[doc] 犬腺病毒1型流行毒株的分离与鉴定
犬腺病毒1型流行毒株的分离与鉴定
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研究原着?
第四军医大学(JFourthMi1MedUniv)2000;21(6)
2790(2000)06—0734—02 文章编号:1000—
7病毒I型流行毒株的分离与鉴定S6s-J一
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李秦,金昌李六金,张海,师长宏,赵世君(第四军医大学实验动物研究中心,陕西西安710033)
;胁3雹特
中圈号:$852.653文献标识码:A
摘要:目的分离,鉴定犬腺病毒I型流行毒株.方法将
处理过的病犬肝组磬{悬液,感染原代犬胎肾细胞.用血凝试
验.中和试验,回归试验以及电镜观察等方法,分离,鉴定.
结果分离出一株犬腺病毒I型流行毒株,命名为CAV
XN株.结论该毒株与标准毒株的生物学特性一致.
IsolationandidentificationofcanineadenovirusI
LIQin,JINChangDeLILiu—Jin,ZHANGHai,
SHIChang—Hong,ZHAOShi—Jun
LaboratoryAnimalResearchCenter,FourthMill—
taryMedicoIUniversity.Xi’an710033,China
Keywords:canineadenovirusI{isolationjidentification
Abstract:AIMToisolateandtOidentifycanineadenovirus
1.METHoDSToisolateadenovirusIformcanine1iver
tissuesuspensiondisposedbyalcoholandchlorofrom,weused
synchronousinoculationtOinfectcanineemhryokidneycells
andidentifiedthevirusthroughbloodcoagulationtest,neu—
tralizationtest,animaIexperiment,andelectronmicroscopic
observation.RESULTSCAVwasisolatedfromsickcanine
livernamedCAV】一XN3.CONCLUSIONCanineadenovirus
Ihassimilarbiologicalpropertiestothestandardvirusoser—
vation.
O引言
犬传染性肝炎是由犬腺病毒I型(Canineaden—
ovirusI,CAV)引起的一种急性,败血性传染病.自
1947年发现了犬传染性肝炎后,1959年又成功分离
获得犬传染性肝炎病毒.1984年,在我国首次分离到
收藕日期:199912—01;修回日期:2000-01—10
基盒项目;臃西省自然科学基金AV一N株由南京警犬研究所
提供;病犬肝组织样品由临床病犬获得;豚鼠抗血清
和兔抗血清自制.
1.2方法采用血凝范围试验,细胞感染范围试
验,理化特性鉴定,动物感染范围试验,交叉中和试
验等方法对病毒进行分离,鉴定D].
2结果
2.1病毒分离及感染细胞范围CAVXN.毒株在
MDCK细胞上增殖和适应过程中,CPE不明显,培养
后期偶尔看到蜘蛛网状病变,1,6代细胞毒的HA
不稳定,传至12代时,HA稳定,CAV一XN.株
TCID.为1O,10.?mL_..二十
面体对称,无囊膜.在衣壳的顶端有时可看到纤维突
(Fig1).
2.4病毒理化特性鉴定CAV一XNa经胰酶处理
后,其TCID;.与对照组的对数差均未超过1.0,表明
CAV一XN.株没有囊膜,并对乙醚,酸具有耐受力.
第四军医大学(JFourthMLlMedUniv)2000;21(6
图1犬腺病毒I型(CAV.一XN)病毒流行株的结构
Flg1Structureofcanineadenov[rusI—XNjstrain
2.5生长抑制试验及对胰酶依赣性试验CAv一
XN在5碘脱氧尿嘧啶环境中增殖力受到了抑制,证
明该病毒系DNA病毒类的成员,经胰酶处理后,该
病毒的增殖力未受到影响,其TCID.值与对照组相
差无几,进一步证明其不具有囊膜结构.
2.6康复犬血清中和抗体效价测定中和指数为
149.62,证明人工感染后犬血清具有较高的中和效
价.
2.7新生犬的人工感染在P3级实验条件下,用
CAV一XN.株对4只母源抗体阴性犬作人工感染,4/
4只发病,3/4只死亡.病理解剖可见病犬肝组织损
伤严重,腹水增加,肝呈红色,肝脏肿大1.5倍,胆囊
水肿.取病犬第3日的尿液10倍稀释接种地鼠肾细
胞,亦回收到CAV.但以同样的病毒感染的2只仔
犬,却未出现腹泻临床症状,且均健康成活,证明
CAVXN株对其有母源抗体的新生犬不再具有致
病性.
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2.8血清中和试验结果CAVXN阳性血清能显
着(P<O.O1)抑制CAV一XN;毒株,CAV一XN.抗血
清亦可抑制CAV一N毒株.
3讨论
细胞培养法分离和增殖腺病毒,比较容易].水
解蛋白酶或胰蛋白酶处理病毒样品,或在培养液中加
入适量胰酶,则更有利于病毒在细胞单层上适应和增
殖口.我们应用同步接毒方法,并在吹打胰酶消化细
胞块时对残留胰酶不作彻底洗涤,并获成功.微量胰
酶残留,是否是病毒分离成功的主要因素,有待进一
步试验证明.
用0.3人0”型和大鼠红细胞作血凝
,均
为阴性,但电镜观察则可看到典型病毒粒子,并可在
敏感细胞上产生细胞病变.血凝检测不能作为该毒
检测的有效方法.
参考文献:
[1]殷震,剂景华.动物病毒学[M].北京;科学出版社,1997:204
—
437.
[2]中国农业科学院喑尔滨兽医研究所.兽医微生物学[M].北京:
中国农业出版杜,1998:519
[3]卢圣栋.现代分子生物学实验技术[M].北京:高等教育出版杜,
1993:313.
[4]司徒镇强,吴军正.细胞培养[M].西安世界图
出版社公司,
1996{5.
[5]田克恭实驻动物病毒性痍扁[M-北京:中国农业出版杜,
1991:283
编辑李之稼
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文摘?细胞外Ba对内向整流钾通道的阻断作用
[谢安,械益民.生理,2000,52(1):5O一54]
摘要:实验采用双微电极电压箝(TEV)法研究Ba抖对非洲爪蟾卵母细胞表达的内向整流钾通道(IRK1)的阻断作用.细
胞外Ba抖浓度分别为0,1,3,10和100Fmol-L,,K浓度分别为10和90mmol?L一,可见快速开通道阻断剂Ba抖对IRK1的
瞬间电流(施加电压后1ms)的阻斯作用依赖Ba”_,K,时间和电压;但对IRK1的开关特性几乎无影响,IRK1对之不通透.三
级指数拟合的结果表明:细胞外Ba抖低浓度(1和3gmol?L_.)时,Ba抖与K相互竞争同一结合位点,随着Ba抖浓度的增加,时
间常数不增加但拟合的权数却呈浓度依赖性增加,所以失活过程随Ba浓度的增加越来越快;细胞外Ba抖高浓度(10和100
m01.L)时,时间常数随Ba:+浓度的增加而减少,拟台的权数却呈浓度依赖性减少,失活过程也越来越快t说明Ba抖作用位点
由通道的表面进入通道更深的部位.上述结果提示,Ba抖对IRK1的阻断存在两种不同的机制.细胞外K浓度为90mmo[‘
L一和Ba2一浓度为30tool?L时,Mg”_或Mn一可与Ba.争夺结合位点,随着Mg域Mn抖浓度增加,失活过程逐渐减缓,Ba”-
在通道中的结舍点也逐渐离开通道,Mg抖能而Mn”_不能进入通道较深处阻斯通道t说明IRK1中有多离子阻断形式.
(李之源)