细脚拟青霉对大鼠肺泡巨噬细胞的激活作用

细脚拟青霉对大鼠肺泡巨噬细胞的激活作用 3 细脚拟青霉对大鼠肺泡巨噬细胞的激活作用 1 2 3 113 1 1 袁吕建新金丽琴陈国荣方芳谦邵黎明陈希贤陆永绥 摘 要 用细脚拟青霉水提取物给正常及环磷酰胺所致免疫抑制大鼠灌胃21, 灌洗并培养肺泡巨噬细胞, 用 d 生化方法测定巨噬细胞内乳酸脱氢酶和精氨酸酶的活性, 并进一步观察巨噬细胞摄取中性红的能力。结果明: 细 脚拟青霉水提取物可显著提高正常及环磷酰胺所致免疫抑制大鼠肺泡巨噬细胞内乳酸脱氢酶和精氨酸酶的活性, 并增强肺泡巨噬细胞摄取中性红的能力。提示: 细脚拟青霉对肺泡巨噬细胞具有激活作用。 关键词 细脚拟青霉 肺泡巨噬细胞 酶活性 激活作用 R 392. 12 中图号 T H E A C T IV A T ED E F F EC T O F PA EC IL OM YC E S T EN U IP E S ON A L V EOL A R M A CRO PHA GE O F RA T S , , , , , , , L u J ia n x in J in L iq in C h en G u oron g F a n g F a n g Y u n Q ia n S h a o L im in g C h en X ix ia n L u Y on g su i (), , 3250027D ep a r tm en t of C l in ica l L a bora tory M ed ic in eW en z h ou M ed ica l C ol leg eW en z h ou A bstrac t A f te r th e P aec ilom yce s tenu ip e s w a te r ex t rac t w a s p e rfu sed in to th e stom ach fo r 21 day s, a lveo la r () . m ac rop h age AM Υo f no rm a l and imm uno supp re ssed ra t s induced by cyc lop ho sp h am ide w e re cu ltu redT h e ac t iv i2 () () , , t ie s o f lac ta te deh yd ro gena se L D H and a rg ina se A R Gin th e AM Υw e re de tec ted by b io ch em ica l m e tho d sand . th e neu t ra l red ab so rp t io n o f AM Υw e re o b se rved tooT h e re su lt s show ed th a t th e ac t iv it ie s o f L D H and A R G in , th e AM Υ o f no rm a l and imm uno supp re ssed ra t s inc rea sed m a rk ed lyand th e neu t ra l red ab so rp t io n o f AM Υ o f im 2 ., . m uno supp re ssed ra t s inc rea sed sign if ican t lytooIt is sugge sted th a t P aec ilom yce s tenu ip e s can ac t iva te th e AM Υ , , , Key words P aec ilom yce s tenu ip e sA lveo la r m ac rop h ageE nzym e ac t iv ityA c t iva t io n ( )细 脚 拟 青 霉〔 P aec ilom yce s ten u ip e s p eck 1 材料与方法〕为拟青霉属真菌, 从甘兰粉蝶的蛹体上分 Sam so n 1. 1 材料离获得。有研究表明: 其在自然基物上发酵甚佳, 容 易培养, 而且其主要的化学成份与天然冬虫夏草基 1. 1. 1 细脚拟青霉: 由浙江省科学院亚热带作物研 本相似; 其急性毒性低, 且具有耐缺氧、镇痛、镇静等 究所陈祝安研究员惠赠。 〔1, 2〕 药理作用。近来的研究又初步揭示其对正常及环1. 1. 2 环磷酰胺: 上海第十二制药厂生产, 批号为磷酰胺所致的免疫抑制小鼠的免疫功能具有调节作 940508。〔3, 4〕用。为进一步研究其免疫调节机理, 本文用 环 ip 1. 1. 3 实验动物: 大鼠由本院实验 Sp ragu e D au ley ( 磷酰胺复制免疫抑制大鼠模型, 以乳酸脱氢酶 lac2 动物室提供, 体重207. 8?19. 1。 g) 和精氨酸 , , 1, 1, 1, 27ta te deh yd ro gen a seL D H EC () 酶 , , 3, 5, 3, 1为指标研究了细脚 a rg in a seA R G EC 1. 2 方法 ( 拟 青 霉 对 肺 泡 巨 噬 细 胞 , a lveo la r m ac rop h age1. 2. 1 细脚拟青霉水提取物制备: 准确称取细脚拟 ) 酶活性的影响作用, 并通过中性红试验研究 AM Υ青霉菌丝体干粉, 加适量双蒸馏水于电热套上回流 了细脚拟青霉对 的激活作用。AM Υ 20, 冷却后过滤, 滤渣重复回流提取两次, 合并 m in () 三 次滤液并稀释成20% 浓度 的菌丝体水提ƒW V ( ) 取物, 经 微孔滤膜 无菌过滤 反复冲洗 , 2 000离心10, 除 去 0. 45ƒSe itz f ilte r Λm PB S AM Υrm in m in 后, 以每支10分装备用。, 收集沉淀的 , 再加50%外游离的中性红m l AM Υ AM Υ1. 2. 2 动物分组及处理: 大鼠40只, 随机均分为 乙醇1, 50% 乙酸1, 室温放置24, 使 彻底 SD m lm lh AM Υ ( ) 溶解、破碎, 再用50% 乙醇—50% 乙酸 1? 1混合液 四组, 每组雌、雄各半, 分笼饲养。第一组为正常对照 () 组 I , 每只每天用1生理盐水灌胃; 第二组为细 作适当稀释后置722型分光光度计于540波长下 m l nm () ( ) 比色, 测得吸光值 值, 以 值表示 摄取中脚拟青霉组 ? , 每只每天用1细脚拟青霉水提A A AM Υ m l ( ) 取 物灌胃; 第三组为环磷酰胺组 , , 每只每天用性红的能力。 1生理盐水灌胃, 15起每天 环磷酰胺一次, 剂 m l dip 1. 2. 8 统计: 采用 检验分析组间差异的显著 t 量为20体重, 连续7; 第四组为细脚拟青霉 ƒm gk g d 性。( ) 加环磷酰胺组 K , 每只每天用1细脚拟青霉水 m l 提取物灌胃, 15 起 环磷酰胺, 剂量与时间 同 , d ip 2 结果 组。各组大鼠在同等条件下饲养21。d 2. 1 细脚拟青霉对 酶活性的影响 各组大 AM Υ 鼠 和 的活力单位见表1。结果显 内 1. 2. 3 AM Υ L D H A R G : 股动脉放血处死大鼠, 的灌洗与培养AM Υ 示: ? 组大鼠 内 和 活性均显著高 AM Υ L D H A R G 无菌室内常规消毒后, 每只大鼠经气管内注入灭菌 () 于 组 < 0. 001; , 组大鼠 内上述两酶的 I P AM Υ 的 生 理 盐 水 5, 抽 回 约 4, 重 复 5 次, 合 并 后 于m lm l () 活性却非常显著地低于 组 < 0. 001; K 组大鼠 IP 2 000 ƒ离心15, 收集沉淀的 , 用 rm in m in AM ΥH an k s (I 组相比差异不显著 内上述两酶的活性与液洗涤一次, 再用含10% 小牛血清的 细 AM Υ P 1640R PM I 6 ( ) > 0. 05, 但与, 组相比差异非常显著 分别为

0. 05; , 组大鼠 内中 剂, 用722型分光光度计于515 P AM Υ nm9( () 酶活力单位定义为: 每升破碎的 悬液 2×10 性红的量显著低于I 组 < 0. 05, K 组大鼠 AM Υ P AM Υ ) ( 个 37?、条件下与 作用30产 摄取 的 中 性 红 量 与 组 相 比 差 异 不 显 著 >9. 5 I AM ΥCpH A rg m in P ())( ) 生1鸟氨酸为一个活力单位 。 0. 05, 但与, 组相比则有显著性差异 < m g u 0. 05。P 1. 2. 7 这表明环磷酰胺可显著降低 对中性红的摄取 : 取 上 述 贴 壁 的 摄 取 中 性 红 试 验AM Υ AM Υ ( )能力, 而细脚拟青霉对环磷酰胺所致的 摄取 , 每瓶加入0. 1% 中性红生理盐水溶液 无菌 AM Υ ΥAM 中性红能力下降具有明显的抑制作用。 2, 37?继 续 培 养 30, 倾 去 中 性 红, 并 用 37?m lC m in C 83 鉴于激活的 才有免疫应答和免疫监视作 M Υ 细脚拟青霉对大鼠 摄取中性红的影响 AM Υ 表2用, 因此, 可以认为细脚拟青霉对机体免疫功能的调 22 T ab T h e effec t o f p aec ilom yce s tenu ip e s o n th e ab so r 节作用的机理之一可能是通过对的激活, 并由M Υ p t io n o f neu t ra l red in th e AM Υ o f ra t s 激活的, 但有待进一步深入研究。 介导而实现的M Υ G ro up s ()n 540 ? A b so rbance a t nm x s 参考文献10 I 4. 07?0. 86 ? 10 4. 74?0. 99 1 陈祝安, 徐 珊. 细脚拟青霉培养性状和药理作用的初步3 , 10 3. 22?0. 69() 研究1真菌学报, 1989; 8 3: 214 ? 10 4. 57?0. 75K 陈祝安, 陈召南. 细脚拟青霉的培养及其产物的化学成份 2 3 () 分析1真菌学报, 1990; 9 4: 304 < 0. 05, IP com p a red w ith g ro up ?P < 0. 05, com p a red w ith g ro up , 金丽琴, 吕建新, 杨加贤, 等. 细脚拟青霉对大鼠血液蛋白 3 ( ) 质水平及其生长的影响. 温州医学院学报, 1996; 26 1: 3 讨论14 吕建新, 金丽琴, 楼永良, 等. 细脚拟青霉对小鼠体液免疫 是一种具有多种功能的免疫细胞, 而且参 M Υ 4 () 功能的影响. 中国实验临床免疫学杂志, 1996; 8 6: 8 吕与了机体的抗肿瘤免疫监视作用。但有研究表明, 未 建新, 金丽琴, 李 东, 等. 蜂花粉对小鼠腹腔巨噬细胞 乳 酸脱氢酶活性及其同工酶谱的影响. 上海免疫学杂志, 激活的不但不能杀伤肿瘤细胞, 而且还会促进M Υ 5 () 1993; 13 1: 24 肿瘤细胞在体内的增殖、转移以及帮助肿瘤细胞逃吕建新, 陈国荣, 金丽琴, 等。蜂花粉对小鼠腹腔巨噬细胞 避激活的 的免疫监视作用; 只有激活的 能 M Υ M Υ () 酶活性的影响. 免疫学杂志, 1993; 9 2: 94 抑制肿瘤细胞的生长与转移, 并且具有强大的胞内 6 〔7, 8〕. F id le r IJT h e in situ induc t io n o f tum o r ic ida l ac t iva ty in 杀菌作用和胞外溶瘤作用。因此, 可以认为 M Υ 1 a lveo la r m ac rop h age s by lipo sm e s co n ta in ing m u ram y的激活是其实现多种功能的基础。 7 2. ,( ) d ip ep t ide is a th ym u sindep enden t p ro ce ssJ Imm uno l 免 疫激活剂 增强剂可激活 , 免疫抑制剂 M Υ 则可抑制 , 这已被充分证明。有研究表 的激活M Υ 1981; 127: 1719 明: , 其 胞 内 和 活 性 升 被 激 活 后M Υ L D H A R G , . F ishm an M Gun th e r GInduc t io n o f tum o r ce ll re sis2 〔9, 10〕高, 因此,和 活性的升高被认 内 M Υ L D H A R G 2tance to m ac rop h agem ed ia ted ly sis by p reexpo su re to 8 为是被激活的标志。本研究结果细脚拟青霉对 M Υ 22. , 1986; 99:no n ac t iva ted m ac rop h age sC e ll Imm uno l 正常及环磷酰胺所致的免疫抑制大鼠内AM Υ L D H 241 和 活性均具有上调作用, 可以认为细脚拟青 A GR . : Co h n ZAT h e ac t iva t io n o f m o no nuc lea r p h ago cy te s霉对大鼠 具有激活作用。AM Υ , , . . 1978; 121: 813F ac tfancyand fu tu reJ Imm uno l , 其吞噬和胞饮作用增强。本研究 被激活后9 M Υ 结果提示了细脚拟青霉对 摄取中性红的能力AM Υ 10 ,, , . J akw ay J P M o r r is H GB lum en th a l EJ e t a lSe rum fac2 具有增强作用, 这也进一步证实了细脚拟青霉对大 . to r s requ ired fo r a rg ina se induc t io n in m ac rop h age sC e ll 鼠 具有激活作用。AM Υ , 1980; 54: 253Imm uno l ()1996203204收稿; 1996212203修回