动物细胞融合

动物细胞融合 医学细胞生物学型实验设计报告 姓名 班级 学号 评分 实验项目: 动物细胞融合 实验原理: 细胞融合，即在自然条件下或用人工方法(生物的、物理的、化学的)使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。人工诱导的细胞融合，在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。由于它不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域。 细胞融合的诱导物种类很多(常用的主要有灭活的仙台病毒，聚乙二醇和电脉冲。目前应用最广泛的是聚乙二醇，因为它易得、简便，且融合效果稳定。PEG的促融机制尚不完全清楚，它可能引起细胞膜中磷脂的酰键及极性基团发生结构重排。 实验步骤: (1)取新鲜鸡血以0.85,生理盐水制成10,的悬液。 (2)称取0.5克PEG(MW=4,000)放入试管内，在酒精灯上融化之，迅速加入0.5ml预热的Hanks液混匀制成50,的PEG溶液。放入37?水浴中待用。(3)取上述10,的鸡红细胞悬液1ml放入离心管中，再加入5ml Hanks 液混匀，然后以1,000rpm离心5分钟，小心弃去上清，用指弹法将细胞团 块弹散。 (4)取上述50,PEG溶液0.5ml，在1分钟内滴加到鸡红细胞悬液，边加边轻轻摇动混匀。待PEG全部加入后静置1分钟左右。此全部过程都在37?水浴内进行。 (5)缓慢滴加9ml Hanks液以终止PEG的作用，在37?水浴内静置5分钟。 (6)离心弃上清后，取一滴融合后的细胞悬液滴片，加盖片镜检。 注意事项: (1)制备的50%PEG一定要保温在于37?水浴中，不染冷却后结晶析出。 (2)在离心管中加PEG之前，一定要将离心管倒置滤纸上，流尽剩余液体， 否则残留液会改变PEG的浓度。 预期结果:在高倍镜下可以看到有两个或两个以上的鸡红细胞膜融合在一起，形成一个异核体细胞。要注意辨别融合细胞与重叠的鸡红细胞。 教师: 日期: