正常体温范围的家兔热原试验结果

正常体温范围的家兔热原试验结果 张梅，曾艳，周丽，黄文 宇 长春生物制品研究所有限责任公司分包装室,吉林 长春 130062 摘要: 目的 观察符合热原试验要求的不同体温的家兔,在注射人血白蛋白后的升温情况 按照《。中国药典 》 三部:2005 版:中的“热原检查法”进行测定。试验分为 2 组:A 组家兔体温在 38. 0 , 39. 6 ?之间; B组家兔体温在 38. 5 , 39. 6 ?之间。每批供试品:人血白蛋白:初试时使用 3 只家兔,复试时使用 5 只家兔。均经家兔耳缘静脉缓 慢注入预热的供试品,0. 6 g , kg,每隔 30 min 测量 1 次体温,连续 6 次。结果 A 组供试品初试时的合格率:80. 77%: 53. 84%:差异有统计学意义:P ， 0. 05:;B 组供试品初试时的合格率:96. 15%:与复试时的合格 与复试时的合格率: 率:92. 31%:差异无统计学意义:P ， 0. 05:。A 组供试品有 15 批结果相同,重复率为 57. 69%,B 组供试品有 25 批结 果相同,重复率为 96. 15%,两组检测结果的重复性差异有统计学意义:P ， 0. 005:。A 组升温 ? 0. 6 ?家兔所占比 例明显高于 B 组,差异有统计学意义:P ， 0. 005:。结论 家兔对热原的敏感性随体温的高低有明显的差异,体温偏 低的家兔对热原更敏感,其升温幅度大于体温偏高的家兔。 关键词: 体温;家兔;热原;白蛋白 中图分类号: Q95-3 R392-33 文献标识码: A 文章编号:1004-5503:2014:02-0194-03 Pyrogen test results in rabbits with normal body temperatures ZHANG Mei, ZENG Yan, ZHOU Li, HUANG Wen-yu Changchun Institute of Biological Products Co. , Ltd. , Changchun 130062, Jilin Province, China author: ZHANG Mei, E-mail:zhangmei154@yahoo.cn Corresponding Abstract: Objective To observe the elevation of body temperatures of rabbits used for pyrogen test, at various ranges of normal body temperatures, after injection with human serum albumin :HSA:. Methods Pyrogen test was performed ac, cording to the requirements in Chinese Pharmacopoeia :Volume ?, 2005 edition:. The rabbits with body temperatures of 38. 0 ~ 39. 6 ? were served as group A, while those with body temperatures of 38. 5 ~ 39. 6 ? as group B. Each batch of test samples:HSA:was injected to three rabbits in primary test and five rabbits in retest. The pre-heated samples were injected slowly into the ear vein of rabbits at a dosage of 0. 6 g , kg. Body temperatures were measured every 30 min for 6 times. Results The qualification rates of samples in group A were 80. 77% and 53. 84% in primary test and retest re, spectively, which showed significant difference:P < 0. 05:. However, the qualification rates in group B were 96. 15% and 92. 31% in primary test and retest respectively, which showed no significant difference:P > 0. 05:. The test results of 15 batches of samples in group A were identical, with a reproducibility of 57. 69% . However, the results of 25 batches in group B were identical, with a reproducibility of 96. 15% which showed significant difference with that in group A :P < 0. 005:. The percentage of rabbits with elevation of body temperature of not less than 0. 6 ? was significantly higher in group A than in group B :P < 0. 005:. Conclusion The sensitivity of rabbits with various body temperatures to pyrogen were significantly different. The rabbits with low body temperatures were more sensitive to pyrogen. Key words: Body temperature; Rabbits; Pyrogen; Albumin 热原检查是评价人血白蛋白安全性和有效性的 通讯作者:张梅,E-mail:zhangmei154@yahoo.cn 重要内容之一。家兔法检查热原是经典的实验方法, ,1,至今仍被许多国家所采用。影响家兔法检查结果准 确性的因素很多,除了饲养环境、实验环境及实验操 作等因素外,家兔自身因素也对热原检查结果产生 直接的影响。本文将不同正常体温范围的家兔经耳 缘静脉注射预热的人血白蛋白,观察不同正常体温 范围的家兔对热原检查结果的影响 。 1 材料与方法 ,2,1. 1 实验动物 普通级青紫兰家兔,442 只,雌性, , 3,无孕,体重 1. 7 , 3. 0 kg,均未曾用于热原检查, 中国生物制品学杂志 2014 年 2 月第 27 卷第 2 期 Chin J Biologicals February 2014,Vol. 27 No. 2 ??195 由长春生物制品研究所实验动物室提供,生产许可试时的合格率: 96. 15%:与重试时的合格率:92. 31%: 2 证= 0. 35 编 号 :SCXK:吉:2008-0003,使 用 许 可 证 编 号 : 差异无统计学意义:χ,P ， 0. 05:。 SYXK:吉:2008-0009。 2. 2 两组家兔热原检测结果的重复性 A 组供试品 有 15 批结果相同,11 批结果不同,重复率为 57. 69%, 1. 2 检测仪器 热原检测仪采用计算机控制,按照 B 组供试品有 25 批结果相同,1 批结果不同,重复率 《中国药典》系统软件设计,经国家机构校验,测温探 为 96. 15%。A 组结果不稳定,重复性不好,两组检 头精密度为 ? 0. 1 ?。 2 测结果的重复性差异有统计学意义:χ= 10. 83,P ，0. 1. 3 供试品 人血白蛋白由长春生物制品研究所 生产,在有效期内使用,共计 26 批。 005:。 1. 4 实验动物选择 取供试家兔,每隔 30 min 测 2. 3 两组家兔升温分布情况 将两组家兔升温情况 量体温 1 次,共测量 8 次,每次体温均在 38. 0 , 以折线形式绘图,显示, 组家兔升温A ? 0. 6 ? 39. 6 ?之间,且同一只家兔最高与最低体温之差不的点的分布明显多于 B 组,见图 1。根据家兔体温的 超过 0. 4 ?。注射供试品前 2 h,家兔禁食,称量体变化情况,分为 7 个区间:1 区间:家兔升温 ? 0. 6 ?; 重,各家兔测温探头插入肛门的深度和时间相同,深 2 区间:0. 5 ? ? 家兔升温 ， 0. 6 ?;3 区间:0. 4 ? ? 家兔升温 ， 0. 5 ? 的 ;4 区 间 :0. 3 ? ? 家 兔 升 度一般为 6 cm,时间不少于 90 s,每隔 30 min 测量 温， 0. 4 ?;5 区间:0. 2 ? ? 家兔升温 ， 0. 3 ?; 体温 1 次,共测量 2 次,2 次体温之差不超过 0. 2 ?, 6 区间:0. 1 ? ? 家兔升温 ， 0. 2 ?;7 区间:0. 0 ? ? 以 2 次测温的平均值作为该家兔的正常体温,范围 家兔升温 ， 0. 1 ?。两组家兔升温分布情况差异有 在 38. 0 , 39. 6 ?之间,同组家兔间的正常体温之 2 , 4-6,统计学意义:χ= 29. 54,P ， 0. 005:,见 1。将两 差不得超过 1 ?。 组家兔在不同的温度区间的体温变化情况以折线方 1. 5 家兔的热原检查 将家兔按体温分为 2 组:A 式绘图,分析显示,A 组家兔在第 1 和第 2 区间升温 组家兔体温在 38. 0 , 39. 6 ?之间;B 组家兔体温在 B 组,表明 A 组家兔敏感易升温, 所占比例明显高于38. 5 , 39. 6 ?之间。每批供试品初试使用 3 只家 见图 2。 兔,复试使用 5 只家兔。将供试品预热至 38 ?,均 经家兔耳缘静脉缓慢注入,0. 6 g , kg,每隔 30 minA 组 测 0. 6 ? 量体温 1 次,连续 6 次,以 6 次体温中最高值减去正 3. 0 A 2. 5 常体温值,即为该家兔体温升高的温度。两组试验所 2. 0 1. 5 用供试品相同,试验方法及试验条件完全一致。热原 1. 0 , 6,检查结果按《中国药典》三部:2005 版:进行判定。 0. 5 家兔升温值0. 0 1 25 49 73 97 121 145 169 193 217 1. 6 统计学分析 应用 SPSS19. 0 软件进行统计学 2 家兔序号 分析,试验中家兔体温升高的数值采用 χ检验,以 0. B 组 P ， 0. 05 为差异有统计学意义 。 6 ? 1. 0 B 0. 8 0. 6 2 结 果 0. 4 0. 2 家兔升温值0. 0 2. 1 两组家兔热原检测结果的合格率 A 组供试品 1 21 41 61 81 101 121 141 161 181 家兔序号 在初试时有 5 批不合格,复试时有 12 批不合格,初试 图 1 A 组:A:和 B 组:B:家兔升温分布情况 时的合格率:80. 77%:与复试时的合格率:53. 84%: 2 Fig 1. Distribution of temperature elevation of rabbits in 差异有统计学意义:χ= 4. 28,P ， 0. 05:;B 组供试 groups A and B 品在初试时有 1 批不合格,复试时有 2 批不合格,初 表 1 两组家兔升温在不同区间分布情况 Tab 1. Distributions of elevations of body temperatures of rabbits in two groups 家兔体温变化区间:?: 合计 组别 1 2 3 4 5 6 7 数量:只: 数量:只:比例:%:数量:只:比例:%:数量:只:比例:%:数量:只:比例:%:数量:只:比例:%:数量:只:比例:%:数量:只:比例:%: A 组 43 19. 03 41 18. 14 43 19. 03 36 15. 93 32 14. 16 13 5. 75 18 7. 96 226 B 组 15 7. 65 12 6. 12 39 19. 90 43 21. 94 40 20. 41 22 11. 22 25 12. 76 196 中国生物制品学杂志 2014 年 2 月第 27 卷第 2 期 Chin J Biologicals February 2014,Vol. 27 No. 2 ??196 现体温升高 0. 6 ?的概率也高。 ?A 组 B 组 本实验认为,对热原要求严格且注射剂量大的 25 :%20 供试品,如果使用正常体温低、筛选范围大的家兔, 15 10 易造成试验结果复试率升高或不合格数量增加,为 5 使试验结果准确、可信,建议不使用体温低、筛选范 各区间比例:0 1 2 3 4 5 6 7 围大的家兔进行试验 。区间 图 2 两组家兔在不同温度区间的温度分布情况 参考文献 Fig 2. Distributions of rabbits with various elevations of body temperatures in two groups ,1, Dong PZ,Piao JH,Li B. Comparison of test for pyrogens in current Chinese,United States,British,European and Japanese Pharmacopoeia,J,. Drug Stand China,2010,11:2::135-138. 2. 4 两组家兔升温? 0. 6 ?的百分率 A 组家兔升 :in Chinese: 董培智,朴晋华,李波. 现行版中、美、英、欧、日五部药典中 温 ? 0. 6 ?所占比例大于 B 组,两组升温 ? 0. 6 ?家 热原检查法比较,J,. 中国药品,2010,11:2::135-138. 2 兔比例差异有统计学意义:χ= 11. 45,P , 0. 005:,表 ,2, Fan WP,He ZM. Quality status of conventional rabbit and the corresponding managerial measure of animal experiment depart- 明家兔对热原的敏感性随体温的高低有明显差异。 ment in present,J,. Lab Anim Sci,2011,28:5::29-34.:in Chinese: 范文平,贺争鸣. 普通级实验家兔的质量现状和动物实验机 3 讨 论 构相应的管理方式探讨 ,J,. 实验动物科学,2011,28:5:: 29-34. ,3, Zhu SM,Wang D,Yang M,et al .Investigation of the sensi- 本实验结果可见,体温在 38. 0 , 39. 6 ?之间 tivity of the rabbits for testing pyrogen in Zhejiang province ,J,. Chin J Comp Med,2010,20:7::86-90.:in Chinese: A 组家兔与体温在 38. 5 , 39. 6 ?之间的 B 组家兔 朱社敏,王丹,杨珉,等. 浙江省热原检查用兔敏感性状况 的试验结果比较,有明显差异,A 组家兔试验结果不 调查,J,. 中国比较医学杂志,2010,20:7::86-90. 4, 秦雅英,张莹,万峰. 家兔热原实验中预检对实验结果的影 ,稳定,重复性不好,较 B 组家兔敏感易升温,升温 ? 响,J,. 畜牧兽医科技信息,2005,21:9::65-66. 0. 6 ?家兔所占比例明显增多,正常体温偏低的家 ,5, 岳敏,范沛,巫玮,等. 室温对热原实验中兔筛选的影响 ,J,. 科技信息,2010,27:24::25-25,27. 兔对热原更敏感,升温幅度更大,表明家兔对热原 ,6, Chinese Pharmacopoeia Commission :ChPC:. Chinese Pharma- ,7, 的敏感性随体温的高低有明显的差异,与项庆军等copoeia:Volume ?:,S,. Beijing: Chinese Medical Science and Technology Press,2005:Appendix 77-78. 的研究结果一致 。国家药典委员会. 中华人民共和国药典 :三部:,S,. 北京:中 国医药科技出版社,2005:附录 77-78. 在家兔的筛选方面,《中国生物制品1979 》,7, Xiang QJ,Li CS,Hu Y,et al .Effect of the different basal 版规定,家兔使用筛选范围为 38.3 , 39.6 ?,1990、 body temperature of rabbits on pyrogen test results ,J,. Prog Microbiol Immunol,2009,37:4::28-31.:in Chinese: 项庆军,1995、2000 版规定为 38.0 , 39.8 ?,《中国药典》:三 李策生,胡勇,等. 不同基础体温的家兔对热原检查 结果的影响,1,,J,. 微生物学免疫学进展,2009,37:4::28-31. 部:2005 及 2010 版又修订为 38. 0 , 39. 6 ?。试 ,8, Qian QJ,Xi L,Zhao XJ,et al .Analysis of the influences on 验家兔使用范围扩大,试验本身不可控因素也随之 rabbits pyrogen test ,J,. Prog in Microbiol Immunol,2012,40 增加,扩大的试验结果的不可控性,意味着对供试品 :2::23-25.:in Chinese: 钱秋娟,席亮,赵小洁,等. 影响家兔热原检查结果的因素 的要求更加严格,尤其在北方气候较寒冷时,对家兔 分析,J,. 微生物学免疫学进展,2012,40:2::23-25. , 8,的正常体温也有影响。体温筛选范围大,正常体 温偏低,无筛选范围小稳定,升温也幅度也较大,出 收稿日期:2013-02- 23编辑:王佳凤 synergism with the PKA pathway in BMP2-induced osteochondro- :上接第 193 页: genic differentiation ,J,. J Bone Miner Res,2009,24:5:: ,9, Zhao YZ,Song T,Wang WJ,et al .P38 and ERK1 , 2 826-836. MAPKs act in opposition to regulate BMP9 -induced osteogenic differenti- ation of mesenchymal progenitor cells,J,. PLoS ,13, Ohta Y,Nakagawa K,Imai Y,et al .Cyclic AMP enhances Smad-mediated BMP signaling through PKA-CREB pathway,J,. 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