石蜡切片步骤及注意事项

石蜡切片步骤及注意事项 石蜡切片步骤及注意事项 时间:2009-08-20 08:22来源:生物吧 作者:刘浩 点击: 394次 ? 取材和固定: 处死动物后立即切取组织块，并快速投入固定液中。 ?脱水和透明: ,,,酒精(min) ,,,酒精 ? (min) ,,,酒精 ? (min) 无水酒精 ? (min) 无水酒精 ? ?取材和固定: 处死动物后立即切取组织块～并快速投入固定液中。 ?脱水和透明: ,,,酒,,,酒精?,min, 无水酒精?,min, 二甲苯?、? 精,min, ,,,酒精?,min, 无水酒精?,min, ,min, <2mm 45-60 45-60 45-60 15-30 2-4mm 60-120 60-120 60-120 30 4-5mm 120-240 120-240 120-240 60 注意事项:1.脱水应彻底～否则不能透明～影响石蜡的浸入～致使难以切片。 2.在低浓度或纯酒精中～每级停留不宜太长～否则易使组织变软～助长材料的解体。 3.在高浓度或纯酒精中～每级停留的时间也不宜太长～否则会使组织变脆～影响切片。 4.如需过夜～应停留在70%酒精中。 5.使用透明剂时～要随时盖紧盖子～以免空气中的水分进入。 ? 浸蜡和包埋: 浸蜡:将透明的组织放入蜡杯,?,?蜡杯,?,?蜡杯,?,。浸蜡时间视材料大小而定～一般总的浸蜡时间为,,,小时左右。 包埋:1. 组织浸入石蜡后～包埋前将组织移入包埋用石蜡杯内。从 恒温箱取出臵于三角架上～其下点燃酒精灯～以保持石蜡的溶解状态。 2.准备好包埋框～将包埋用的镊子在酒精灯上加温,防止镊子粘蜡,后～左手持蜡杯～右手把加温的镊子放在蜡口,直立状,倒蜡时让石蜡沿镊子注入包埋框内。 3.迅速镊取组织块放入包埋框石蜡内～切面朝下放正臵入框底并轻轻压平～以保证不再有气泡。 4.待石蜡面凝固前将标签贴于其上～需注意勿使标签与标本混淆～当蜡块冷至蜡面有透明蜡膜时～浸入冷水中迅速使其冷却～否则蜡内常形成结晶。 5.蜡块完全硬固后除去铜框～以保证蜡彻底凝固～立即修切～准备制成切片或储藏备用。 ?切片制作: 注意事项: 1.室温过高时～可将修好的蜡块放到冰箱中冷却一定时间。在夏季时可用冰块冷却刀和组织块～减少刀与组织块在过程中产生的热时～使石蜡保持合适的硬度以利于切片。 2.切片经30%的乙醇初展后～再用载玻片捞起蜡带放入展片仪水盒内,一般水温为45?左右,。待蜡片带中的组织展平后～即可进行分片和捞片。 3. 切片时要及时清洁刀口、除去蜡屑～否则易引起破碎。 ?贴片: 待切片在恒温水内充分摊开展平后～将载玻片垂直插入水中以毛面轻靠切片～并用毛笔将切片一边拨于玻片上～随即将玻片直立提起。快: ? 烘片与脱蜡: 石蜡切片在90度烘箱内烘半小时 经二甲苯?、?脱蜡各5-10min～然后放入100%、95%、90%、80%、 70%等各级酒精溶液中各3-5min～再放入蒸馏水中3min。 ?染色 1.将蒸馏水洗涤后的切片移入Harris苏木精液中,,,,min～使细胞核着色。 2.用自来水洗去切片上残余的染液。 3.将切片放入1%盐酸乙醇液,盐酸1份+70%乙醇100份,中褪色～见切片变红～颜色较浅即可～约数秒至数十秒钟。 4.入,,氨水或自来水浸洗～使之返蓝。 5.在蒸馏水中浸片刻。 6.,.,,伊红酒精溶液中染色,,,min～使细胞质着色。 ?脱水和透明:: 切片依次入,,,酒精(?)?,,,酒精(?)?无水酒精(?)?无水酒精(?) ?,:,无水酒精、二甲苯?二甲苯(?)?二甲苯(?)～各级中停留,,,min。 ?封藏: 将切片从二甲苯(?)中取出～用纸或布擦去材料周围的二甲苯。在材料中央滴一小滴树胶～然后～用镊子加盖盖玻片。切片封好后～放在切片托盘上待干燥～即可用于观察。 (责任编辑:admin)