【doc】鸡肾型传支与大肠杆菌混合感染诊治案椤

【doc】鸡肾型传支与大肠杆菌混合感染诊治案椤 鸡肾型传支与大肠杆菌混合感染诊治案椤 资源育繁 鸡肾型传支与大肠杆菌混合感染诊治案例 向乾裕刘小元(湖南省洞口县兽医局422300) 2011年12月24日.洞口县竹市 镇一规模养鸡场畜主提着两只病死鸡 来兽医站就诊,我们询问了一些情况 后立即赶到该养殖场.该鸡场鸡群以 呼吸道症状为主.同时表现腹泻.中 后期病鸡脱水,死亡的疾病.结合疾 病流行特点,临床症状,病理剖检情 况及实验室,诊断为蛋鸡肾型传 支和鸡大肠杆菌病混合感染.现将诊 治情况报告如下. 1发病情况 该鸡场于2011年l1月份购进 2oo0羽雏鸡,12月20日时有12只鸡 m现张口呼吸且可听见明显的呼噜声. 两眼流泪,鼻有清涕,干咳,甩头, 有轻微湿呷音,打堆,精神沉郁.第 二天又有10只鸡发病,采食量下降. 继之腹泻,脱水.第天又发现10只 鸡发病,呼吸症状更加严重,排水样 粪便,并有8只鸡死亡.畜主采用呼 感康,泰乐菌素治疗无效. 2临床症状 发病鸡初期有呼吸道症状,剧烈 腹泻,此时鸡群未m现死亡,3,5天后 病鸡出现死亡.鸡群喜水厌食,病鸡 精神沉郁,闭目呆立,应激迟钝,翅 膀下垂病鸡机体迅速脱水失重,致 腿趾干瘪如棒,无光泽,排白色稀粪, 统计分析结果差异极显着(P<O.O1). 3 (1)试验结果表明.针对广西麻 鸡后期产蛋量下降过快的实际问. 在产蛋后期适当延长光照时间可以缓解 产蛋率下降的幅度,显着提高产蛋率; 开始出现散发死亡,雏鸡发病3天即 死亡. 3剖检变化 死亡鸡脱水,肌肉发红,腿干瘪; 喉部肿胀,充血.肾苍白肿大,双侧 肾脏同步肿胀,肾脏形成花斑肾.并 有尿酸盐沉积,泄殖腔充满尿酸盐. 胸腹腔气囊壁混浊,增厚,有黄白色 干酪样渗出物附着;心包膜增厚.并 附有大量渗出物,心包膜和胸腔粘连; 肝肿大,表面有淡黄色纤维蛋白膜附 着;腹腔内有许多纤维素性渗出物, 肠系膜粘连. 根据本病的流行特点,临床症状 和病理剖检.可作出初步怀疑该鸡场 为病毒和细菌混合感染.确诊则需实验 室进一步做血清学和分子生物学鉴定. 4实验室诊断 4.1病毒分离鉴定 4.1.1病毒分离 采集发病鸡的气管,肺脏和肾脏, 加入适量生理盐水和l000U/ml的双抗 后充分研磨,然后反复冻融3次, 12000r/min离心lOmin,取上清各接种 5枚10日龄SPF鸡胚(购自北京梅里 亚),每枚的接种量为0.2ml,置37? 孵育,不必翻蛋.接种后,24小时照 蛋一次,弃去死胚.此后,每4,6小 (2)光照刺激产蛋的原理是光线 刺激经眼神经传导至下丘脑或直接作 用于下丘脑,使之分泌并释放促性腺 激素,通过垂体前叶,引起促卵泡素 和排卵激素的分泌,促进卵泡发育和 成熟.达到刺激产蛋的目的.影响产 时照蛋1次,随时取死亡鸡胚,直 至48小时,无论死亡与否.全部取 ,气室向上直立,置2,8?冷却12, 24小时.收获,一2o?保存备用. 4.1.2病毒鉴定 4.1.2.1鸡胚致病性试验 将分离的病毒用灭菌生理盐水作 100倍稀释,经尿囊腔接种10日龄 SPF鸡胚l0枚,每枚胚0.1ml.置 37?继续孵育120小时.以此方法肓 传,观察鸡胚病变. 4.1.2.2血清学鉴定 将各代次病毒液分别做血凝试验 进行血清学鉴定. 4.1.2'3RT—PCR鉴定 参照GeneBank中发表的IBVN基 因序列一对引物,引物由上海捷 瑞公司合成;按照TRIzol试剂(购自 Invitrogen公司)提取鸡胚尿囊液 的病毒RNA,然后进行反转录,以反 转录产物为模版进行PCR扩增;取 l0PCR反应产物在l%琼脂糖中电 泳进行检验. 4.2细菌分离鉴定 4.2.1病原分离及纯培养 无菌操作.取病死鸡心血,肝或 脑组织划线接种于麦康凯琼脂平板, 鲜血琼脂平板上,置于37?恒温培养 蛋的因素很多,其中之一可能是随着 年龄老化,生殖系统功能有所衰退, 激素水平降低,导致产蛋下降,而延 长光照时间可以使光线的刺激作用加 强,从而提高了产蛋. 2012.眶强呸圈国127 箱中培养18,24小时,观察细菌生长 特性.挑取可疑菌落在麦康凯琼脂平 板上进一步纯化. 4.2.2染色镜检及形态观察 取纯培养的单个菌落涂于干净的 载玻片上.然后用瑞氏染色法染色和 革兰氏染色.镜检,观察其形态特征. 4.2-3生化试验 取纯培养物分别进行吲哚(靛基 质)试验,明胶琼脂试验,尿素酶试 验,葡萄糖,乳糖,阿拉伯糖发酵试 验.37?培养,连续观察3天. 4.2.4致病性试验 取纯培养的单个菌落划线接种于 麦康凯琼脂平板上.置37?恒温培养 24小时.刮取平板上所有菌落混于灭 菌生理盐水中制成细菌悬液.以平板 培养活菌计数法确定活菌数量,将其 浓度稀释到1.0xl0个活菌/ml,以 0.5ml/只剂量腹腔注射18—24克小白鼠 5只.同时设立灭菌生理盐水注射对照 组.攻毒后连续观察,每13记录小白 鼠的精神,食欲,饮水,粪便,运动 及死亡情况,并对死亡鼠进行病理剖 检,细菌分离及鉴定. 5结果 5.1临床诊断 根据本病的流行特点,l临床症状 和病理变化.初步诊断该鸡群疑似感 染了肾型传染性支气管炎病毒. 5.2实验室诊断 5.2.1病毒分离鉴定 5.2.1.1病毒分离 经接种SPF胚进行病毒增殖,分 离到两株病毒. 5.2.1.2病毒鉴定 5.2.1.2.1鸡胚致病性试验 将分离的病毒肓传至第6代时. 鸡胚H-现失水,蜷缩,发育小等传染 性支气管炎特征性病变.并有大量尿 酸盐沉积 5.2.1.2.2血凝试验鉴定 将收集的肓传各代的鸡胚尿囊液 进行血凝试验,结果显示血凝效价均 128~2012.3 为阴性. 5.2.1.2.3PCR鉴定 RT—PCR检测结果显示待检样扩增 产物均为1600bp左右,与设计的传染 性支气管炎病毒N基因序列片段大小 完全一致.结果见图1. l24 一图1传染性支气管炎病毒N基因 PCR检测结果 N基因特异性条带160bpM—maker20000, 1一阴性对照,2一阳性对照,3,4一待检样. 5.2.2细菌分离鉴定结果 5.2.2.1分离培养结果 在普通琼脂培养基上长中等大 小,半透明,露珠样菌落;在麦康凯 琼脂上菌落呈红色,如图2. 图2大肠杆菌在麦康凯培养基上菌落 5.2.2.2染色镜检及形态观察 取纯培养的单个菌落涂于干净的 载玻片上,然后用瑞氏染色法染色和 革兰氏染色.镜检为革兰氏阴性短小 杆菌,如图3. 图3大肠杆菌革兰氏染色图片 5.2.2-3生化试验鉴定结果 从该鸡场病鸡上分到的菌株做生 化试验,结果显示该菌分解乳糖,葡 萄糖产酸产气,不分解蔗糖,不产生 硫化氢,V—P试验阴性,利用枸盐酸 盐阴性,不液化明胶,吲哚(靛基质) 试验阳性. 5.2.2.4致病性试验 用分离的菌株进行致病力测定实 验.结果表明注射菌组的5只小鼠全 部死亡.对照组全部健活.剖解死亡 小鼠进行分毒,再次分到与上述形态 相同的革兰氏阴性杆菌. 6小结 综合以上临床症状,病理剖检及 实验室诊断确诊该鸡群为肾型传染性 支气管炎和大肠杆菌混合感染. 7防治措施 (1)加强饲养管理,如在育雏舍 内可提高温度1,2?,减少应激.防止 密度过大和贼风侵袭.注意全方位消 毒,加强通风换气,提高空气质量. (2)保肾纯中药用温水浸泡3次, 加0.5%红糖水集中3,4小时饮水.药 渣集中拌料.药水还可配合小苏打 (碳酸氢钠).保肾中药最少用5天. (3)饮水中加电解速补.250g兑 水60L,随配随饮,每天4,8小时,任 其自饮,不可限量,以补充葡萄糖, K圾Na等,缓解脱水症状. (4)降低饲料中的蛋白质水平, 可在每100kg配合料中添加10,20kg 玉米. (5)干扰素等生物制品连用2天, 调理1,2天后用恩诺沙星可溶性粉连 续治疗,5天为一疗程.同时饮水中可 以添加黄芪多糖,干扰素等免疫增强 剂,提高机体免疫力. (6)用酵母菌,双歧杆菌等微生 态制剂添加在饲料中喂服.不但可以 提高鸡群的抗病力,而且对鸡大肠杆 菌引起的肠道正常菌群失调所致的腹 泻有明显的治疗效果. 以上治疗经过5天,鸡群病情得 以控制,恢复正常水平.