Ziehl-Neelsen抗酸杆菌染色法

Ziehl-Neelsen抗酸杆菌染色法 抗酸杆菌Ziehl-Neelsen染色法(AFB) 用途:用于证实抗酸杆菌引起结核病的分支杆菌属。 原理:结核菌的抗酸染色性与菌体表面索状结构内所含肽糖脂的分枝酸残基(Arylmethane mycolate)和胞壁固有层的完整性有关。碱性复红同分枝残基酸牢固结合形成复红-分枝酸复合物，用盐酸酒精漂洗褪色时，能够抵抗稀酸的漂洗，难以将染料从复合物中再溶解而渗 入菌体。细菌的荚膜分子量很高以至于在室温呈蜡状，而且细菌的荚膜能够防止水系碱染液 (革蓝氏)染液的渗透。 对照:含有抗酸菌的组织，染色过程中使用微孔过滤水漂洗。 固定:10%甲醛。 切片:石蜡切片4-5微米。 用品:所有玻璃器皿用双蒸水冲洗，立式染色缸，微波炉。 试剂: Ziehl-Neelsen酚品红液: 液体: 碱性复红 2.5g 蒸馏水 250ml 无水乙醇 10ml 石炭酸(被溶化)12.5ml 充分混合后过滤于棕色瓶内，标明原始日期，液体稳定性1年。 注意:致癌剂，有毒。 1%酸酒精: 盐酸 10ml 70%乙醇 990ml 充分混合，标明原始日期，液体稳定性1年。 注意:有腐蚀性。 甲基蓝贮存液: 美兰(甲基蓝) 0.7g 蒸馏水 50ml 充分混合后，过滤于瓶中，标明配制日期，稳定性1年。 甲基蓝工作液: 甲基蓝贮存液 5ml 蒸馏水 45ml 倒入立式染色缸，稳定性两个月。 注意:避免接触与吸收。 安全措施:戴手套和防护镜，穿工作衣。 防热打，开盖子，液体在通风柜内排尽避免接触与吸收。 碱性复红:致癌剂 石炭酸:通过消化道和皮肤吸收中毒，通过皮肤吸收迅速，引起心率加快，痉挛而死亡。会 烧伤皮肤和眼睛，止痛作用使疼痛消失。作用的目标器官消化、神经和泌尿系统。 盐酸:对皮肤、眼睛和呼吸道有强烈的刺激。作用目标器官通过皮肤呼吸道生殖和胎儿系统 吸收。 甲基蓝:对老鼠的生殖力产生有害的作用。 抗酸杆菌Ziehl-Neelsen染色法(AFB)步骤 1( 脱蜡至蒸馏水。 2( 酚品红液微波炉80power，45秒，切片在热染液中维持5mins。 染液每周过滤1次。 3( 自来水冲洗。 4( 1%酸乙醇漂洗腿色至淡红色，停止脱色。 5( 自来水洗5mins。 6( 蒸馏水漂洗。 7( 甲基蓝工作液30秒。 8( 自来水洗。 9( 脱水、透明、封固。 结果:抗酸酸杆菌鲜红色，背景蓝色。 ※ 常规方法:60?烤箱1小时 。