植物细胞DNA的粗提取和鉴定

化学与生物工程学院生物工程系         生物化学 课程名称：生物化学 实验项目：植物细胞DNA的粗提取和鉴定 实验室名：生化实验室 实验时间：2012-11-15 任课老师：杨艳 专业班级：生物工程1141班 学生姓名：贾瑞            学 号：201121030106        组别：第二组 实验内容 【实验目的】 理解植物细胞DNA的粗提取和鉴定的原理，初步掌握植物细胞DNA的粗提取和鉴定的方法，观察提取出的物质。 【实验原理】 1. DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为0.14 mol/L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。 2. DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。　 3. DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 4. 细胞有两脂质膜，细胞膜和核膜（植物细胞还具有细胞壁），洗涤剂可以溶解细胞的细胞壁，去除脂质和蛋白质。 【实验器材与试剂】 菜花（或洋葱等）、洗涤剂、NaCl、研钵、纱布、漏斗、烧杯、玻璃棒、量筒（10ml 1支）、滴管、试管（20ml 2支）、天平。 95%酒精、蒸馏水、0.015mol/L NaCl、二苯胺试剂、研磨液。 【实验步骤】 1. 材料准备 （1）将新鲜菜花和95%的酒精溶液放入冰箱冷冻室，至少24小时。 （2）量取50 ml洗涤剂，称取0.5g NaCl。 （3）配制0.015mol/L NaCl溶液：称取0.88 g NaCl投入1000 ml容量瓶中，加水到所需体积的刻度线上，溶解后成0.015mol/L NaCl溶液（已配好）。 （4）配制二苯胺试剂： A液：0.2 g二苯胺溶于10ml冰醋酸，再加1.1ml浓硫酸（比重1.84），若冰醋酸不纯，试剂呈蓝色或绿色，则不能使用。 B液：乙醛的体积分数为0.2%的溶液。（已配好） 配制：将0.1ml B液加入到10 ml A液中，现用现配。 2. DNA的粗提取 （1） 取材：称取30 g菜花，去梗取花，切碎。 （2） 研磨：将菜花放入研钵中，倒入10 mL研磨液(同时加入洗涤剂)，充分研磨10 min。 （3） 过滤：将研碎的液体用漏斗和纱布过滤到烧杯中。（也可将滤液倒入塑料离心管中进行离心，用1000 r/min 的旋转频率，离心2~5 min；取上清液放入烧杯中）。在4℃冰箱中放置几分钟后，再取上清液。 （4） 加冷酒精：将一倍体积的上清液倒入两倍体积的体积分数为95%的酒精溶液中，并且玻璃棒缓缓地轻轻搅拌溶液（玻璃棒不要直插烧杯底部）。沉淀3~5 min后，可见白色的DNA絮状物出现。用玻璃棒缓缓旋转，絮状物会缠在玻璃棒上。这就是DNA。 3. DNA的鉴定　 取两支试管，分别标记1、2号，各加入0.015mol/L NaCl2 ml，将所得的白色絮状物取出一部分放入1号试管，搅拌使其溶解，然后，向两试管中分别加入2 ml二苯胺试剂混合均匀后在沸水浴中加热5-10min，观察颜色变化。在加热过程中，随时注意试管中溶液颜色的变化（逐渐出现浅蓝色）。 【实验结果】 在含有最终提取的DNA丝状物的试管中，经过二苯胺颜色反应，试管溶液出现蓝色为DNA，对照试管溶液不变蓝色。 【实验结论】 这是一项学习性的实验，应该学会对植物细胞DNA的粗提取和鉴定。在实验过程中有三点应该注意，材料必须充分研磨成糊状，否则洋葱细胞没有彼此分离分离，影响实验效果； 加入酒精后摇动或搅拌时一定要轻缓，否则会破坏以至于看不到；二苯胺试剂最好现用现配，否则二苯胺会变成蓝色，影响效果。 指导教师批阅意见： 成绩评定：     指导教师签字： 年    月    日 注：1、报告内的项目或内容设置，可根据实际情况加以调整和补充。      2、学生提交实验报告时间为实验后10日内。