红毛丹果皮抗氧化物质的提取及其抗氧化作用

红毛丹果皮抗氧化物质的提取及其抗氧化作用 红毛丹果皮抗氧化物质的提取 及其抗氧化作用 !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! , 张会林，孙丽平，范家恒，庄永亮 ,昆明理工大学 ，化学与工程学院食品工程研究中心 ，云南昆明 ,650224摘 要,考 察 了 不 同 浓 度 的 甲 醇 溶 液 对 红 毛 丹 果 皮 中 多 酚 和 黄 酮 物 质 的 超 声 提 取 作 用 ，并 研 究 了 不 同 甲 醇 提 取 液 的 还 原 能 力 、DPPH?和 羟 自 由 基 清 除 能 力 。结 果 明 ，60%和90%的 甲 醇 溶 液 对 红 毛 丹 果 皮 多 酚 的 提 取 率 较 高 ，90%的 甲 醇 溶 液 对 黄 酮 的 提 取 率 最 高 。 30 %、60%、90%甲 醇 和 水 溶 液 对DPPH自 由 基 清 除 能 力 的 IC值 均 在 4μg/mL左 右 ,?50对 羟 自 由 基 清 除 能 力 的IC值 分 别 为46.80、34.06、36.69、80.30μg/mL。 结 果 表 明 ,不 同 甲 醇 提 取 液 均 具 有 较 强 的 还 原 50能 力 、DPP H?和 羟 自 由 基 清 除 能 力 ，其 IC值 均 为 μg/mL级 。 一 定 浓 度 范 围 内 ，提 取 液 抗 氧 化 能 力 与 其 多 酚 的 含 量 50呈 正 相 关 性 。90 %和60%的 甲 醇 提 取 液 的 抗 氧 化 能 力 明 显 高 于 30%甲 醇 和 水 提 取 液 。综 合 考 虑 对 多 酚 的 提 取 率 、抗 氧 化 能 力 以 及 提 取 成 本 等 因 素 ，可 采 用60%的 甲 醇 作 为 提 取 液 。 , ， ， ， ， 关键词红毛丹果皮超声波总酚黄酮抗氧化活 性 Study on active ingredients and antioxidant activities of extracts from rambutan rind by ultrasonic extraction *ZHANG Hui-lin, SUN Li-ping, FAN Jia-heng, ZHUANG Yong-liang (Research Center of Food Engineering, College of Chemistry and Engineering, Kunming University of Science and Technology, Kunming 650224, China) Ab stract, The rind of rambutan was extracted using ultrasound by different concentrations of methanol. Total phenolic and flavonoids contents of different extracts were determined and scavenging effects on reducing power，DPPH and hydroxyl free radical were evaluated. Results showed that the 60% and 90% methanolic ? extracts had higher total phenolic content，and the flavonoids content of 90% methanolic extract was the highest. The ICof 30%,60% and 90% methanolic and water extracts were about 4μg/mL in the DPPH? model 50 and 46.80， 34.06， 36.69， 80.30μg/mL in the hydroxyl free radical model，respectively . The methaolic extracts had high effects on reducing power，scavenging DPPH? and hydroxyl radical，and all of their values of IC 50reached the level of μg/mL. The results indicated the antioxidant activities of different extracts were positively corresponding to their total phenolic contents. Antioxidant activities of 60% and 90% methanolic extracts were higher than 30% methanolic extract and water extract obviously. Key words,rambutan rind,ultrasound,phenolic,flavonoids,antioxidant activity 中图分类号,TS255.1 文献标识码,A 文 章 编 号,1002-0306,2011,10-0129-03 明，植物多酚具有防衰老、抗肿瘤、抗突变、抗高血红毛丹(Nephelium lappaceum L.)，又称毛荔枝， 原产于马来西亚群岛，与亚热带水果荔枝和龙眼同 压、抗过敏反应、抗动脉粥样硬化、防治冠心病与中 [1][3]。红毛丹营养丰富，据文献报道，红毛丹中磷、镁、 。 科风等多种保健功能。在马来群岛，干红毛丹皮可入药 B硫和钙的含量非常丰富，锌、铁和锰的含量也很高， 红毛丹果皮提取物对人表皮癌细胞K和大肠腺癌 [4][2]Caco2-具有很好的抑制增殖能力。目前国内对 。红毛丹果皮作为 细胞而镉、砷等有害元素含量却很低 一种经济效益极低的副产品存在，多被废弃，没有得红毛丹的研究主要是引种技术等方面，对其果皮中 到充分的利用。红毛丹果皮中多酚含量很高，研究表活性成分及其抗氧化能力的研究未见报道，因此本 实验拟采用不同浓度的甲醇溶液超声提取红毛丹果 收稿日期,2010-11-22 * 通 讯 联 系 人 皮中的多酚和黄酮物质，研究提取液的抗氧化能力， 作者简介,张 会 林 ,1986-,，女 ，硕 士 研 究 生 ，研 究 方 向 ,功 能 食 品 。 为进一步开发红毛丹果皮高附加值产品，促进其综基金项目,云 南 省 自 然 科 学 基 金 ,2010ZC03,2 。 合利用提供依据。 1.2.4.3 红毛丹果皮提取液在水杨酸体系中清除羟 材料与方法1 [8] 自由基能力的测定取1mL稀释为一定浓度梯度的 1.1 材料与仪器 提取液于10mL离心管中，依次加入0.3mL 8.0mmol/L 样品 收集新鲜的红毛丹果皮，60?烘干，粉碎， 的FeS0，0.25mL 20mmol/L的HO，1mL3.0mmol/L水杨 42240目筛，备用。 过37?水浴30min，取出，冷却，加入0.45mL的 酸，混匀，TU1901型双光束紫外可见光光度计 北京普析 2000r/min离心10min，取上清液于510nm 蒸馏水，混匀，781 -型磁力搅拌器深圳市测吸光度。清除率计算公式为: 通用仪器有限责任公司; 抑制率(%)=[1(AA)/A] ×100%-- 120 上海安亭科学仪器国华仪器厂;LXJ-IIB型离心机 式中，A=未加清除剂的吸光度;A=加入清除剂 01宁波新芝生物有限 厂;SB-5200DTD超声波清洗器 的吸光度;A=试剂空白的吸光度。 2 公司。 1.2 实验方法 2 结果与讨论1.2.1 红毛丹果皮中多酚和黄酮物质的超声提取 准确称取一定量果皮粉，按1?20料液比，分别加入体2.1 不同浓度甲醇溶液对红毛丹果皮中多酚和黄 30%、60%、90%的甲醇溶液和蒸馏水，采用积 分数为 酮物质的超声提取作用SB -多酚及黄酮类物质具有活泼的多羟基结构，从 5200DTD超声波清洗器(超声功率200W)，设定温度而具有较强供电子能力，使其成为有效的抗氧化活 30?，超声提取30min后3000r/min离心10min，取上清 100mL，得到不同甲醇浓度的提取液样品。 性成分。不同极性的溶液对多酚和黄酮类物质提取 液定容至[5] 1.2.2 多酚含量的测定采用Folin-Ciocalteu法测 能力不同，本文研究了三种浓度甲醇溶液及蒸馏水 1)。 对红毛丹果皮中多酚和黄酮物质的提取作用(图定提取液中多酚含量，以没食子酸为标准品。准确吸结果表明，甲醇浓度不同，对果皮中多酚和黄酮物质 取不同浓度没食子酸标准工作液和甲醇提取液各60%和90%甲醇多酚提取率分别 的提取率明显不同;1mL于10mL试管中，然后依次加入1mL去离子水， 22.6%和23.4%，两者没有显著性差异，但是显著高 是0.5mL 福林酚试剂，1.5mL NaCO(7.5%)溶液，最后 23 30%甲醇提取率。四种不同浓度甲醇对总黄 于水和10mL，在50?水浴下保持10min，冷却，在 用水定容至90%甲醇>30%甲醇>60% 酮类物质的提取率依次为: 760nm测吸光值。标准工作曲线方程为:y=0.0086x+甲醇>水，90%甲醇溶液对黄酮的提取效果最好，提 20.0067，R=0.9986，其中y为吸光度，x为没食子酸含 16.25%。30%和60%甲醇溶液提取率没有显 取率为 量。每个样品做三个平行，结果以百分含量计。著性差异，而水对黄酮的提取率最低。[6] 1.2.3 总黄酮类物质的测定采用硝酸铝法测定提 取液中总黄酮类含量，以芦丁为标准品。准确吸取不 5mL，静置 同浓度芦丁标准工作液和甲醇提取液各 25 多酚总黄酮 5min，加入0.3mL 亚硝酸钠(5%)，反应6min 后加 入 0.3mL硝酸铝溶液(10%)，反应6min再加入4mL1mol/L 20 氢氧化钠和2.5mL水，反应10min后于510nm处测定 15 y=0.0005x+0.0582， 吸光度。标准工作曲线方程为:2R=0.9982，其中y为吸光度，x为芦丁含量。每个样品 10 做三个平行，结果以百分含量计。百分含量(%) 1.2.4 提取液抗氧化活性的测定 5 [7] 1.2.4.1 还原能力的测定取1mL稀释为一定浓度 10mL 离心管中，加入1mL 磷酸盐 梯度的提取液于0 (PBS)缓冲液(0.2mol/L，pH6.6)和1mL1%铁氰化钾溶 水30%甲醇 60%甲醇 90%甲醇 50?水浴20min，取出，加入1mL10%三氯乙 液，混匀，图1 不同浓度甲醇对多酚和总黄酮的超声提取作用 酸溶液，混匀，迅速冷却。2.2 不同浓度甲醇提取液的还原能力 取1mL混合液于5mL离心管中，加入1mL超纯水 还原能力的测定是以样品是否为有效的电子供 和0.2mL0.1%的三氯化铁溶液，混匀，测定溶液在 应者为指标的。若是有效的电子供应者，其供应 700nm处的吸光度(A)，以A表示样品的还原能 700nm700nm3+2+Fe还原成Fe，还可与自由基形成较惰 的电子可将力，每个样品做三个平行。[7] 性的物质，从而中断自由基链锁反应。一般情况下， 1.2.4.2 清除DPPH自由基能力的测定取0.4mL稀 物质的还原能力越强，其抗氧化活性也越高。红毛丹 释为一定浓度梯度的提取液于5mL 试管中，加入 2mL0.1mmol/L DPPH甲醇溶液，混匀，暗处放置30min果皮不同浓度甲醇的提取液均具有较强的还原能力 (图2)，且提取物的还原力与其质量浓度呈线性关并不断振荡，在517nm处测其吸光度，每个样品做三 系。在浓度低于4g/mL时，60%甲醇提取液的还原能 μ 个平行。清除率计算公式为:Vc和其它三个提取液，水提取液的效果最差; 力高于%=[1/A] ×100%抑制率()-(A-A)ij 0 4μg/mL时，90%和60%甲醇提取液的还 当浓度高于式中，A=2mLDPPH 溶液+0.4mL 待测溶液的吸 iVc的还原能力。30%甲醇浓度和 原力相当且略低于光度;A=2mL 甲醇溶液+0.4mL 待测溶液的吸光度; j水提取液的还原力低于90%和60%甲醇提取液，这可 A=2mL甲醇溶液+0.4mL超纯水的吸光度。 0 能与提取液的多酚含量有关。研究发现，多酚含量的 高低直接提取液的还原能力。 130 年第期 201110 1.4 用。在一定浓度范围内，提取物对羟自由基的清除作 水30%甲醇 60%甲醇 90%甲醇 Vc 用随着浓度的增加而增强。90%甲醇和60%甲醇提取 1.2 物清除羟自由基的IC值分别为36.69、34.06μg/mL， 50 Vc(40.80g/mL);30%甲醇和水提取物对羟自 μ1.0 略高于)m由 基 的 清 除 能 力 相 对 较 弱 ，IC值 分 别 是 46.80、 50 0.8 700n80.30μg/mL。不过，当浓度高于50μg/mL，Vc的抑制羟 0.6 自由基能力显著高于四种提取液。当提取物浓度大于 170μg/mL时，60%和90%甲醇提取液对羟自由基的清 吸光值(0.4 [10]Shyamala等的研究结果一致， 除能力有所减弱，这与0.2 可能是一些抗氧化剂浓度过高时表现出促氧化作用。0.0 0 2 4 6 8 10 12 结论3 样品浓度(μg/mL) 四种提取液中90%和60%的甲醇溶液对红毛丹 3.1 图2 不同浓度甲醇提取液的还原能力 果皮中多酚的提取率较高，两者无显著性差异;90% 2.3 不同浓度甲醇提取液对DPPH自由基的清除能力 的甲醇溶液对黄酮的提取率最高，略高于60%和30%DPPH?在有机溶剂中是一种稳定的自由基，呈 紫 的甲醇溶液。517nm处有最强光吸收作用。在自由基清除 色，在3.2 不同浓度甲醇提取液均具有较强的还原能力、 517nm处的光吸收作用消 剂存在时，孤电子被配对， DPPH和羟自由基清除能力，且与提取物浓度含量?失或减弱，消减的程度与配对电子数成化学计量关 系，因此可通过测定光吸收的消减程度来评价抗氧化 呈正相关性，其IC 值均为μg/mL级，90%和60%的甲 50 DPPH自由基的能力。由图3可知，红毛丹果皮 剂清除醇提取液的抗氧化能力高于30%甲醇和水提取液。 DPPH自由基抑 不同浓度的甲醇提取液均具有很强的3.3 综合考虑对多酚的提取率、抗氧化能力以及提 DPPH自 制能力，且随着提取物质量浓度的增加，抑制60%的甲醇作为提取液，高值 取成本等因素，可采用DPPH自由基 由基的能力相应提高。四种提取液清除开发红毛丹果皮，为人体保健和食品保质提供天然 的IC值与Vc很相近，均在4μg/mL左右。 50 的抗氧化原料。 参考文献 水30%甲醇 60%甲醇 90%甲醇 Vc 100 90 [1] Wall MM. 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Leafy vegetable tsextraantioxidcant -[9]。由图4可知，红毛丹果皮不同 应，对机体危害极大activity and effect on storage stabiof heatedlity oils[J]nnova. tive I 浓度的甲醇提取液对羟自由基均具有一定的清除作Food Science& Emerging Technologies, 200235(6):9-245. 131 2011年第10期 file:///C|/Users/Administrator/Desktop/新建文本文档.txt 涵盖各行业最丰富完备的文献,最前瞻权威的行业动态,是专业人士的不二选择。 file:///C|/Users/Administrator/Desktop/新建文本文档.txt2012/8/26 12:19:58