ND—IB二联油乳剂灭活苗的研制

ND—IB二联油乳剂灭活苗的研制 ND—IB二联油乳剂灭活苗的研制 _采分2001年第23卷第3期ChinaPou2tryVo1.23.N0.3.200t ND—IB二联油乳剂灭活苗的研制 秦卓明',王军中,刘红',王永华,贾强',金维江',高峰',孙树清 (1.山东省农科院家禽所SPF鸡场,济南250100; 2.河北省华牧集团禽病防治中心;3.济南动物园) 摘要:利用NDLasota株,IB地株和山东IB分离株A株经SPF鸡胚分别繁育,捡验 合格 后灭活,按一定比例混合,研制ND—IB二联油乳荆灭活苗.经实验室捡查和田问应 用实验表 明,该疫苗对雏鸡,成鸡安全有效,无副作用,可作为预防这两种病的良好生物制荆. 关键词:D;IB;油乳荆疫苗;实验室检查;田问实验 DevelopmentoftheCombinedOil—emulsifiedInactivatedvaccine againstND&Multivalentm QinZhuoming',WangJunzhong2,LiuHong',WangYonghua JiaQi~ns,JinWeijiang',GaoFeng',SunShuqing' (1.InstituteofPoultrySciences,SAAS,Jinan250100 2.PreventionCent~ofPoultryDiseaseinHebeiHuamugroup;3.Zoolo~cMGardenofJinan) Abstract:Ialsom,M41andtheisolatedIBvirus"A"ofShand0"SProvinceproliferatedinthee mb. ryosofSPF chicken.Mkilledafterirmpeetioninlabandwerefixedbyproportion.thenthecombinedOile mulsifiedinactivated vaccineagainstND&multivalentIBmmade.Theexperimentinlabandthefieldshowed thevaccinew?efficientand safe.Itcouldbeasoedvaccinetopreventagai~lthesetwodiseases Keyw0rd5:ND;IB;CombinedOil—emulsifiedvaccine;testsinlab;fieldexperiment 新城疫和传支是由病毒引起的鸡的两大传染 病,给养鸡业带来了很大经济损失.ND如Lasota, ?系,?系,N79等弱毒疫苗,免疫后鸡群抗体水平 相对不高,免疫持续期较短,难以抵抗外界强毒的 攻击.IB血清型较多,各毒株之问抗原差异较大, 不同血清型之间交叉保护率较低.多年来,我国一 直用H和H,预防m,取得了一定的效果但近 几年来,在山东,河北等部分地区爆发和流行肾型 和呼吸型IB,传统疫苗预防不理想.为解决生产中 的实际问题,我们在对IBV分离鉴定的基础上,研制 了新型二联油乳剂灭活苗,现将结果汇报如下. 1和方法 1.1剁苗种毒 1.1.1ND种毒Imaota由中国兽药监察所提 收稿日期:2000—05一l2 — 7 供EID?10,/0.1mL. 1.1.2传支种毒M.由中国兽药监察所提供 ? EID50?10'/0.1mL. 1.1.3山东IBA株由山东家禽所SPF鸡研究 中心分离并鉴定EIDo?10/0.1mL,通过气管 环交叉中和试验,以MT株作为对照株,对从山 东分离的4株IBV进行了血清的初步分型.在交 叉中和试验中,山东A血清与上述6个病毒株都 发生了交叉反应,具有较好的免疫原性. 1.2试验材料 1.2.1SPF材料(鸡肛,鸡血清和鸡)均由山东 家禽所SPF鸡场提供. 1.2.2山东分离株阳性血清由中国农大实验 动物研究所赵继勋教授在隔离器中利用30—40 日龄sPF鸡制备. 中圈采令200l#-g23巷3期~h/naPoultryt'b1.23.0.3.2001 1.2.3IB标准株M.-,T阳性血清由中国农大 实验动物研究所赵继勋教授惠赠. 1.2.4药品7号白油(杭州炼油厂);司班一80 和吐温一80(天津天大化工厂或上海大众制药 厂);硬脂酸铝(天大化工厂) 1.3攻击用强毒株 1.3.1NDF|sEs株强毒购自中国兽药监察所, 对65日龄肉鸡EIDso为10,/0.1mL,攻毒剂量为 lO稀释,每只肌注1mL. 1.3.2IB—D株强毒由山东家禽所分离, EID为l0.加.1mL,攻毒剂量为气管滴人含毒 鸡胚尿囊液0.3—0.5mL/只. 1.4病毒增殖及制蕾抗原的制备 ND以lO稀释尿囊液0.2mL接种于9,10 日龄SPF鸡胚,IB以l0稀释,尿囊液0.2mL接 种于10—11日龄SPF鸡胚.按常规收获,分别测 定上述抗原效价.ND:HA效价应在1:1024以上; IB:其EID,.不低于l0./O.1mL;否则,废弃.将 上述无菌的鸡胚尿囊液抗原加入一定浓度的甲醛 溶液,使其终浓度为0.1%,置37~C恒温摇床l6 h.灭活后的抗原液置4~C冰箱保存.将二者按适当 比例混合制成疫苗相.按规程进行疫苗制备. 1.5安奎性试验 随机选择四批疫苗以皮下或肌肉注射不同日 龄的鸡,接种后观察接种部位有无病变,直至28 d,鸡群情况. 1.6物理性状检查 外观呈乳白色液体,稀薄,以5,20mL玻璃 注射器,l6号针头抽取疫苗,换4.5细针头注射 时,不应有阻力,不应堵塞针头.将疫苗取10mL 于离心管中,3000r/min离心15—21)rain,不分 层,不破乳.室温下静置2月不应分层,37~C温箱 内3周不破乳. 1.7免疫效力检验 1.7,1攻毒试验疫苗免疫后3周,用强毒攻 击,观察临床症状和剖检症状. 1,7.2免疫剂量选择分两组进行,一组是28 日龄AA雏鸡,分别以0.2,0.3和0.5mL疫苗胸 部肌肉注射l5只鸡,另一组是2月龄海兰鸡,分 别以0.4,0.5和1.0mL疫苗胸部肌肉注射lO只 鸡.注苗后21d攻毒. 1.7.3免疫期试验用两批疫苗免疫2月龄海 兰蛋鸡,每只鸡胸部注射0.5mL;免疫后分不同时 期,攻毒或采血测血清中ND和IB抗体. 1.8保存期试验 将试制的四批苗960125.970123,970204. 970415放4—8?条件下保存6,10,12和l4个月 与将970415放室温2O,28?保存2个月的二联 油乳剂灭活苗取出,分别免疫接种28日龄AA肉 鸡,每只鸡0.5mL,免疫后21d攻毒. 1,9田问实验 用实验室制品5批,分别在山东省济南,潍 坊,东营,新泰,禹城等地和河北省部分鸡场共 61340只雏鸡及蛋鸡进行田间免疫试验. 2结果 2.1疫苗的安奎性试验 以肌肉和皮下接种不同日龄的鸡,接种后28 d结果见表1. 裹1二鞋油乳剂灭活苗对鸡的安全试验 由表1可见,健康鸡接苗后,均未见不良反 应,精神,食欲良好,注射局部未见肿胀,坏死等现 象,说明本疫苗是安全的. 2.2物理性状检查 疫苗稳定性好,粘度适中,符合规程关于物理 形状的要求. 2.3疫苗效力试验 用3批疫苗,以皮下或肌肉接种不同日龄的 健康敏感鸡3O只,免疫后21d分别攻击强毒.结 果见表2. 裹2二联油苗免疫鸡攻毒后效力试验 结果表明:二联苗可使鸡产生良好的免疫力, 保护率达9o%以上,仅个别鸡出现了轻微的呼吸 道症状.剖杀免疫鸡,无异常病变.而对照鸡群在 攻毒后均产生了临床病症,剖检出现了明显ND和 中_采鑫2o0】年第23卷第3期ChinaPoultryVoL23,No.i2001 IB病变. 2.4不同免疫荆量试验 雏鸡0.3mL,成鸡0.5mL二联苗免疫后21d 攻毒均可对ND和IB达100%保护,而少于该剂 量则保护率降低,达不到规定要求. 2.5免疫持续期试验 2.5.1ND抗体寝I定免疫后20—180d.鸡群 Hl平均滴度在1:2.一1:2之间,且均匀度好;免 疫后180—270d,HI平均滴度在1:一1:2I之间. 2.5.2IB保护性实验免疫鸡经3个月攻毒, 攻毒剂量为D株原液0.5mL,免疫鸡攻毒均 100%保护,6个月80%保护,而对照相近日龄SPF 鸡群则100%发病,出现呼吸道症状.从免疫鸡群 中各取3,5份免疫后血清,经5CC灭活在血清原 液,1:4或1:8稀释中加等量100EID"D株病毒 液,37?水浴作用1h,接种10—11日龄SPF鸡 胚,120h后,观察鸡胚病变. 裹3SPF鸡眭中和保护试验 试验表明,免疫后I一5个月,IB血清抗体可 中和接种100EID"的鸡胚.6个月后,则下降,但 仍有80%的保护率. 2.6保存期试验 见表4. 裹4二鞋苗保存期试验 疫苗存放越度根存时甸免疫组牌护串任) 批号代)'日)ND皿 对照组牌护串) 二联苗4—8?条件下保存12个月90%一 100%产生保护,保存l4个月对ND100%保护,而 IB仅有62.5%保护,批次重复性好.室温存放2 个月的二联油苗其性状保持不变.免疫注射鸡抗 病保护率与冰箱保存的结果相同. 2.7田阃试验 结果表明,疫苗对鸡群无不良反应,鸡群于免 9 疫后4周检测其Hl抗体滴度,均匀且较高,取得 了较好的免疫效果,见表5. 裹5免疫前后鸡场ND与?HI抗体变化 3小结 3.1乳剂灭活苗经实验室和田间试验表明, ND—IB二联油乳剂灭活苗对各日龄鸡群安全有 效,无副作用.免疫后攻毒保护率,无论是ND还是 IB均达90%以上,可作为预防这两种病的良好生 物制剂. 3.2该二联油乳剂灭活苗贮存于4—8?条件 下,保存期为一年;在室温20—28?条件下,保存 期2个月以上. 3.3利用ND—IB二联油乳剂灭活苗免疫鸡群, 1O,15d产生抗体,3周后达到高峰,免疫期为5 个月以上,总保护率在90%100%. 3.4IB血清型较多,相互之间的免疫保护性较 差,本试验选用的山东A株在生产中产生了较 好的反应.但这些情况不是一成不变的,应及时 做好生产中IB的流行病学监测工作,并根据情 况对疫苗予以选择和改进,以期取得良好的效 果. 主要参考文献: I唐秀英等.鸡ND—IB一病毒性关节炎袖乳剂灭耩苗的研究 中国畜牧兽医学台禽病学分告第五次学术讨论尝论文集.江宁? 大连:1990;9:35—43 2王明俊等.兽医生物翩品学中国农业出版杜.1997:7: 64I一645 3B.w.卡尔尼克主编.高福等译.禽病学,407—418 4邝荣椽主编.禽病学.中国农业出版杜.I999;7:53,6I 5甘孟侯主编.中国禽病学.中国农业出版杜.I999:7:435I 6国际兽疰局编着.谚断试剂和疰苗标准手册农业部畜牧兽 医局.I996:426,432 7秦卓明.鸡肾型IB病毒的分离与鉴定.中国家禽,2000;22 (4】:I4一I6 8秦卓明.用气管环变卫中和试验鉴定IBV山东分离株的血清 型畜牧与兽医.2000;32(3):8一10? ??帅砷?配 ?????? 6O2423 8888 筋勰 扯 习吣蚺