抗病毒口服液的抗菌抗病毒试验研究

抗病毒口服液的抗菌抗病毒试验研究 ? 448?JournalofPracticalTraditionalChineselnternalMedicine2003,Vo1.17,No.6 抗病毒口服液的抗菌抗病毒试验研究 王淑云朱萱萱张小萍 (南京中医药大学附属医院副主任药师,南京210029) 口服液;抗菌;抗病毒 文献标识码:A文章编号:1671—7813(2003)06—0448—02 抗病毒口服液为中药复方制剂,临 床用于因细菌感染和病毒所至上呼吸 道感染具有较好的疗效,为其药效 作用,进行了体内外抗菌和体内抗病毒 试验.现如下: 1实验材料 药品与试剂抗病毒口服液为中 药复方制剂,由南京中医药大学药理室 提供.批号(010723)临用前用蒸馏水配成所需浓度;利巴韦 林胶囊(浙江一新制药有限公司),批号010105;抗病毒颗粒 (四川光大制药有限公司),批号000529;双黄连(哈尔滨松 花江制药厂),批号001014;双黄连口服液(张家港楚港制药 有限公司)批号000713;营养肉汤(江苏省卫生防疫站微生 物试剂厂),批号991004;营养琼脂(上海市医学化验所),批 号990401. 动物昆明(KM)种小鼠,由南京医科大学实验动物 中心提供.合格证号:苏动质97001. 菌株与病毒菌株:金黄色葡萄球菌(26003),大肠 杆菌(44103),短小杆菌(63202),枯草芽孢杆菌(63501)和藤 黄微球菌(28001)由卫生部微生物鉴定所与江苏省药检所提 供.临床分离菌株:金黄色葡萄球菌,大肠杆菌,绿脓杆菌, 不动杆菌,肺炎克雷白氏菌,表皮葡萄球菌,人葡萄球菌,洋 葱假单孢杆菌,枸橼酸肠杆菌,链球菌,变形杆菌及肺炎双球 菌等由江苏省人民医院微生物室鉴定提供. 甲型流感病毒A/PR/8/34由中国预防医学科学院病毒 所提供. 仪器FA1o04电子天平,上海天平厂,净化工作台, 苏州净化设备厂,孵箱上海分析仪器厂,c02培养箱,德国贺 利氏公司. 2实验条件 给药前后实验小鼠分笼饲养,喂饲全价颗粒饲料,自由 饮水,室温24?2?,湿度55%,65%. 3实验方法和结果 抗病毒口服液的抗菌作用体外抑菌试验 平板打洞法取18小时培养的各菌株营养肉汤培养 物,用营养肉汤作10-3稀释用于在直径9cm的灭菌平皿加 菌液lml,然后倒入已融化冷却至45?的营养琼脂培养基 20ml旋转混匀.等冷固后用直径6ram的灭菌钢管于琼脂平 皿上打孔,用无菌镊子取出孔内培养基,于每个孔内分别加 入lg/ml,0.5g/ml和0.25g/ml药液0.1ml(双黄连0.1g/ mg,加入第四孔中),置37?培养20小时,取出平皿,量取抑 茵圈直径,重复1次,取2次实验平均值,结果见表1. 表1抗病毒口服液体外抑菌试验(平板法)(n=2) 试管法取18小时培养的各菌株营养肉汤培养物,用 营养肉汤作10I3稀释用于实验,取灭菌试管10只,于第一 管加入营养肉汤液体培养基1,6ml,其余每管lml,取受检药 液(1g/m1)O.4ml加入第一管中,混匀后取lml至第二管,依 次稀释,第10管吸出lml弃去,37?培养.实验按常规设立 只有药物不接种细菌的阴性对照组和没有药物只接种细菌 的阳性对照组.20小时取出观察.结果见表2. 表2抗病毒口服液体外抑菌试验(试管法)(n=2) 菌株名称最抑度菌株名称最抑度 rag/IIl1)tmg/IIllJ 体内抗菌作用 对金黄色葡萄球菌感染小鼠的保护作用取18,22g, KM种小鼠126只随机分组,每组21只,雌雄兼用.(1)空 白对照组等量生理盐水;(2)模型对照组,等量生理盐水;(3) 双黄连1:3服液组20ml/kg;(4)抗病毒口服液I组4,62g/kg; (5)抗病毒口服液?组9.24.g/kg;(6)抗病毒口服液?组18. 48g/1【g.以上各组小鼠均灌胃给药,灌胃容量20ml/1【g,1次 /天×6天,第3天给药1小时后,腹腔注射金黄色葡萄球菌 菌液0.5ml/只鼠(除空白对照组外),继续给药3天,观察各 组动物7Et内死亡情况,结果见表3. 抗病毒口服液对肺炎双球菌感染小鼠的保护作用取 18,22gKM种小鼠126只随机分组,分组同3.1.2.1,1次/ 天×6天,第3天给药1小时后,腹腔注射肺炎双球菌菌液 0.5ml/只鼠(除空白对照组外),继续给药3天,观察各组动 物7Et内死亡情况.结果见表4. 2003年第17卷第6期实用中医内科杂志?449 表3抗病毒口服液对金黄色葡萄球菌感染小鼠的保 护作用 *与模型对照组比较 取KM种小鼠6O只,体重11,14g,雌雄各半,随机分组, 每组1O只,分组同3.2.2(空白对照组除外).以上各组小 鼠均灌胃给药,灌胃容量10ml/kg,1次/天×6天,给药第2 天各组小鼠(除空白对照组外)在乙醚浅麻醉下以增毒3次 的病毒尿囊液滴鼻感染小鼠,每鼠30ul(15个LD5o攻击量). 实验前禁食不禁水,实验当日各组小鼠称重,脱颈处死,解 剖,观察肺部病变,取全肺称重,计算各鼠肺指数值,肺指数 抑制率,计算各组间差异,并取肺用1O%甲醛固定,作病理 组织学检查,结果见表6. 表6抗病毒口服液对甲型流感病毒感染小鼠肺指数 表4抗病毒口服液对肺炎双球菌感染小鼠保护作用的 *与模型对照组比较 抗病毒口服液的体内抗病毒作用病毒感染小鼠半数 致死量(LD50)测定取KM种小鼠49只,体重11,13g,雌 雄兼用,随机分成7组,每组7只,取增毒3次的病毒尿囊 液,以1O倍稀释,每组滴一个病毒浓度,各组小鼠在乙醚浅 麻醉下以病毒尿囊液30ul滴鼻,观察14天内死亡数,按 ReedMuench法计算,LD50为2.88. 抗病毒口服液对甲型流感病毒感染小鼠的保护作用 取KM种小鼠140只,体重11,13g,雌雄各半,随机分成7 组,每组2O只(1)空白对照组,等量生理盐水;(2)模型对照 组,等量生理盐水;(3)利巴韦林组75mg/kg,7.5mg/lT11;(4) 抗病毒颗粒组3g/kg,0.3g/ml;(5)抗病毒口服液I组4.og/ kg,0.46g/ml;(6)抗病毒口服液?组9.24g/kg,0.92g/ml; (7)抗病毒口服液?组18.48g/kg,1.85g/ml.以上各组小 鼠均灌胃给药,灌胃容量10ml/kg,1次/×6天,于给药第2 天各组小鼠(除空白对照组外)在乙醚浅麻醉下以增毒3次 的病毒尿囊液滴鼻感染小鼠,每鼠30u1(20个LD50攻击量). 观察动物感染后发病症状,感染14天后死亡数,并计算 保护率及平均存活天数,结果见表5. 表5抗病毒口服液对甲型流感病毒感染小鼠的保护 作用 与病毒对照组比较*P<0.05.**P<0.01,***P<0.001 抗病毒口服液对甲型流感病毒感染小鼠肺指数的影响 与病毒对照组比较*P<0.05,**P<0.01 4讨论 为考察抗病毒口服液临床疗效的药理学基础,笔者进行 了体外抑菌,体内抑菌,体内抗病毒等试验.体外抑菌试验 表明,抗病毒口服液对金黄色葡萄球菌,表皮葡萄球菌,藤黄 微球菌,肺炎双球菌,洋葱假单孢杆菌,短小芽孢杆菌,枸橼 酸肠杆菌有较好的抑菌作用.体内抑菌试验表明:对肺炎双 球菌感染小鼠具明显保护作用,存活率达到66.6%;对金黄 色葡萄球菌感染的小鼠未能显示有明显的保护作用.体内 抗病毒试验表明,对甲型流感病毒感染小鼠具明显保护作 用,保护率达50.0%,并可延长感染小鼠存活天数,降低感 染小鼠的肺指数值,具有减轻小鼠肺部感染的作用.组织病 理学检查结果提示,甲型流感病毒感染成功复制小鼠肺部炎 性病变,主要表现为化脓性支气管炎,小叶性肺炎和间质性 肺炎;不论是阳性对照组(利巴韦林胶囊,抗病毒颗粒)还是 抗病毒口服液各剂量组,与模型组相比,肺部病变均明显减 轻,而抗病毒口服液各剂量组又较阳性组为轻,其中抗病毒 口服液高剂量组肺部总体病变程度最轻.因此,可以认为抗 病毒口服液的临床功效是可信的,是一种很有开发前景的中 药制剂,同时为临床用药提供理论依据. 参考文献 (1]陈奇主编.中药药理研究方法学(M].北京:人民卫生出 版社.1993 (2]刘劲松,齐方埠,贺蕊等.荆防口服液抗病毒作用的研究 (J].中药药理与临床.1998,14(1):41 (3]杜平主编.医用实验病毒学(M].北京:人民军医出版社, 1985,第一版:111 (4]朱萱萱,徐立,方泰惠.肺毒清抗菌抗病毒实验研究(J]. 中药新药与临床药理,2001,(124:263 (收稿日期:2003—06—17)