HPLC测定珍珠通络胶囊中丁香酚含量

HPLC测定珍珠通络胶囊中丁香酚含量 青海医药杂志2007年第37卷1期 ? 药品检验? HPLC测定珍珠通络胶囊中丁香酚含量 青海省人民医院药剂科(810007)陈寒杰 摘要目的:建立测定珍珠通络胶囊中丁香酚含 量的HPIC方法.方法:用十八烷基硅烷键合硅胶为 填充弃l;甲醇一水(5o:5o)为流动相;检测波长 215啪;进样量为10,L.结果:通过方法学实验:丁香 酚在(O.011~0.443)t~g范围内呈良好的线性关系,得 回归方程如下,Y一1479.3+33441.4X(r一0.9999), 平均回收率为98.3,RSD=0.7.结论:应用 HPIC法可以测定珍珠通络胶囊中丁香酚含量.其 测定结果可靠,方法准确,灵敏,重现}生好. 关键词HPLC珍珠通络胶囊丁香酚 中图分类号R927.2 珍珠通络胶囊由珍珠,丁香,肉豆蔻,白豆蔻, 草果,肉桂及方海等二十五味药组成,具有清热开 窍,燥黄水等功效,可用于胡病,类风湿,肾病,脉 病,偏瘫,半身不遂等症.被中华人民共和国卫生 部药品一蒙药分册收载[1],原质量标准尚缺少 含量测定.本文建立了珍珠通络胶囊中丁香所含 有效成分丁香酚的HPLC色谱含量测定方法. 仪器与试药 1仪器岛津HPI色谱仪I一2O1OAHT,LC 一 1OADVP输液泵,全自动进样器,V】P]r系列紫外 检测器,CLASS—VP色谱工作站. KQ--250型超声波提取器(功率250W,频率 40kHz,昆山市超声仪器有限公司生产). 2材料及试剂丁香酚对照品(中国药品生物制 品检定所,供含量测定用,批号10725—200008), 色谱纯甲醇,重纯化水,其余试剂均为分析纯,样品 及药材均由青海省格拉丹东药业生产并提供,生产 批号分别为20030214,20030215,20030216. 方法与结果 1色谱条件SHIM—PACK--ODSC1810/zm 液相色谱柱(4.6mm×150mm)(岛津香港有限公 司);流动相:甲醇一水(50:50)为流动相;检测波 长215nm;流速:lmI/rain;柱温:室温. 2对照品溶液制备精密称取丁香酚对照品适 量,溶于甲醇,于容量瓶中定容,得到丁香酚的浓度 为11.08/zg/mI的溶液,备用. 3供试品溶液的制备称取本品粉末约3g,精密 称定,置100mI锥形瓶中,加石油醚(30,60)? 50mI浸泡过夜,超声处理3O分钟,放冷,滤过,用 少量石油醚(30~60)?分次洗涤容器和残渣,合并 洗液与滤液,低温挥干,加甲醇使溶解并转移至 50mI量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,精密量取 5mI,置100mI量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀, 用微孔滤膜(O.45/~m)滤过,取续滤液,即得. 4阴性对照品溶液的制备取不含丁香的各原 料,按珍珠通络胶囊生产工艺制备丁香酚阴性对照 品.取丁香酚阴性对照品适量,按供试品溶液制备 方法制备. 5线性关系的考察分别精密吸取丁香酚对照品 溶液(11.08t~g/mL)1L,10/~I,20/B,30/~L, 40/B,注入液相色谱仪中,依法测定,以丁香酚进 样量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,进行线性 回归,得回归方程如下,Y=1479.3+33441.4X, r----0.9999,结果表明丁香酚在(O.011t0.443)I,g 范围内呈良好线性关系. 6阴性对照试验对照品溶液,供试品溶液及阴 性对照品溶液分别进样测定,结果显示在与丁香酚 对照品相同保留时间处未见明显吸收峰,故认为无 干扰.见图1. 图1丁香酚对照品 图2珍珠通络胶囊样品 图3珍珠通络胶囊阴性对照 7稳定性试验同一浓度供试品溶液,分别于制 青海医药杂志2007年第37卷1期 备后0h,1h,2h,8h及12h测定没食子酸峰面积, 考察其稳定性,结果丁香酚RSD为0.5.结果 表明丁香酚在提取后8h内测定基本稳定. 8精密度试验精密吸取丁香酚对照品溶液 10t~L,重复进样6次,求得峰面积的相对标准偏 差,结果RSD为0.6,一6.结果表明仪器和 操作精密度良好. 9重现性试验同一浓度供试品溶液进行测定, 测得丁香酚平均含量为1.577mg/粒,RSD为 0.6,n=5.结果表明试验方法的重复性良好. 1O回收率试验精密称取已知含量的样品0.2g (1.577mg/粒),分别精密加入丁香酚对照品溶液 (11.08~g/mL~10mL),按正文供试品溶液的制备方 法及E述色谱条件测定,以下式计算回收率,结果见 表1. l1样品测定结果样品测定结果见表2. 表1回收率试验结果 注:以上测定结果表明,本品具有良好的回收率. 表2样品测定结果 讨论 1)测定波长的选择:根据丁香酚对照品的紫外 光谱图,在(200~220)nm之间有一平稳吸收及文 献,确定测定波长为215nm.经与文献相比较引,故 选择测定波长为215nm. 2)供试品制备对比了超声处理和回流提取,因 丁香酚挥发油易挥发,回流提取时易损失,故选择超 声处理提取. 3)对供试品溶液的制备的方法进行优化,分别 采用甲醇,乙醇,石油醚(30~60)?及石油醚(6O, 90)?对样品进行超声40分钟处理后,测定样品提 取液中丁香酚含量,结果甲醇,乙醇及石油醚(60, 90)?提取液的色谱图较石油醚(30,60)?提取液 杂质峰多,干扰大.根据以上实验结果,故选择石油 醚(30~60)?提取. 4)以石油醚(30~60)?为溶剂,采用超声提取 方法,分别以超声20rain,40min,60min,浸泡12h, 青海医药杂志2007年第37卷1期 24h后超声30rain测定结果,结果表明,浸泡12h后 超声30min后含量测定结果基本稳定,故选择浸泡 12h后超声30min. 5)实验表明,本测定方法简单,测定结果准确 可靠,灵敏,重现性好. 参考文献 1中华人民共和国卫生部,编.中华人民共和国卫生部药品 标准?蒙药分册(一部).1998,226. 2苗明三,李振国.现代实用中药质量控制技术.北京:人民 ? 53? 卫生出版社,2000,105. 3中华人民共和国药典委员会,编.中华人民共和国药典 (一部).北京:化学工业出版社,2000,3. 4中国生物制品检定所,编.中国药品检验标准操作. 北京:中国医药科技出版社,2000,134. 5王宝栗.中成药质量标准与标准物质研究.北京:中国医 药科技出版社,1994,220. 6赵陆华,主编.HPLC色谱法分析中成药成分手册.北京: 中国医药科技出版社,1994,59. 绝育术后异位妊娠破裂误诊为胃肠炎2例 青海省黄南州人民医院妇产科(811300)卫钦云 例1,患者35岁,女,孕2产2存2,于2005年1月2O 日7时来院.述昨日中午,劳累后服用冷饮,觉胃部不适, 腹部隐痛,恶心,呕吐一次为水样物,肛门坠痛.患者以往 月经周期4O天至5O天,现停经42天,昨天之前无恶心,呕 吐,输卵管绝育术3年.查体温36.6?,血压15/1OkPa,血 Hb110g/L,WBC19×10./L,腹部平坦,腹肌稍紧张,全腹压 痛,反跳痛,移动性浊音(一),尿妊娠试验阴性,B超未发现异 常情况.初步诊断为''胃肠炎''收住外科,给予输液加抗生素治 疗,观察.输液期间,病人腹痛由全腹固定于下腹部,肛门坠胀 感明显,再次查血HB85g/L,RI?3.6×10TM/L,B超示子宫周 围游离液体,提示宫外孕破裂.转妇科检查:子宫颈明显抬举 痛,子宫前位稍大于正常,质软,左侧附件区压痛,反跳痛明显, 后穹窿穿束舶出不凝血5mL,诊为异位妊娠破裂,急诊手术. 术中见腹腔内积血约1000mL,子宫前位稍大,左侧输卵管峡 部妊娠破裂,有活动性出血,即行左侧输卵管切除术,手术顺 利,术后输血40OraL,输液加抗生素治疗7天,痊愈出院.病理 报告:左侧输卵管峡部妊娠. 例2,患者42岁,孕2产2存2,于2005年3月21日2时 突然下腹部疼痛,在当地卫生室注射"止痛针"(药名不详)无效 来我院急诊室.病人痛苦面容,面色苍白,四肢冰冷,脉搏细 弱,腹部稍降起,全腹压痛及反跳痛,以下腹部明显,病人述昨 晚喝凉饭一碗,以往无恶心,呕吐,急诊室以"胃肠炎"给予输液 观察,同时配合辅助检查.体温36.4"C,血压12/8kPa, 血Hb75g/L,WBC10×109/L,RBC3.3×1o10/L,妊娠试验 (+),B超示腹腔内大量积液,其间病人晕厥一次,立即转妇 科,追问病史,患者输卵管结扎术后8年,以往月经规律,现停 经4o天,妇科检查:外阴阴道正常,宫颈光滑呈现紫兰色,举痛 明显,后穹窿饱满触痛,穿刺抽出不凝血5mL,子宫前位,稍大 于正常,下腹部压痛,以左侧附件区明显,并有反跳痛.拟为异 位妊娠破裂伴失血性休克.立即行急诊剖腹探查术,术中见 腹腔内出血2000mL,子宫稍大,左侧输卵管峡部有活动性出 血即行左侧输卵管切除术.手术顺利,术中输血40OraL,术后 输血40OraL,并给予输液加抗生素治疗7天,痊愈出院.病理 诊断:左侧输卵管妊娠破裂. 讨论 本文两例患者,均系双侧输卵管结扎术后多年,虽有停 经史,但以胃肠道诱因及症状首诊,以''胃肠炎"收治开始, 后经观察,辅助诊断及妇科检查,拟诊为异位妊娠破裂,方 才急诊手术,以致延误病情.异位妊娠是妇科常见急腹症 之一,临床上将异位妊娠误诊为其他疾病或其他疾病误诊 为异位妊娠者并不罕见,特别是胃肠道病患更应加以认真 鉴别诊断. 绝育术后异位妊娠的发生率,近年来报道有所增加,其 原因有误扎,断端自行吻合,瘘管,夹或环自行脱落等,本两 例患者均是输卵管部分切除,近端包埋绝育法,术后几年未 经其他避孕措施均无妊娠史.本两例宫外孕均为峡部妊娠 破裂,分析原因,可能为断端自行吻合所致.病人绝育后忽 视了再次妊娠的可能,隐瞒月经史,只注重胃肠道症状,医 生诊断不及时,以致延误治疗. 医务人员,应严格遵守绝育手术操作,保证手术质 量.全面询问病史,综合分析,多方面会诊,是减少妇科急 腹症误诊病例的重点.