提高机采血小板血浆氧含量对血小板功能影响的探讨

提高机采血小板血浆氧含量对血小板功能影响的探讨 提高机采血小板血浆氧含量对血小板功能影响的探讨 【摘要】 为了探讨提高机采血小板血浆中的含氧量对血小板功 能的影响，将机采血小板样品分为实验和对照2组。实验组在无菌条 件下提高机采血小板血浆中含氧量(溶解氧)后，两组同时放置 content on function of platelet concentrate，the platelet concentrate as prepared by a CS-3000 plus blood cell separator. Experiments ere divided into 2 groups: test group and control group. After raising oxygen content in platelet plasma under sterile operation，the platelet samples of to groups ere preserved in oscillator ith horizondal oscillation at 22?2?. The platelet count，platelet aggregation rate，lactic acid content and CD62p expression level of platelet ere detected on 0，1，2，3，4，5 days of platelet preservation. The results shoed that the platelet count and platelet aggregation rate decreased ith prolongation of preserved time，hile the lactic acid content and CD62p expression level of platelet increased gradually. Compared ith control group，there ere significant diffrerences in aggregation rate of platelet preserved for 2-3 days，and in CD62p expression level of platelet preserved for 1-3 days， hile significant diffrerence as found in lactic acid content of platelet preserved for 1-3 days. It is concluded that raising content of oxygen in platelet plasma can provide more oxygen to pensate oxygen supply deficiency for platelet metabolism and improve the efficiency of platelet oxygenic metabolism and the quality of platelet during preservation. Key ords platelet; dissolved oxygen; lactic acid; CD62p 血小板输注是成分输血的重要组成部分，输注血小板对各种原因引 起的血小板减少性和(或)功能障碍性出血具有不可替代的治疗作用。 目前，血小板常规22?振荡保存，同时采用透气性好的保存袋，改 善呼吸环境，既可提高血小板保存质量，又减少血小板的功能损伤。 我们根据这一作用机理，采取振荡保存的同时提高保存袋中机采血小板血浆中的含氧量(溶解氧)，研究血小板在保存期中的变化，现将结果报道如下。 材料和方法 设备与材料 Baxter CS-3000 plus 血细胞分离机及配套的全密闭塑料套材字2000第2560068号)。 机采血小板 由江苏省血液中心成分室提供。血小板按CS-3000 plus 血细胞分离机操作规程采集，ACD-A:全血=1?10抗凝，血小板采集量约为2.5×1011/袋。 血小板处理保存 血小板产品充分摇匀后，取30 ml血小板制品，分装在2个保存袋中，1袋为对照组(Cc组)，1袋为实验组(Tc组)，放置无菌室，用氧苏TM 医用自动充氧器在无菌条件下将充氧器钢针插入保存袋的联接管中，按指示标向轻轻拧动充氧器阀体，调整适当气量后进行充氧10分钟，在提高机采血小板血浆内溶解氧含量后，用热合机热合联接管并分别放置于?水平振荡的血小板振荡仪保存。 血氧溶解度测定 于充氧前、后即刻从机采血小板血浆保存袋内各取0.5 ml样品，放入血气分析仪芯片中进行血气溶解度测定，作复管，取均值。 血小板计数 于保存前和保存后1、2、3、4和5天，分别从振荡的血小板保存袋内各取1 ml样品，摇匀后，抽取100 μl，用稀释液作5倍稀释，用Sysmex Kx-21血细胞分析仪计数，作复管，取均值。 血小板聚集功能的测定 分别从保存0、1、2、3、4、5天的中取样，将已加入250 μl的PPP血浆的测试杯放入血小板聚集仪中，测定PPP血浆的OD值，将样品PRP血浆加入测试杯中，加入测试球，预温2分钟后，用加样器吸取没食子酸丙酯溶液CPG加入测试杯中，使终浓度为300 μmol/L，开始检测，最大测定时定为360秒，测定最大血小板聚集率。 血小板液乳酸含量测定 以NAD+为氢受体，LDH催化乳酸脱氢产生丙酮酸，使NAD+转化成NADH。其中PMS递氢使NBT还原为紫色呈色物，呈色物的吸光度在530 nm时与乳酸含量呈线性关系。试剂盒由南京建成生物工程研究所提供，操作按说明书进行。分别对保存0、1、2、3、4、5天的样本测定。 血小板CD62p表达量测定 分别对保存0、1、2、3、4、5天的血小板取样稀释，处理后取100 μl样品于测试管中，设置对照，在FACS Calibur 流式细胞仪进行CD62p表达量检测。 统计学处理 各测定值组间均数比较用t检验。 结 果 表1的数据显示了实验组和对照组在0天的机采血小板血浆中的含氧量(溶解氧)。由表1可见，实验组含氧量显著高于对照组。表2的数据显示了实验组和对照组的血小板计数、血小板聚集反应功能、血小板液乳酸含量、血小板CD62p表达量在1-5天保存期内的变化。由表2可见，随着浓缩血小板保存时间的延长，两组血小板计数均呈下降趋势，两组之间的血小板计数比较无显著性差异。血小板液乳酸含量均不断上升，两组之间比较，保存1-3天的乳酸含量实验组明显低于对照组 ，而4-5天段无显著性差异。血小板聚集反应功能均呈下降趋势，两组之间比较，在2-3天差异有显著性。血小板CD62p表达量变化随保存时间呈上升趋势，实验组在保存1-3天时段明显低于对照组(P 0.05)。Table 1. Contents of dissolved oxygen in the platelet concentrates of to groups at day 0 (略) 讨论 目前，对血小板保存方法主要有3种,1,，其中常规的方法是在22?条件下振荡保存;随着透气性差