[doc] 犬腺病毒1型流行毒株的分离与鉴定

[doc] 犬腺病毒1型流行毒株的分离与鉴定 犬腺病毒1型流行毒株的分离与鉴定 73 ? 研究原着? 第四军医大学(JFourthMi1MedUniv)2000;21(6) 2790(2000)06—0734—02 文章编号:1000— 7病毒I型流行毒株的分离与鉴定S6s-J一 {/ 李秦,金昌李六金,张海,师长宏,赵世君(第四军医大学实验动物研究中心,陕西西安710033) ;胁3雹特 中圈号:$852.653文献标识码:A 摘要:目的分离,鉴定犬腺病毒I型流行毒株.方法将 处理过的病犬肝组磬{悬液,感染原代犬胎肾细胞.用血凝试 验.中和试验,回归试验以及电镜观察等方法,分离,鉴定. 结果分离出一株犬腺病毒I型流行毒株,命名为CAV XN株.结论该毒株与标准毒株的生物学特性一致. IsolationandidentificationofcanineadenovirusI LIQin,JINChangDeLILiu—Jin,ZHANGHai, SHIChang—Hong,ZHAOShi—Jun LaboratoryAnimalResearchCenter,FourthMill— taryMedicoIUniversity.Xi’an710033,China Keywords:canineadenovirusI{isolationjidentification Abstract:AIMToisolateandtOidentifycanineadenovirus 1.METHoDSToisolateadenovirusIformcanine1iver tissuesuspensiondisposedbyalcoholandchlorofrom,weused synchronousinoculationtOinfectcanineemhryokidneycells andidentifiedthevirusthroughbloodcoagulationtest,neu— tralizationtest,animaIexperiment,andelectronmicroscopic observation.RESULTSCAVwasisolatedfromsickcanine livernamedCAV】一XN3.CONCLUSIONCanineadenovirus Ihassimilarbiologicalpropertiestothestandardvirusoser— vation. O引言 犬传染性肝炎是由犬腺病毒I型(Canineaden— ovirusI,CAV)引起的一种急性,败血性传染病.自 1947年发现了犬传染性肝炎后,1959年又成功分离 获得犬传染性肝炎病毒.1984年,在我国首次分离到 收藕日期:199912—01;修回日期:2000-01—10 基盒项目;臃西省自然科学基金AV一N株由南京警犬研究所 提供;病犬肝组织样品由临床病犬获得;豚鼠抗血清 和兔抗血清自制. 1.2方法采用血凝范围试验,细胞感染范围试 验,理化特性鉴定,动物感染范围试验,交叉中和试 验等方法对病毒进行分离,鉴定D]. 2结果 2.1病毒分离及感染细胞范围CAVXN.毒株在 MDCK细胞上增殖和适应过程中,CPE不明显,培养 后期偶尔看到蜘蛛网状病变,1,6代细胞毒的HA 不稳定,传至12代时,HA稳定,CAV一XN.株 TCID.为1O,10.?mL_..二十 面体对称,无囊膜.在衣壳的顶端有时可看到纤维突 (Fig1). 2.4病毒理化特性鉴定CAV一XNa经胰酶处理 后,其TCID;.与对照组的对数差均未超过1.0,明 CAV一XN.株没有囊膜,并对乙醚,酸具有耐受力. 第四军医大学(JFourthMLlMedUniv)2000;21(6 图1犬腺病毒I型(CAV.一XN)病毒流行株的结构 Flg1Structureofcanineadenov[rusI—XNjstrain 2.5生长抑制试验及对胰酶依赣性试验CAv一 XN在5碘脱氧尿嘧啶环境中增殖力受到了抑制,证 明该病毒系DNA病毒类的成员,经胰酶处理后,该 病毒的增殖力未受到影响,其TCID.值与对照组相 差无几,进一步证明其不具有囊膜结构. 2.6康复犬血清中和抗体效价测定中和指数为 149.62,证明人工感染后犬血清具有较高的中和效 价. 2.7新生犬的人工感染在P3级实验条件下,用 CAV一XN.株对4只母源抗体阴性犬作人工感染,4/ 4只发病,3/4只死亡.病理解剖可见病犬肝组织损 伤严重,腹水增加,肝呈红色,肝脏肿大1.5倍,胆囊 水肿.取病犬第3日的尿液10倍稀释接种地鼠肾细 胞,亦回收到CAV.但以同样的病毒感染的2只仔 犬,却未出现腹泻临床症状,且均健康成活,证明 CAVXN株对其有母源抗体的新生犬不再具有致 病性. 735 2.8血清中和试验结果CAVXN阳性血清能显 着(P<O.O1)抑制CAV一XN;毒株,CAV一XN.抗血 清亦可抑制CAV一N毒株. 3讨论 细胞培养法分离和增殖腺病毒,比较容易].水 解蛋白酶或胰蛋白酶处理病毒样品,或在培养液中加 入适量胰酶,则更有利于病毒在细胞单层上适应和增 殖口.我们应用同步接毒方法,并在吹打胰酶消化细 胞块时对残留胰酶不作彻底洗涤,并获成功.微量胰 酶残留,是否是病毒分离成功的主要因素,有待进一 步试验证明. 用0.3人0”型和大鼠红细胞作血凝检测,均 为阴性,但电镜观察则可看到典型病毒粒子,并可在 敏感细胞上产生细胞病变.血凝检测不能作为该毒 检测的有效方法. 参考文献: [1]殷震,剂景华.动物病毒学[M].北京;科学出版社,1997:204 — 437. [2]中国农业科学院喑尔滨兽医研究所.兽医微生物学[M].北京: 中国农业出版杜,1998:519 [3]卢圣栋.现代分子生物学实验技术[M].北京:高等教育出版杜, 1993:313. [4]司徒镇强,吴军正.细胞培养[M].西安世界图出版社公司, 1996{5. [5]田克恭实驻动物病毒性痍扁[M-北京:中国农业出版杜, 1991:283 编辑李之稼 ?………一一一{????,??’一??一一?一?1??,?…?…?一?,?……? ? 文摘?细胞外Ba对内向整流钾通道的阻断作用 [谢安,械益民.生理,2000,52(1):5O一54] 摘要:实验采用双微电极电压箝(TEV)法研究Ba抖对非洲爪蟾卵母细胞表达的内向整流钾通道(IRK1)的阻断作用.细 胞外Ba抖浓度分别为0,1,3,10和100Fmol-L,,K浓度分别为10和90mmol?L一,可见快速开通道阻断剂Ba抖对IRK1的 瞬间电流(施加电压后1ms)的阻斯作用依赖Ba”_,K,时间和电压;但对IRK1的开关特性几乎无影响,IRK1对之不通透.三 级指数拟合的结果表明:细胞外Ba抖低浓度(1和3gmol?L_.)时,Ba抖与K相互竞争同一结合位点,随着Ba抖浓度的增加,时 间常数不增加但拟合的权数却呈浓度依赖性增加,所以失活过程随Ba浓度的增加越来越快;细胞外Ba抖高浓度(10和100 m01.L)时,时间常数随Ba:+浓度的增加而减少,拟台的权数却呈浓度依赖性减少,失活过程也越来越快t说明Ba抖作用位点 由通道的表面进入通道更深的部位.上述结果提示,Ba抖对IRK1的阻断存在两种不同的机制.细胞外K浓度为90mmo[‘ L一和Ba2一浓度为30tool?L时,Mg”_或Mn一可与Ba.争夺结合位点,随着Mg域Mn抖浓度增加,失活过程逐渐减缓,Ba”- 在通道中的结舍点也逐渐离开通道,Mg抖能而Mn”_不能进入通道较深处阻斯通道t说明IRK1中有多离子阻断形式. (李之源)