芽孢杆菌、放线菌、酵母菌、曲霉、青霉的分离纯化

芽孢杆菌、放线菌、酵母菌、曲霉、青霉的分离纯化 芽孢杆菌、放线菌、酵母菌、曲霉、青霉的分离纯化 一:实验目的 1、学习从土壤中分离、纯化微生物的原理与方法。 、学习、掌握微生物的鉴定方法。 2 3、对提取的土样进行微生物的分离、纯化培养，并进行简单的形态鉴定 4、对简单鉴定后的微生物进行生理生化鉴定。 二:参考文献 微生物课本，微生物实验教程，老师课件 三:实验原理 从自然界筛选菌种的具体做法，大致可以分成以下四个步骤:采样、增殖培养、纯种分离和性 能测定。 四:实验材料 1、器材: 小铁铲和无菌纸或袋(可省)、培养皿8个、载玻片、盖玻片、普通光学显微镜、量筒、滴管、吸 水纸、无菌水试管5支(每支4.5mL水)、烧杯3个、三角瓶5个、电炉、玻璃棒、接种环、镊子、恒 温培养箱、高温灭菌锅、天平、滤纸、pH试纸等。 2、试剂: 配制牛肉膏蛋白胨培养基的原料(牛肉膏0.9g、NaCl1.5g、琼脂4.5g、蛋白胨3.0g)、Lugol氏碘 液、可溶性淀粉0.6g、结晶紫染液、番红染液、95,乙醇、无菌水等。 3、土样:取自黄冈师范学院图书馆后，地下10cm左右。 五:实验方法步骤 分离纯化 1. 菌体来源:土壤，发霉的橘子，发霉的花生。 2. 培养基名称及配方: 牛肉膏蛋白胨固体培养基(芽孢杆菌) 牛肉膏1.2g，蛋白胨4g，NaCl2g，琼脂6~8g，自来水400ml，pH7.2~7.4 查氏培养基(曲霉，青霉) 蔗糖或葡萄糖24g,NaNO31.6g,K2HPO4?3H2O0.8g,KCl0.4g,MgSO4?7H2O0.4g,FeSO4?7H2O0.008g,琼脂12~16g,蒸馏水800ml，自然pH 高氏1号培养基(放线菌) 可溶性淀粉8g,KNO30.4g,NaCl0.2g,K2HPO4?3H2O0.2g,MgSO4?7H2O0.2gFeSO4?7H2O0.004g,琼脂6~8g,蒸馏水 第 1 页 共 3 页 400ml,pH7.4~7.6 制法:先用少量冷水把可溶性淀粉调成糊状，用文火加热，然后再加水及其他药品，待各成分溶解后再补足水至400ml. 酵母菌富集培养基(酵母菌)葡萄糖20g，尿素0.4g，(NH4)2SO4?7H2O0.4g,KH2PO41g,Na2HPO40.2g,MgSO4?7H2O0.4g，FeSO4?7H2O0.04g，酵母膏0.2g，孟加拉红0.012g，pH4.5 3.实验条件:牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂，蔗糖或葡萄糖，可溶性淀粉，自来水，NaNO3 K2HPO4?3H2O KCl MgSO4?7H2O FeSO4?7H2O KNO3 尿素(NH4)2SO4?7H2O KH2PO4 Na2HPO4 酵母膏，孟加拉红 平板15个，试管15个，试管塞15个，三角瓶4个，玻璃珠10颗，接种针1个，接种环1个，酒精灯1个，打火机1个，量筒1个，电子秤1台，标签纸，无菌操作台，高压灭菌锅，温箱 4实验:平板灭菌——配制培养基——灌试管——培养基灭菌，水灭菌——倒平板，溶解土样——接种到平板——培养——接种到试管培养基——培养 六:实验结果 芽孢杆菌:菌落较潮湿，部分小而 有突起，菌落稍透明，菌落与培养基基 本没结合，菌落正反两面颜色相同。 芽孢杆菌 青霉:菌落大而疏松，干燥，网状交 织，菌落不透明，与培养基结合牢固， 菌落正反两面不一样，菌落有青色。 青霉 第 2 页 共 3 页 酵母:菌落比较湿，大而突起，菌落稍透明，菌 落与培养基不结合，呈乳脂状色，菌落正反两面颜 色 一样，有明显的酒香。 酵母 曲霉:菌落干燥，大而疏松，丝状，菌落不透明， 菌落与培养基结合紧密，菌落 正反两面颜色不一， 菌落有黄色，有霉丑味。 曲霉 放线菌:菌落较干燥，菌落小而紧密，菌落不透 明，菌落与培养基结合紧密，菌落正反两面颜色不 一。 放线菌 七:注意事项 1:土壤的取材时应该注意所取土壤的地方。 2:土壤稀释时应注意水温。 3:灭菌时注意灭菌锅不漏气。 4:平板划线应注意无菌操作。 5:平板划线注意划线的规范及相关注意事项。 6:培养时注意所需菌种相应的温度。 7:纯化时注意所接菌种的正确性。 第 3 页 共 3 页