尿系列蛋白的检测

尿系列蛋白的检测 DM 系列尿蛋白项目开展 1. 尿总蛋白的测定 2. 尿白蛋白的测定 3. 尿糖的测定 4. 尿NAG的测定 尿总蛋白的测定 磺基水杨酸法蛋白的测定 一个 空白一个 健康成人30-130mg/L 临床意义: 生理性:剧烈运动，寒冷，情绪激动，发热，是由于肾血管痉挛或充血，增加了肾小球的通透性所致，24H在2g下。 体位性:主要是脊柱前凸时，直接或通过肝脏压迫下腔静脉，肾静脉淤血所致， 摄食性蛋白尿，指输注蛋白制剂或进食过多蛋白时。 病理性: 一(肾前性蛋白尿:多发性骨髓瘤BJ蛋白尿 溶血所致血红蛋白尿 大面积创伤炎症时肌红蛋白尿 单核细胞性白血病时的溶菌酶尿 等 二(肾小球性蛋白尿: 肾小球肾炎 肾盂肾炎 急性肾功能衰竭 高血压肾病 或继发肾小球疾病 三(肾小管酸中毒，重金属中毒，肾移植等排出以低分子量蛋白质为主的肾小管性蛋白尿 四(肾盂，输尿管，膀胱及尿道的验证，结石，肿瘤等。 每个标本前后两排，前为测定，后为对 照空白，如蛋白强阳性，可另加 40+360ul蒸馏水稀释后从做～～～ 尿液400ul+4ml蒸馏水空白 尿液400ul+4ml磺基水杨酸测定 需配置或购买已知定量的蛋白标准品～～～ 第一步结束后，需在温箱30min反应，后加入酶标板300ul 空白值 在酶标仪上490nm处比色 结果 以A1-A0除以标准曲线乘以标准数值 空白 标准品 待测样本 1:10的倍比稀释。。。 尿微量白蛋白的测定(MCA) MAC是糖尿病肾病和高血压肾病最早出现的生化指标 1( 肾小球损伤的结果，肾小球滤膜上的电荷丢失，尤其是孔径大小选择功能破坏所致 2( 血流动力学变化，DM患者常有肾小球血管调节功能障碍，从而引起肾内高压 3( 组合和血液中的蛋白与高浓度的葡萄糖接触后增加了非糖酶酰化的速率，从而引起基膜屏障 功能的改变。原发性高血压诱发MCA的主要原因是高血压引起肾小球血流动力学改变促进 白蛋白穿过基膜，形成白蛋白尿。 临床意义: 一(糖尿病肾病， 二(高血压肾病 三(MCA随年龄增加而升高。 四( 共分两种方法 一:半定量的方法:Roche尿微量白蛋白的试纸条 最高测定浓度为100mg/L 插入尿液5S后取出。与外包装测试样本比较即可。 12条/盒 30条/盒 二( 白蛋白放射免疫分析 临床意义: 肾小球性蛋白尿，是由于滤膜破坏，白蛋白(alb)滤过而肾小管不能全吸收，因此尿白蛋白升高，示肾小球方面的疾患，若肾小管有疾患时，对低分子蛋白不能吸收，因此尿中B2-微球蛋白(B2-MG)升高，表示肾小管方面疾患。 测定尿中白蛋白与B2-MG可以鉴别诊断肾小球与肾小管的疾患从而鉴别肾脏损伤的部位。测定尿中白蛋白可以了解肾小球有无损伤，是肾小球诊断的最灵敏方法，可鉴别糖尿病肾病与高血压肾病，以及监测对肾小球有损伤的药物等。 测定原理: 125 应用竞争机制原理，标准或样品中的ALB和加入的I-ALB共同与一定量的特异性抗体产生竞 125争性免疫反应，I-ALB与抗体的结合量与标准或样品中ALB的含量呈一定的关系。用免疫分离试剂(PR)将结合部分(B)与游离部分(F)分离后，测定结合部分的放射性强度。并计算相应结合律，B/B0。用已知标准ALB含量与对应结合律作图，即得标准抑制曲线，从标准曲线上查知对应集合率的待测样品中的ALB的含量。 测定方法: 125 ALB缓冲液，标准液，样品，质控，I-ALB 兔抗ALB抗体，驴抗兔免疫分离剂 总T管 NSB管 0管 各标准管 样品管 ALB缓冲液 - 250 50 - - ALB标准S1-6 - - - 50 - 样品，质控 - - - - 50 125I-ALB 100 100 1001 100 100 兔抗ALB抗体 - - 200 200 200 混匀，37?水浴温育半小时 驴抗兔分离试剂 - 500 500 500 500 充分摇匀，放置15min。3500/转 离心15min 弃上清，测定各沉淀管放射性系数。 尿糖的测定 即血糖的氧化酶测定方法(GOD法) 上机，手工均可。 临床意义: 0.511.0 无US则肾糖阈升高。 尿NAG的测定 尿N,乙酰,β,氨基葡萄糖苷酶 张爱芳 (N,Acetyl,β,glucosaminase，NAG) 尿NAG1活性升高可作为肾脏损伤的一个极为灵敏的指标，它可预示肾脏活动病变、急性肾衰、药物诱致肾毒损害和肾移植排异反应的时期诊断。 尿N,乙酰,β,氨基葡萄糖苷酶(N,Acetyl,β,glucosaminase，NAG)，是广泛分布在哺乳动物身体各组织中，在人类，为泌尿系统所特有的酶。肾干冻切片发现NAG几乎存在于近端肾小管细胞的溶体酶中，分子量约为14万，是一种重要的溶酶体酶，与粘多糖类及糖蛋白代谢有关，酶的活性最高值是在近曲小管(PCT)，低值在小球(GF)、近端小管垂直部(PR)、髓袢上升支(MAL)和皮质集合管(CCP)，膀胱粘膜含量最低。在正常情况下尿液中可测得少量NAG，但在小管上皮细胞变性、坏死时，NAG活性显著升高。 尿中半乳糖苷酶(GAL)是一种广泛存在于人体组织细胞中的酶，属溶酶体酶。以近曲肾小管含量较多，正常人尿中含量很低，当肾组织尤其是肾小管损害时，尿中含量明显上升。由于它富含于新生态溶酶体中，肾损伤后修复时，它又可升高，所以它又是肾损伤修复的标志。如果GAL持续升高，则表明肾损伤处在修复过程中，说明愈后较好。 另外，临床上以NAG,GAL比值评价肾损伤的程度和愈后，优于单测NAG和GAL。GAL,NAG比值越小，说明肾损伤越严重，愈后越差，反之，比值越大则提示肾损伤轻微或恢复。一般GAL,NAG比值:尿毒症,慢性肾炎,肾病综合征和急性肾炎,肾炎恢复期。动态观察NAG和GAL两者变化对肾疾患的诊断、鉴别诊断、治疗监测和预后评估有重要价值。 NAG是一种高分子酶，无法由肾小球滤过，其在肾小管溶酶体中含量很高。肾小管受损时，尿中NAG含量增高，NAG是肾小管受损的标志物。 测量酶标板的图例: ?????????????????????????? 空白 30ul蒸馏水+10ul标准 20ul蒸馏水+20ul标准 10ul蒸馏水+30ul标准 40标准 测定流程: 测定管 测定对照 标准 标准对照 尿液 0.1ml 0.ml -------- ------- NAG酶液 -------- -------- 0.1 -------- 蒸馏水 --------- -------- -------- 0.1 NAG底物(已预温) 0.5 --------- 0.5 0.5 终止液 ---------- 2 ---------- 2 37? 水浴30min 终止液 2 --------- 2 ---------- NAG底物 ---------- 0.5 --------- 0.5 混匀，400nm处读取各管吸光值。 NAG=A-A/A-A标准 测定管测定对照管标准管标准对照管× 上海德波生物技术有限公司