一种未知中枢抑制剂的ED50测定方法

一种未知中枢抑制剂的ED50测定方法 一种未知中枢抑制剂的ED测定方法 50 摘要 本文通过对给定的三种作用于中枢神经系统药物的筛选，从而找出中枢抑制剂，并通过合理有效的设计，以观察小鼠翻正反射为指标的质反应完成这种中枢抑制剂的半数有效量即ED50的测定。在有限的实验条件下完成测定有着极强的现实指导意义。实验方法设计简单、合理、科学，结论可信度高。对已知或未知的药物，较短时间内获得其ED50 均可参考此种方法。 关键词 ED50 中枢抑制剂 一、引言 中枢神经系统的药物主要作用于递质和受体，如药理性质不明，给药剂量不明确，会对病人产生毒性作用，治病却成为致病。药物药效的重要参数,能适当地标志该药物的疗效和毒力水平。如半数有效量ED50、半数致死量LD50、治疗指 数TI等。 二、 2.1 受试对象:小鼠、20?5g、实验前禁食12小时、腹腔注射给药。 2.2 试验材料:电子天平(分度值:0.001g)、注射器(1ml)、量筒10ml、刻度吸量管(5.00ml)、生理盐水。 2.3 供试药物:中枢兴奋药(7.5%)、中枢抑制药(2%)、安慰剂，以上均由实验室提供(药物采取编号)。 2.4 被试因素:实验采用自身前后对照原则。 三、方法 3.1预试方法 取18只小鼠，称重并随机单纯随机分为6组，并标记组别A~F。 A组小鼠分别按0.1ml/10g腹腔注射供试药品母液，定性判断供试品性质(中枢兴奋药、中枢抑制药或安慰剂)。B组实验方法同上。(结果见表1) 将抑制药母液按二分法稀释，方法同上，探索ED0、ED100。并观察给药后并显效时间和维持时间。(表2) 3.1.1预试指标:ED100观察小鼠翻正反射消失达到15分钟或以上，ED0观察小鼠无特殊反应。 3.2正式实验方法 将小鼠编号，称重。单纯随机分为6组，每组8只，标记为A~F。 剂量计算:由预试结果找出的D(0.5%)和D(0.375%)，设正式实验剂maxmin 量组数为n(n=6)，求出剂量公比r， 1n,Dminr, Dmax k-1则各组剂量为D?r，k为第几组(k=1,2,3……6)。 max 第1组:0.5% 第2组:0.5%×0.944=0.472% 第3组:0.5%×0.944^2=0.445% 第4组:0.5%×0.944^3=0.420% 第5组:0.5%×0.944^4=0.397% 第6组:0.5%×0.944^5=0.375% 采用各组每10g体重小鼠的用药容量相等，注射体积=0.1ml/10g。 3.2.1观察指标:以翻正反射消失为入睡指标，观察药物的催眠效应，记录各组腹 ) 腔注射后15min内睡眠鼠数。(表3 统计学数据处理:Bliss法计算得 四、结果与分析 表1 A、B组小鼠给药后现象 药物编号 12 13 14 小鼠编号 A1、B1 A2、B2 A3、B3 给药后小鼠现象 惊厥、而后兴奋过镇静，挣扎，随后无特殊反应 度、死亡 死亡 推断药物 中枢兴奋药 中枢抑制药 安慰剂 由小鼠现象可得知13号药物腹腔给药后，出现镇静的生理现象，即可筛选出13号药物为中枢抑制药。 表预实验-与的确定1 ED0ED100 翻正反射消失重量(给药量()g)ml组编号给药浓度给药时间是否有效起始时间结束时间 114.20.14214:3915:0015:50是 C220.51.000%0.20515:0015:0115:52是 317.40.17415:02死亡否 118.20.18215:1215:1416:22是 D215.70.500%0.15715:1415:1516:28是 319.40.19415:1515:1716:20是 120.10.20115:1815:2015:42是 E216.40.375%0.16415:19否 321.20.21215:21否 117.90.17915:25否 215.80.15815:26否F0.250% 320.60.20615:27否 初步确定ED约为0.375%,ED约为0.5%。 0 100 Bliss法测中枢抑制药的ED50 组别 剂量(%) 总动物数 有效动物 有效率(%) 剂量对数 概率单位(P+5) 1 0.500 8 7 87.5 -0.328 6.155 2 0.472 8 7 87.5 -0.371 6.155 3 0.445 8 6 75.0 -0.376 5.670 4 0.420 8 4 50.0 -0.401 5.000 5 0.397 8 2 25.0 -0.435 4.330 6 0.375 8 1 12.5 -0.462 3.850 回归方程为:Y=12.7812+19.1860X;(r=0.9588) α=0.01时，查的r为:0.9170 (其中Y为概率单位加5后的值，X为计量的对数log X) 即ED=0.3930% 50 置信系数α=0.05时的置信区间为:0.3710?ED?0.4164，0.0251 50 五、讨论(discussion) 实验中得到结论为该种中枢抑制药物的ED50为0.3930%，即0.079g/100ml。 实验中，由于小白鼠的大小、性别不同，机体的生理状况及其药物耐受性会存在较大差异。实验设计时遵循实验设计原则，选生理状况良好的小白鼠，以便有效减少实验误差。 由于小鼠体质所限，每次给药剂量少，在药物稀释配制时，应当注意精密配制，腹腔注射给药时，注意推注速度要均一，避免药物浓度过高时推注过快到时的假阳性反应。根据我们的实验经验可知，实验中，给药，配制药液，应由专人配制，尽量避免由于个人操作的原因所带来的误差。 若要对该种药物更多指标的评价，需要进一步设计实验，如LD50，TI等，有待进一步研究。 六、参考文献(reference) [1] 谭毓治. 药理学实验[M]. 人民卫生出版社.2008.98-95,136-137. [2] 朱坤杰等. 地西泮和戊巴比妥钠对两种小鼠镇静催眠作用强度的观察[J]. 现代生物医学进展,2006,6(8):44-45. [3] 梅福荣.0.3%戊巴比妥钠用于大鼠麻醉的方法[J] 实验动物科学与管理,3003,20(3):43-45.