【word】 高效液相色谱法测定扎冲十三味丸中木香烃内酯和去氢木香烃内酯的含量

【word】 高效液相色谱法测定扎冲十三味丸中木香烃内酯和去氢木香烃内酯的含量 高效液相色谱法测定扎冲十三味丸中木香 烃内酯和去氢木香烃内酯的含量 ? 796? ? 药物研究? 中国药物与临床2007年lO月第7卷第lO期ChineseRemedies&Clinics,October2007,Vol7,No.10 高效液相色谱法测定扎冲十三味jl=Il中木香烃内酯 和去氢木香烃内酯的含量 韩国珍温爱平 扎冲十三味丸是由诃子,制草乌,石菖蒲,木香等13味 药材制成的蒙药制剂,具有祛风通窍,舒筋活血,镇静安神, 除”协日乌素”作用.用于半身不遂,左瘫右痪,口眼歪斜,四 肢麻木,腰腿不利,言语不清,筋骨疼痛,神经麻痹,风湿,关 节疼痛等症.本文采用高效液相色谱法测定了木香烃内酯和 去氢木香烃内酯的含量,为控制该药的质量提供了科学依 据. 1仪器与药品 仪器:日本岛津一10AvP高效液相色谱仪,Class—VP工 作站.试剂:甲醇为Fisher色谱纯,水为重蒸馏水,其他试剂 均为分析纯 对照品:去氢木香内酯,木香烃内酯为中国药品生物制 品检定所提供(批号分别为11525—200404和l11524-200503. 含量测定用).扎冲十三味丸为内蒙古乌兰浩特中蒙制药有 限公司生产 2方法 2.1色谱条件:色谱柱:ZORBAXEclipseXDB—C18柱(4.6 mmx250mill,5tLm),ODS预柱;流动相:甲醇一水(60:40);流 速:1rn1/min:检测波长:225nm.理论板数按木香烃内酯峰 计算在5000以上. 2.2供试品溶液及阴性样品溶液的制备:取本品,刮去包衣, 研细,取粉末1.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲 醇25ml,密塞,称定重量,超声处理40min,取出,放冷,再称 定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即 得. 阴性样品溶液的制备:按处方比例及制备工艺制备缺木 香的阴性样品,同法制备.将对照品,样品及阴性样品溶液注 入液相色谱仪,结果供试品色谱中,在与对照品色谱相应的 保留时间处有相同的色谱峰;而阴性样品无干扰. 2I3对照品溶液的制备及线性关系考察:精密称取去氢木香 烃内酯,木香烃内酯对照品适量,加甲醇制成每1ml含木香 烃内酯0.105mg和去氢木香烃内酯0.101mg的对照品混合 溶液.分别精密吸取该混合溶液0.1,0.2,0.5,1,2,3ml置10 TIll量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀.分别吸取上述溶液20 l注入液相色谱仪,色谱图,测定其峰面积,以浓度(C) 对峰面积值(A)进行线性回归,得回归方程分别为:木香烃内 作者单位:037003大同市第三人民医院药剂科(韩国珍);内蒙 古医学院药学院药物分析教研室(温爱平) 酯:y=2.69x10-Sx一1.23,r--0.9999去氢木香烃内酯:y=3.077x 10+0.777.r=0.9993 试验结果表明:木香烃内酯,去氢木香烃内酯的浓度分 别在10.5,315I~g/ml和10.1~303tLg/ml范围内有良好的线 性关系. 2.4精密度试验:精密吸取同一对照品混合溶液20l,重复 进样6次,测得其木香烃内酯平均峰面积X=I951249. RSD=0.90%,去氢木香烃内酯的平均峰面积X=I584438. RSD=I.61%;同法对同一供试品溶液连续进样6次,测得其 木香烃内酯平均峰面积X=I880152,RSD=I.19%.去氢木香 烃内酯的平均峰面积X=2290072.RSD--1.32%. 2.5稳定性试验:取同一批号供试品溶液,分别于0,4,6, 10,24h进样1次,每次20l,记录色谱峰峰面积,结果在8h 内木香烃内酯和去氢木香烃内酯峰面积无明显变化.RSD分 别为1.46%和1.62%(n:5). 2,6重复性试验:按试验拟定的含量测定方法,对同一批号 样品制备7份供试品溶液,分别对其进行测定,记录峰面积 值并计算木香烃内酯,去氢木香烃内酯的总含量.结果含量 分别为2.020,2.027,2.017,2.048,2.056,2.064,2.044mgCs,平 均含量为2.039mgCs,RSD=0.90%(n=7),表明本法重复性 好. 2.7回收率试验:取已知含量的样品(每克含木香烃内酯 0.845mg,去氢木香烃内酯1.195mg)约1.5g6份,精密称 定,置具塞三角瓶中,每份分别加入木香烃内酯对照品和去 氢木香烃内酯对照品适量,按上述供试品溶液制备方法,制 备加样回收供试品溶液,并注入高效液相色谱仪,记录峰面 积,分别计算木香烃内酯,去氢木香烃内酯的回收率,结果见 表1,2.试验结果提示本法有良好的回收率. 表1木香烃内酯回收率试验结果 特黼 g 鳃回平 中国药物与临床2007年10月第7卷第10期ChineseRemedies—&Clinics,October—2007,Vol7,No.10 表2去氢木香烃内酯回收率试验结果 … 样品重量去氢木香烃内JJuA~t测得量回收率平均值RSD 编号 g酯含量(mg)mgmg%%% 2.8样品含量测定:分别精密吸取木香烃内酯,去氢木香烃 内酯对照品混合溶液及供试品溶液各20l,注入高效液相色 谱仪,按外标法计算木香烃内酯,去氢木香烃内酯总量,分别 测定了5批样品中木香烃内酯和去氢木香烃内酯的含量,结 果见表3. 3讨论 在选择色谱系统时.主要参照中国药典(2005年版)一部 “木香”项下的含量测定条件进行,通过对不同型号的色谱柱及 表3样品含量结果(n=3) ? 797? 不同比例的流动相进行试验.结果以ZORBAXEclipseXDB— C18为色谱柱.以甲醇一水(6o:40)为流动相分离效果最好. 供试品溶液的制备主要参考《中国药典)2005年版一部 中”木香”药材含量测定项下供试品溶液的制备方法,采用超 声提取的方法,并对提取时间进行了考察,结果超声处理40 min木香烃内酯和去氢木香烃内酯含量不再增加,故确定超声 处理时间为40min. 本法操作简便.样品用量少,结果准确可靠,为提高扎冲十 三味丸的质量标准提供了科学的依据. (收稿日期:2007—04—13) 细菌内毒素检查法用于碳酸氢钠注射液的研究 杨海民 碳酸氢钠注射液《中国药典)2005年版二部仍沿用家兔 法进行热原检查,但该法试验条件较高,操作繁琐,费时 费力.寻找简便快速的细菌内毒素检查法替代热原检查法, 已引起越来越多人的关注和研究.我们对碳酸氢钠注射液能 否用细菌内毒素检查法进行了研究,现介绍如下. 1材料与方法 1.1药品 碳酸氢钠注射液(上海华中药业有限公司提供,规格: 250ml:12.5g.批号:06101001,06102102,06110601). 1.2试剂 细菌内毒素工作标准品(湛江博康海洋生物有限公司, 规格:10EU/支,批号:0603120);鲎试剂(湛江博康海洋生物 有限公司.规格:0.25Eu/IrIl,批号:0610170,0606010;湛江安 度斯生物有限公司,规格:0.25EU/ml,批号:0608151);细菌 内毒素检查用水(湛江博康海洋生物有限公司,规格:2m1/支, 批号:0605072). 1.3仪器与动物 旋涡混合器(天津药典标准仪器厂,型号:zH一2),水浴 锅(北京市光明医疗仪器厂,型号:DZKW--C),其他试验用具 均经除热原处理.试验用家兔(品种:新西兰白兔). 1.4实验方法与结果 作者单位:457000河南省濮阳市药品检验所药理室 1.4.1鲎试剂灵敏度复核n] 将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解, 在旋涡混合器上混合15min,然后制成0.5,0.25,0.125, 0.0625EU/ml的细菌内毒素工作标准品系列溶液(每次稀释 均在旋涡混合器上混合30S);按照《中国药典)2005年版二 部附录?E试验方法进行.结果3个批号的鲎试剂灵敏度均 为0.25EU/ml,均和标示灵敏度一致.结果见表1. 表1鲎试剂灵敏度复核试验结果 1.4.2碳酸氢钠注射液干扰试验:?样品细菌内毒素理论限 值(L)和最大有效稀释倍数(MVD)的计算El’]:L的计算:采用 公式L=l(/M.其中.K为静脉注射限值,即5EU?kg?h-t;M为 成人每公斤体重每小时的给药剂量(静脉滴注时M为105 mg).故L=l(/M=5/105=0.05EU/mg. MVD的计算:鲎试剂灵敏度()以0.5EU/ml为准,按公 式计算:MVD=CL/h,C为供试品溶液的浓度:50mgCml,则 MVD=CUb=50x0.05/0.5=5倍.即鲎试剂灵敏度0.5,0.25, 0.125,0.0625EU/ml与MVD的对应关系为5,10,20,40倍.