大米培养基添加不同营养成分培养蛹虫草试验

大米培养基添加不同营养成分培养蛹虫草试验 大米培养基添加不同营养成分培养蛹虫草 试验 2011(2)巍蠲 l 培养材料 .誊"m#臻 大米培养基添加不同营养成分培养蛹虫草试验 温志新孙永欣李学军米锐孟楠石理鑫李亚洁 (辽宁省农业科学院大连生物技术研究所,辽宁大连116024) 摘要试验在蛹虫草大米培养基中添加不同营养辅料,比较 观察子实体生长情况.结果表明,大米培养基中添加无机盐磷酸 氢二钾,硫酸镁与有机物葡萄糖,牛肉膏与蛋白胨混合物以及单 独添加磷酸二氢钾与硫酸镁混合物都能显着提高虫草生长,且 优品率也高于对照组.重量最高增加了41.99%,优品率最高增 加了13.32%,都达到提高虫草生长的目的. 关键词无机盐蛹虫草培养基生长 文章编号1000-8357(2011)02-0029一叭 蛹虫草,又名北虫草,是与野生冬虫夏草相似的一个种, 隶属虫草属. 蛹虫草与同属的冬虫夏草有极为相似的保健功效和药用 价值,具有抗疲劳,耐缺氧,抗衰老的功效,能显着增强非特异 性免疫系统及促进抗体形成,具有良好的医用价值和保健作 用{21.近年来,国内外市场消费需求增加,特别是在日本与南 亚国家深受欢迎.采用不同培养基栽培虫草研究报道很多,传 统培养基都采用大米加自来水模式,一些研究尝试着添加不 同营养物质,得到很好的效果,但仅限于有机质阡.研究添加 有机质和无机盐对虫草生长促生长作用影响. 1材料与方法 1.1供试菌株菌株为本实验室分离纯化所得. 1_2培养基斜面培养基:综合PDA培养基;一级液体种培 养基:去皮土豆200g,葡萄糖20g,MgSO?7H201.5g,KH2PO4 3g,VB-0.02g,自来水1000m;栽培培养基:优质大米25g, 含不同营养组分营养液40mL,设8个不同处理(详见表1). 表1不同处理添加营养成分(%) 1.3试验方法 1.3.1菌种活化将实验菌种接入PDA培养基中,置于20 恒温生化培养箱中培养7,10d,菌丝长满斜面备用. 1.3.2一级液体种培养将配制好的液体种培养基分装入三 角瓶中,每瓶200mL,聚丙烯膜封口,于121qC灭菌40rain.冷 收稿日期:2010-07-22 e-mail:sunyongxin@126.corn 却后无菌条件下接人活化的斜面菌种,每瓶接入2,3块绿豆 大小的菌块,放入摇床中,25?静止培养2d,再于130r/rain 震荡培养3d,至菌球充满全部液体培养基. 1.3.2栽培方法与采收于500mL罐头瓶中装人大米25g, 加入含不同营养组分自来水40mI,双层聚丙烯膜包扎, 121cC灭菌1h.冷却后无菌条件下注射接人液体菌种6mL, 每个处理2O个重复.2O一23?通风条件下暗条件培养约7d, 至培养基中长满菌丝后上架.以300lx散射光照射,待出现子 实体突起后,加强光照强度间歇照射(400lx,照射1h,间歇 80rain),并刺破罐头瓶封口膜,增加通风.期间室温为20, 24?,湿度在发菌期为70%-80%,出现子实体后增加到80%- 9O%.接种约50d,虫草子实体顶部子囊壳开始膨大后采收. 1.4测试与统计调查各组子实体平均高度,产量和优品 率,用SPSS13.0统计软件对各组子实体产量进行多重比较, P<O.05为差异显着,P<O.叭为差异极显着. 2试验结果 从表2可见,栽培培养基中添加营养物后,除处理?和 处理?外,其它处理组的虫草子实体平均高度和重量均显着 或极显着高于对照组(P<O.05),其中处理?,?,?和?的平 均高度和重量都极显着高于对照组(0.O1),重量最高提高 了41.99%(处理?).与对照组相比,各实验组优品率都有提 高,其中处理?最高,提高了13.32%,但没有达到统计学差异 (尸=0.05). 表2不同处理培养对虫草生长的结果 3结论与讨论 研究证实,硫酸镁是微生物发酵常用营养源,镁离子是许 多酶的活化剂.磷酸二氢钾添加到真菌培养基中除提供必需 营养成分外,还具有缓冲培养基pH作用,因此在培养基中添 加有利于虫草的生长.从结果试验看,配方中的低剂量无机盐 组(处理?)与高剂量组(处理?)作用相当,表明无机盐的添 加只需少量即可满足虫草生长需要,在这个基础上不需要添 (下转P53J 29 2011(2)霞固 之间相距100m以上.环境质量符合NY5010—2002. 2.4采取防止基质变质适宜菌丝生长的段木块含水 量是33%,48%,若原木砍伐时间较长,可于截段前或截段后 浸水5-24h或加大填充用木屑的含水量.装袋后要尽快码袋 灭菌,冬季装袋后到灭菌开始的时间间隔也不宜超过2d.注 意一次性灭菌数量不宜太多(1OO0o袋以内为宜),以免造成 灭菌不彻底,基质变质,延长灭菌,接种时间,增加菌袋感染 率. 2.5使用高质量的塑料袋.减少微子L使用产品质量可靠, 稳定的厂家生产的塑料袋,厚度要求0.035mm,0.051I//I1,装 袋,灭菌,接种及运输过程中要轻拿轻放,发现被段木块刺破 的菌袋.须用纸胶布或透明胶布粘住菌袋砂眼或微孔. 2.6灭菌彻底灭菌仓内叠放料袋时要堆叠合理,纵向每4 排料袋约宽60cm作为一行,行与行之间要留有空隙,以使蒸 汽均匀循环.用旺火烧到罩膜鼓起时,排出冷空气,当罩膜内 温度达到100时,连续保持24-30h,才可以停火降温;注意 加温过程中要适时加水,保持水在规定的水位范围内,加水过 程中要保证罩膜内温度不下降.灭菌时,防止灭菌罩膜漏气, 要注意蒸汽炉的蒸汽发生量与灭菌物数量相匹配,灭菌袋数 增加,应相应延长灭菌时间. 2.7接种时防止料温太高料温太高,超过38?,易烧死菌 种,最好是在灭菌后的料袋还有余温(32-35qC)时接种. 2.8提供适宜的培菌环境在培养室或塑料薄膜大棚内暗 光培养,最好保持t分阴三分阳,以利菌丝生长.清除鼠害.发 菌阶段,要定期检查,翻堆,通风,严防料温上升到32?以上 而出现"烧菌"现象;发菌期间培养室(棚)内温度低于2O?, 可用火加温,每天中午通风1-2h.菌丝爬满木段后,再在弱 光环境中培养20d以上,促使菌丝老化,培菌时间需2,3个 病虫害防治篓?.《l?i 月.当短段木发菌达到生理成熟(如部分芝木出现红褐色菌 被,部分有芝芽形成,劈开段木其木质部呈浅黄色或米黄色) 时,才可以覆土出芝. 2.9合理调控遮阳把生理成熟的菌段运到栽培场并摆放 于遮阳乎棚的立柱行内以后,要进行"炼捧",即在弱光环境中 (可用稻草,草苫覆盖,避免强光直射)利用室外早晚温差大的 环境对芝棒进行适应性锻炼.栽培管理过程中,可通过调节荫 棚顶部的稻草等遮阳物,来调控遮阳度,6月中旬前半阴半阳 管理,6月中旬一9月中旬六阴四阳管理,9月中旬以后半阴半 阳管理. 2.10芝棒下地后严禁灌水短段木埋土时,要求土壤含水 量在16%,18%;在出芝期间,要求土壤含水量在l9%,22%. 严禁芝棒下地后灌水.豫南地区,雨量充沛,灵芝生长期一般 不需灌水调节土壤湿度. 3小结 段木熟料栽培灵芝生产工序多,菌棒污染原因多,每一个 生产环节不注意都有可能造成芝棒污染.坚决杜绝不严格执 行操作规程,完全凭,想当然地进行段木灵芝生产的做 法.一般而言,在品种优良,菌种生长良好,段木基质适宜,灭 菌彻底,接种操作,培养条件适合,菌木达到生理成熟,芝 棒下地及田间管理到位的条件下,就能够生产出优质的灵芝 产品. 参考文献 【1】魏银初,班新河,李久英,等.段木灵芝模式化栽培技术[J】. 食用菌,2010(2):46—47. 周功为,何建芬.灵芝短段木栽培中杂菌侵害与防治【JJ. [2]周功和, 浙江食用菌,l996(4):33—34. 坏0坏i场哆乌{夺:蝽乌乖,.哆哆场i尔场孙坏缘砖夺 (上接P29) 加葡萄糖(处理).在基础配方中添加牛肉膏和蛋白胨后,虫 草生长与只添加无机盐相比没有明显差别,推测牛肉膏和蛋 白胨提供的主要营养物质——磷酸盐,碳源,氮源和维生素在 磷酸二氢钾和硫酸镁存在的情况下已并非限制性因子,即达 到了营养饱和.因此再添加并不能有促进生长作用,反而由于 添加物质过多导致培养基缝隙过密,不利于出草.处理?和处 理?的无机盐和葡萄糖添加量相等,但分别添加了牛肉膏和 蛋白胨,虫草生长出现统计学差异,这可能是由于牛肉膏和蛋 白胨分别添加导致培养基中C:N比例改变,牛肉膏中提供大 量碳源,而蛋白胨提供大量氮源,而只有在合适的C:N前提 下,虫草子实体才能正常生长.在葡糖糖提供了足够碳源的 基础上,培养基中添加蛋白胨更适合虫草生长.在大米培养基 中只添加有机质(处理?),虫草的生长和只添加无机盐相当, 因此,在实际生产中,性质稳定而价格较低的无机盐更为实 用. 参考文献 【1】卯晓岚.中国大型真菌【M].河南郑州:河南科学技术出版社, 2000:566 [2]李春燕.辽宁虫草,第1版【M】.中国香港:亚洲医药出版社, 2005:42. 张显科,张文霞.不同培养料栽培蛹虫草实验研究fJ].中国食用 菌,1999,16(2):21—22. 刘华晶,许修宏,高士刚.不同培养基对北虫草生长的影响【J】. 东北农业大学,2004,35(3):325—328. 赵春燕,李红,张敏,等.北虫草人工栽培条件的优化[J1_沈阳农 业大学,2oo6,37(2):209—212. 孟繁宇.蛹虫草高产菌株人工栽培条件的优化[JJ.食用菌, 2009(4):55-56. KalbererPP.WaterrelationsofthemushroomcultureAgarieusbis— porus:StudyofasinglebreakIJ].ScientiaHortieuhurae,1990, 41(4):277—283. (林地栽培灵芝,文字介绍见P40) 3 34567