聚酰胺柱【聚酰胺(60,80目)5g,湿法装柱,内径1.5cm]上, 以1mL/min的流速,用水50mL洗涤,弃去水液,继用乙醇120mL 洗脱,收集洗脱液,置水浴上蒸于,残渣用甲醇溶解,并转移至 50mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得. 2.4精密度试验 对照品:精密吸取淫羊藿苷对照品溶液20L'按含量测定方 法重复进样5次.结果淫羊藿苷的RSD为0.3%. 样品:取同一供试品(批号:2003020)溶液按含量测定方法重 复进样5次.结果淫羊藿苷的RSD为0.2%. 2.5重复性试验 精密吸取同一供试品(批号:2003020)5份,按含量测定方法测 定.结果淫羊藿苷的RSD为0.2%. 2.6稳定性试验 精密吸取同一对照品溶液分别于0,2,4,6,24h,分次注 入高效液相色谱仪,按含量测定方法测定.结果淫羊藿苷的RSD 为0.5%. 精密吸取同一供试品(批号:2003020)溶液分别于0,2,4, 6,24h,分次注入高效液相色谱仪,按含量测定方法测定.结果淫 羊藿苷的RSD为0.8%. 2.7回收率试验 精密吸取淫羊藿苷对照品溶液(252.6Ixg/mL)5mL,置蒸发皿 中,水浴蒸去甲醇.精密量取供试品(批号:2003020,浓度为含淫羊 藿苷637.90Ixg/mL)2mL,加入蒸发皿中,稍加热并搅拌使淫羊藿 苷溶解并混匀,将样品液加于聚酰胺柱上,将蒸发皿用水洗涤干 净,洗液加于柱上,按含量测定方法进行测定,并计算回收率.结果 见表1. 表1回收率试验结果 2.8样品含量测定 取3批样品,按供试品 溶液的制备方法处理并测 定,用外标法计算样品中淫 羊藿苷的含量.结果见表2. 2.9空白试验 表2样品含量测定结果 批号含量(mg/支) 12平均 药物鉴定 取按处方比例及制法制备的缺淫羊藿阴性样品,按供试品溶 液的制备及测定方法进行处理和测定.结果未见阴性样品溶液对 测定有干扰(图1B). 3讨论 3.1测定波长的选择 取淫羊藿苷对照品溶液,于200,320nln波长范围内扫描,结 果在270nm波长处有最大吸收,参照2000年版《中国药典(一 部)》淫羊藿含量测定项,确定270nm为测定波长. 3.2流动相的选择 药典收载淫羊藿含量测定项下的流动相为乙腈一水(30:70), 经试验发现,由于供试品成分复杂,被测组分与杂质未能有效分 离,故改变乙腈与水的不同配比,结果乙腈一水(23:77)比其他配 比对淫羊藿苷的分离都好,但仍不理想,加入一定量的冰醋酸后, 使弱酸性化合物分离效果更佳.经过多次试验,最后确定水一乙腈一 冰醋酸(75:24:1)为最佳配比,被测峰后面再没有干扰峰,且能达 到基线分离.还尝试了用不同比例的甲醇一水,甲醇一冰醋酸一 水,甲醇一0.2mol/LNaH:PO作流动相,但分离效果都欠佳. 3.3提取方法选择 直接法:将样品直接注入液相色谱仪中,测定淫羊藿苷的含 量,但杂质量太大,分离效果不理想. 萃取法:分别用醋酸乙酯I0和正丁醇进行萃取样品,杂质量 可大大减少,但所用溶剂量太大,且样品又未达到基线分离. 大孔树脂柱分离法Il:取样品过大孔树脂柱(D101),以醋酸乙 酯作洗脱剂时,用量超过150mL,尚未能将淫羊藿苷洗脱完全;以 乙醇作洗脱剂时,基本上可将杂质与被测物同时洗脱出来,分离效 果不理想. 聚酰胺柱分离法:将样品过聚酰胺柱(80,100目),以醋酸乙 酯作洗脱剂,用量超过150mL后仍可测出淫羊藿苷峰,说明洗脱 不完全,后确定以乙醇作洗脱剂.精密吸取口服液2mL,置聚酰胺 柱上,先用水50mL洗涤,弃去最初的30mL水液,分别收集31, 40mL水洗液及41,50mL水洗液,后用乙醇洗脱,分段收集乙醇 洗脱液:0,60mL,61,80mL,81,100mL,101,120mL,将分段收 集的水洗液及醇洗液,分别置水浴上蒸于,加甲醇溶解并定容,过 滤,取滤液20,分别注入色谱仪中,记录峰面积.从试验结果可 知,50mL水洗样品未发现有淫羊藿苷被洗出,80mL醇洗已经将 淫羊藿苷洗脱完全,考虑到每批样品中含淫羊藿苷的量有差异,故 最终确定洗脱剂用量为100mL. 参考文献: 【1】国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)【M】.北京:化学工业 出版社.2000:267. 【2】WS一B一0249—90,中华人民共和国卫生部药品标准-中药成方制荆 第二册【s】. 【3】叶丽卡,李国秀,陈妍妍,等.HPLC法测定生物样品中淫羊藿苷的浓 度【J】,药物分析杂志,1998:l8(1):15一l8. 【4】张林,杨瑞琪.HPLC法测定复方蛾公口服液中淫羊藿含量【J】.黑 龙江医学,2001:25(4):258—259. 【5】王树松,王晓风,徐铎,等.HPLC法测定益肾口服液中淫羊藿含量 【J】.解放军药学,2001,17(5):282—283. (收稿日期:2004—03—02) 中国药业ChinaPharmaceuticals?37?