[doc格式] 大鼠心脏停搏供体动脉化原位肝移植模型制作体会

[doc] 大鼠心脏停搏供体动脉化原位肝移植模型制作体会 大鼠心脏停搏供体动脉化原位肝移植模型 制作体会 第2l卷第3期 2OO9年5月 肝胆胰外科杂志 J()uma10fHepatopancreatobiliarySurgefy V01.2lNo.3 Mav.20O9 大鼠心脏停搏供体动脉化原位肝移植模型制作体会 张宝良’,袁庆鑫,刘彤 (1.河北医科大学附属唐山工人医院普外腔镜科.唐LlJ06300HD;2.天津医科大学总医院普通外科,天津3o0052) [摘要】目的建立一个稳定的大鼠心脏停搏供体动脉化原位肝移植模型.方法根据供肝获取前经历供体 心脏停搏时间的不同分为热缺血0min(W0组),热缺血15min(W15组)和热缺血30min(W30组)3组.其后 用Engemann法建立大鼠动脉化肝移植模型,比较术后肝功能,病理,手术成功率(>3d)和长期生存率(>100 d):结果W0,Wl5和W30组手术成功率分别为100.0%(15门5),93.3%(14/l5)和86.7%(13/l5),术后长期生 存率分别为l00.0%(6/6),83-3%(5/6)和66.7%(4,6),二者在3组间差异均无统计学意义.常规组织病理结果显 示:随着供肝热缺血时间的延长,移植肝损伤加重3组术后第3天血清丙氨酸转氨酶AIJrr和AST均无显着性 改变结论来自于无心跳供体的大鼠肝脏在热缺血30min以内是安全的,移植术后可以长期存活.该模型有 助于肝移植热缺血损伤的研究 [关键词]肝移植;心脏停搏;大鼠;动物模型 [中图分类号]R6573[文献标识码]A[文章编号]1O07一l954(2009】O3—0177—03 Asurgicalexperience0fhepaticrearterializati0ninOrth0t0picliVertrallSpla ntati0n0fratsfr0mn0n- heartbeatingd0n0rs删』】vG曰删伽,y?Qn木,,J,f/术,Josc叩,)如,,J州一 啪e,GeerS”,fzn.e’Hosp,fedHe6e朋dc【/ne,7n,l063O00 ?墨墨圈 0bjectiveToestablishare1iab1eratsmodeloforthotopiclivertransp1antati 【)nwi【hhepatic aneryreconstrI|(ti0nfromnon—heartbeatingdonors.?【eth0dsThemodelwasestablishedwithEngemann’s metho(1.rheratswere(1ivjdedintothreegroups(w0,wl5,w30,n=15/gmup)a ccordingt0thecardiacarrest timef_rnInzer0to30minwith15intervals.Hepaticfunction,path0logy,thesuccessfulI_ate(1ongerthan3 ter days)()fthemodelan(1tl1el0ng— 『IIsuIival(1ongerthanl00days)ratewerecompared.ResultsThesuc— cessfI】 lmteandthelong—terrnsurviva1ofW0,w15andw30were100.0%(15/15),93_3%(14/15),86.7%(13/ l5)and100.0%(6/6),833%(5/6),66.7%(4/6)respectively,whichshowednosignmcantdiffPrenceinallthree gr(】ups.Pathologi 【alstudjessh()wed?verparenchymaIiuryaggravatedwiththewannischemiatime.Senlm levels0fALTandASTinallgr0upsshowedno?憎.rkeddi雠 renceon3daysaflersu昭ery.ConclusionRats li,fergraft(?anbesaflysuecttowa不 T1ischemiawithin30minutesandhavel0ng—terrnsunriva1.Themodel isusefu1fnrthestu(1v0f?vertransplantati0nflrnmwannischemiaofthegraft. 1ivertransplantation;heartarrest;rats;animalmodel 目前.肝脏移植已经成为治疗终末期肝病疗效 确切的手段.但在我国的临床肝移植中.供肝主要来 源于无心跳供体,而国外随着肝移植术后生存率及 生存质量的提高,也尝试利用无心跳供体来缓解供 肝来源短缺与等待肝移植患者剧增之问的矛盾.无 心跳供体肝移植术后移植物和患者的生存率着降 低,并且术后原发性肝无能和再次肝移植的机会增 高….此,本实验建立大鼠心脏停搏供体动脉化原 位肝移植模型,为今后进行相关研究提供依据. 收稿日期:2008一O9—03 作者简介:张宝良(1972一),男,河北滦南人,医学博士,主治医师. 1材料和方法 1.1实验动物及分组选用雄性近交系I七wis大 鼠,质量15O,170g,购于北京维通利华实验动物技 术有限公司.所有动物均在清洁,温暖(20?,25?), 通风环境下,普通饲料喂养.体质量增至18O一220g 行原位肝移植术.根据供肝获取前经历供体心脏停 搏时间的不同分为3组:热缺血Omin(W0组),热 缺血15min(Wl5组)和热缺血30min(W30组). 1.2手术方法【供体,受体术前禁食12h.不禁 水.供体4%水合氯醛溶液7.5ml/kg腹腔内注射麻 醉,于双人双目显微镜下行清洁手术.W0组:供肝 一 177— 第2l卷肝胆胰外科杂志第3期 基本分离完毕后,自腹主动脉插管灌注4?乳酸钠 林格氏液.直至肝脏颜色呈土黄色,切取肝脏及腹主 动脉袖套,保存于4?乳酸钠林格氏液中.W15组和 W30组供体手术:供体麻醉满意后,经阴茎背静脉 注入肝素钠生理盐水2ml(含肝素钠500U),约5 min后开胸用血管钳夹闭心脏基底部致心脏停搏, 热缺血时间自夹闭心脏基底部起至冷灌注前测算_5]. 大鼠动脉化原位肝移植操作步骤参照Enge— mann法}31,3组的无肝期,肝下下腔静脉阻断时间, 腹主动脉吻合时问,无肝期结束至肝动脉开放时间 和冷缺血时间均差异无统计学意义: 1.3观察指标每组各15只大鼠,术后存活>3d 判为手术成功对于存活超过3d者,每组随机选取 6只大鼠观察其长期牛存率(>100d),另各分别随 机选取6只处死获取肝组织及清肝组织标本行 常规HE染色检查;【『IL清行ALT,AST. 1.4统计学方法应用SPSS13.0统计软件包进行 数据分析处理.所有结果.当P<0.05时认为具有统 计学意义. 2结果 2.】大鼠动脉化原位肝脏移植模型手术成功率 本实验共行大鼠动脉化原位肝脏移植模型45次,随 着供肝热缺血时间的延长,手术成功率下降;但差异 无统计学意义(见表1)3只大鼠均于术后48h内 死于原发性肝无能,表现为肝移植术后行动迟缓,不 思饮食.大体解剖发现腹腔内大量腹水,肝脏色泽不 均.3组术后长期生存率(>1o0d)分别为1()().0%(6/ 6),83-3%(5/6)和66.7%(4/6),无明差别(见表 1).其死亡原因分别为:,,,30组2只术后第9天,15 天和Wl5组的1只术后第17天均死于肝脓肿,表 现为精神状态差,进行性消瘦,厌食,尸检显示肝脏 多发脓肿形成 表l大鼠肝脏移植两阶段手术成功笨和长期,I存率比较(%) 2.2肝移植术后移植物的病理变化术后第3天. W0组:区域性肝细胞水肿,W15组及W30组均出 现弥漫性肝细胞水肿,3组均现胞浆疏松化和气 球样变,细胞核肿胀,肝细胞索结构不清.均见核分 裂及较多双核细胞,上述改变,均随热缺血时间的延 长而加重. 2-3大鼠肝移植术后肝功能的变化大鼠肝移植 术后第3天血清ALT,AST结果显示:热缺血各组和 对照组相比.ALT和AST差异均无统计学意义(见 表2) 表2肝移植术后ALT,ASrr(U,I.)水平变化(?) 3讨论 动物模型为肝脏移植的基础与临床研究提供了 有利的T具大鼠原位肝移植模型分为非动脉化和 动脉化两种,但由于胆总管主要依靠肝动脉供血,不 吻合肝动脉会导致供肝的胆总管黏膜缺血,胆管上 皮增生,胆管炎,胆管阻塞等胆道并发症,所以吻合 肝动脉是更符合生理的原位肝移植模型,更有利于 进行肝脏移植的研究 3.1大鼠原位肝移植供肝热缺血模型的制作体会 移植肝热缺血模型分为手术开始造成心脏停搏的热 缺血模型和供肝分离完毕后阻断肝门部的热缺血模 型两种,并各有良莠.阻断肝门部的热缺血模型供肝 热缺m不彻底,手术开始造成心脏停搏的热缺血模 型与临床上来自于无心跳供体的肝脏相似,更有利 于供肝热缺血损伤研究. 供体心脏停搏前一定要给予肝素.否则易导致 移植术后发生原发性移植肝无能.供肝冷灌注开始 后,不断用4qC乳酸钠林格氏液浇灌供肝表面.有利 于保证供肝质量.灌注速度要均匀缓慢,以防止血管 内皮的物理性损伤.修肝时应保证供肝浸没在0, 4c【=乳酸钠林格氏液中.去除门静脉及肝下下腔静脉 周同多余的脂肪结缔组织,并选择与门静脉,肝下下 腔静脉口径相似的导管.受体自身肝脏切除时,阻断 门静脉后及时从门静脉补充5%葡萄糖盐水能起到 自体输血的作用.肝上下腔静脉吻合时反转手术台. 有利于肝上下腔静脉后壁的暴露,并采用连续缝合 的方法缩短手术时间【4_.门静脉及肝下下腔静脉吻合 前需排各自下方的一段积血,套管套入前必须冲 尽相互吻合的血管内气泡.受体腹主动脉前壁切口 应略小于供体腹主动脉袖口,缝合时采用连续缝合 的方法,避免动脉外膜内翻血栓形成.胆管吻合完毕 后大网膜包裹.术后温盐水冲洗腹腔,有利于受体术 后复苏,. 一 178— 第21卷张宝良,等:大鼠心脏停搏供体动脉化原位肝移植模型制作体 会第3期 3I2心脏停搏供体大鼠肝移植的研究现状本实 验研究显示大鼠可以耐受30min心脏停搏所致的 热缺血损伤,利用此供肝行肝移植术,术后长期存活 率66.7%(4/6),与来自于无心脏停搏的供肝肝移植 差异无统计学意义.但由于本实验观察的动物数量 不够多,有待进一步研究证实,,大鼠供肝热缺mL时限 各家报道不一,多数报道为30min【.而Xu等【5J的 研究结果认为大鼠供肝在经历lO0min的心脏停搏 后,受体大鼠仍有50%(3/6)的l周存活率.此外,有 人在猪心脏停搏的研究中表明,猪肝获取前可耐受 60min的心脏停搏打击,其术后1周的生存率为 80.0%(4/5).肝移植中热缺血主要造成肝实质细胞 损伤,而冷缺血主要损伤肝窦内皮细胞.在热缺血 30min以内.肝组织损伤仍处于可恢复阶段.复流 后逐渐恢复正常的形态和功能.供肝热缺血损伤的 时间与肝组织能量代谢功能的恢复及术后动物生存 密切相关l71.分析受体死亡原阂,3例发生肝脓肿致 受体死亡,因此对于来自无心跳供体的肝脏移植术 后应加强感染的防治本实验的结果提示,存热缺血 30min内来自于心脏停搏的供肝肝移植术后是安 全的,是适于进行供肝热缺血损伤术后的长期研究. 同时也提示长时间热缺血的边缘供肝在临床上具有 一 定的可,}}j性, 参考文献: AbtPL,DesaiNM,Crawf(1rdMD,eta1.Survivalf0ll0wing 1ivertransp1antati0nfr()mn0n—heart—beatj”gd0n0rs【J1.Ann Surg,20(】4,239(1):87—92. 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