核酸检测中两种核酸提取方法的比较

核酸中两种核酸提取的比较 ? , , ,? , ,年 , 中国 自然 医学杂志 , , ,卷第 ,期 ,月第 , , , ,, , , ; , , , , ,, , ,, ，, , , , , , ， , , , , ,,(, 【 方法 学研究 】 核酸检 测 中两 种核 酸提 取方法 的 比较 李活，曾劲峰 ，尚桂芳 ，叶贤林，庄乃保 ，许晓绚 ，马兰，古醒辉 【 关键词】 核酸检测 ;核酸半 自动提取 :核酸 自动化提取 为了提高输血安 全，有效缩短 ,,的 “ 口期 ” ， 窗 ，检出病 , , , ,用,,, 带 滤芯一次性加样针直接把标本混合好 ， , , , , 蠢变异侏 ，降低 血源性病 毒 的传播 ，深 圳市血 液 中 心除 , ,昆 , ,,上的 ,孔塑料管 ，仪器 自动加 取, , ,合标本加到 , ,按献 血法要求对 血液进行 常规检测外 ，还对 常规检 测结 果合 入裂解液，裂解后加入 磁珠与 去抑 制剂 的混 合液 ，然后 分别 格的血液标本进 行核酸检 测。目前在 国内标 本汇集 与产 物扩 用洗液 ,，洗液 ,，洗液 ,进行洗 涤 ，最后加入洗脱 液进行洗 四鄙 已经实现 自动化 操作 ，在提取 病毒 核酸 时 ，有手 工 、半 , ,,上的 , 脱 ，再从 , , , 孔塑料管取, 洗脱 液到 ,,孔反应 ,劝和 全 自动提取 。半 自动提取是对常 规检测 合格 的血 液采 板 ，总核酸提取 完成 。整个 操 作过 程 由电脑控 制 自动完成 。 , ,,进 行半 自动 提取 。 ,人份汇集 ，用核 酸提取 仪 , ,一,, , , , 如有 阳性标本需要拆分 ，直接把需要拆分 的单 份标 本取, ,, 自动提取操作 繁琐 ，对 操作人员 的技术 要求高 ，很 难 保证 , ,,上 做 提 取 。 加入 , , 高的精确度 ，同时 由于操作人员 长时 间逗 留在 实验 室 ，也 , (( ,, ,,, 手工半 自动提取 :血 液标 本放 在全 自动汇集 仪 , , ,, , , ， 易 造 成 , ,酶 的 污染 ，影 响核 酸 提 取 效率 ，造 成 , , , , 一 , , ，将 ,人 份 的 血 清 加 入 一 个 ,,, ,,上 ，每 人 份 取 ,, , ( , 阴性的 发生 ，不适合大 批量血液 核酸筛查 ，只有 提高核 酸 ,, ,, , , ,, , 汇集管上 ，手工给每 个汇集管 分别编号后 ，再转 移 ,,, 取的 自动化程 度，才 能有效解决 以上问题 。由上海 科 华实 , 到生物安全柜 内进行操 作 ，在汇集管 中加入 浓缩液, 和促 , ,, , , , ,全 自动 汇 集 提 取 盈 系统 有 限 公 司 研 发 的 , ,, ,, , , , , 沉剂, ，用漩涡震荡仪 进行充 分震荡 混匀后 ，把汇集管放 仪 ，把 样 本 汇 集 与 核 酸 提 取 合 并 在 一 起 。 在 保 证 核 酸 提 取 效 入, , , , ,× ,,, 。拿出离心 ?高速离 心机 再离 心 (,, ,,,, , ,)率 的同时 ，有效地节省 了实验室 的空间 ，减少 了人工 操作 可 , 好的汇集管 ，用移液器吸去上清液 ，留,, 底部 液体在漩 涡 能带来的污染和失误 ，特 别适用于集 中化检 测 ，尤 其 是大 批 , 震 荡 仪震 匀 ，轻 离 心 ，吸 ,, 血 清 加 入 已 经加 好 磁 珠 与 去抑 量的,液标本的核酸检测 ，提高 自动化程度是必然之选。 制剂 混 合 液 的塑 料 板 , 上 ，然 后 加 入 裂 解 液 ，在 塑 料 板 , 放上 , 材 料 和 方 法 , , ,开 始提取 ，按 步骤更换 预 梳子 ，放进核酸提取仪 , ,一,, ( 】 , 仪 器 与试 剂 ，, ,和预加, 洗脱 加洗 液 ,，洗液 ,，洗液 ,的塑料板 , ， , , , , ,( ,,, ,, , 全 自动汇集 提取仪 , , , 上海 科华 在 ,, , ,,, 液的塑料板 , ，总核 酸至提 取完成 。如有 阳性标本 需要拆分 ， ，, , ,, ,,，全 自动汇集 仪 , , ,基础上 开发 ) , ,, , ,,,,, , ,一 , 直接把需要拆分的单份标本取,, 加入塑料板 , 上做提取 。 , ,,, , ),, ( ,, , ，漩 涡 震 荡 仪 ,, (, , , , , , , , , , ,, , , , — , 结 果 ?), ，生物安 全 柜 , ,一,, , ( 净集 团 安 泰 公 , ，) , ,,，, , 苏 ， ( , , 全 自动提取 与半 自动提取 的提取效率比较 州) , , ,; ) ，低 温高 速 离 心 机 , , ( ,,, ，核 酸 提取 仪 , ,一 , , ,,年 ,,, 统计 , , ,月采用科华半 自动提取 仪检测常规标 ,, 上海科华 实验系统有 限公 司) , ,,扩增 检测仪 ，,, ( , ，, , , , ,年 ,, 本的内对照失败率 ，, , ,月采用全 自动核 酸提取仪检 , ,, , ， ,, , , , , ,核酸检 测试 剂盒 ( , 荧光 , ,) 一核 酸 提取 试 测常规标本的内对照失 败率 ，并进 行统 计学 分析 ，二者差异 制 ( 海 科 华 生 物 工 程 股 份 有 限 公 司 ，试 剂 批 号 : 上 ,,年 , 月参加 无统计学意义。同时 ，使用半 自动提取仪于 , , , ,, , , ，,孔 塑 料 管 ,,, , , ,, ) ( ,,一, , , ，, , , ,) , , ,,, ( , , ， , , ,年 ,月 次卫生部室 问质 量评价 ，使用全 自动提取仪 于 ,,( ), ,, , , , ,, ) ,,, , 半,,, ,,, ,管 ( ,,, ，, ,, 塑料板 ( 自动提 参加 , , ,，见 次卫生 部室 阃质 量评 价 ，二者 符 合率 均为 ,, ,孑 梳 上 ，取时使 用 ) 和 , , 子 ( 海 科华 实 验 系统 有 限公 司 ) 。 , ,, , , , ,; , ) , , ,,, , ,,单通道加样枪 ( , , , ，,,—,,, 单通 道加 抢 ( , , , ，, ,; , ) ,孔 反 应 板 , , 一, ,,一, ,, , , ,—, ( , , ,— 表 , 全 自动提取与半 自动提取效率 比较 ,),, ，加洋枪均经过 国家质量监督 检验 检疫总 局深圳 计 量鉴 , , ,公 定站校准 ，在有 效期 内使用 ，所 有耗 材均为 美国 , , , , , 司的无 , ,酶无 , ,酶的分子生物学实验用 的耗材。 (,, 方 未 (( ,,,, , 全 自动提取 :血 液标本放在 全 自动 汇集提 取仪 , , ， ,，每人份取, ，将 ,人份 的血清 汇集到一个玻 璃管 后 ， , , ( , , 使用试剂情况 比较 除了省 去浓 缩液 和促沉剂 ， 使用全 自动提 取时 ， 其他 的试 佑 有 :深 圳 市 血 液 中心 ，广东 , ,, ,, , 剂使用量都加大到 ,到 , 试剂使用量较大 ， 倍左右 ， 见表 , 。 , ,年 , 中国自然医学杂志 ,, ,卷第 ,期 ,月第 , , , ,, ,, , ; ,, , , ,(,, ( ,, , , ，, , , , ，, ,, ,, , , , „, ,?, 讨 论 , , , ,,— 全 自动 汇集 提取仪 ，是 在全 自动加 样汇集 器 , , ( , , , , ,检测能缩短窗 口期及 检 出病毒 变异 株 ，很多 国家 已 , ) , ,, ,,, , ,研发 出来 的 , , , 系统 的支持下 ，加入 , , ,,,, , 。上海科华 , , , , , ,一,核酸 经常规用于血液筛 选, , ,,,,， , , , ,，一次可 以同时汇集提取 ,,人 全 自动 汇集提取仪 , , , , 检测试剂盒是使用磁 珠提取病 毒核酸 ，不 管是半 自动提 取还 份血清 ，而且操作 简单 ，容 易掌握 ， 使 核酸检 测从 汇集到 提 是全 自动提取时 ，试剂使用量 的投入 ，是 根据 提取用 的血 清 取一步完成 ，虽然各种试 剂使用 量有所 增加 ，相应增 加提取 手工提 取和全 自动提取 的各 步骤 量决定各步的试剂投放量 ( 试剂使用成本 ，但 在汇集 与提取过 程 中减少 了人 工操作 ，能 最佳浓度相同) 。半 自动 提取时 ，对 ,人 份 的血清进行 汇集 ， 相应减少人为操 作可 能带来 的错误 和污染 ，能较好地 适应大 , ? , , , , 每人份取 ,, 的血 清，经过 , 高速 离 心 (,, ,,, ,× 规模集 中化检测 。 ,,, 来浓缩病毒 ，再 取,, 浓缩 后血 清做手工 提取 。全 , ,) , , 参 考 文 献 , 自动提取过程 ，同样 取 ,人份 的血清 汇集 ，每人份 取, 血 , 〔 〕 叶萍 (核酸扩增检测技术预防输血传染病的应用现状及研究进 , ，因为省略 了低温 高 清原液 ，提取 的血 清使用量增加到,, , , ,，, :,,— , ( 展 (国外医学输血及血液学分册 ，, , , , ,, 速离心浓缩病 毒这一 步，为了确保 提取 效率 ，提 高 了血 清提 , ,, ， 〔 〕 白坚石 (原料血浆混样 , , ?,一,核酸检测方法学研究 (中 ,, , , ,( 国输血杂志 ，, , ，, :, ,—, , ( ( 取用量 ，增 加 了 , ,倍 的 血清 ，相应 就 增 加裂 解 液 , ,倍 ， , ,, 〔 〕 王迅 (核酸检测 技术 ( , )及其在血液筛查 中的应用 (中国 ( ( 、,增加去抑 制剂 ,,倍 ，增加磁 珠 , ,倍 ，增 加 洗液 ,、, ,, , , ,( 输 血 杂 志 ，, , ， , :, ,—,, ( (, ,倍 ，洗 脱 液 , ,倍 ，上述 的几 种 试 剂 比 去 抑 制剂 和磁 珠 的 , , ,, , , , , ,, ,,;, , ,, , , , , , , , , , , .