复方苦黄洗剂的质量标准研究

复方苦黄洗剂的质量标准研究         &nb sp;   作者:赵平 李彦龙 郭艳霞 方明余 高明焕  【关键词】  大黄,苦参,黄柏,质量,标准     复方苦黄洗剂,批准文号:冀药制字Z20051604,是临床上用于清热燥湿、消瘀止痛、收敛止血～治疗湿热蕴结下注、瘀血阻络所致的内痔、外痔、混合痔、肛周湿痒、炎症及妇科带下病、阴道炎、外阴瘙痒等的常用药物。由大黄、苦参、黄柏、百部、白矾、蛇床子、花椒、芒硝、五倍子、地榆、防风、甘草12味药材组成。大黄为该制剂主药之一～其中大黄素、大黄酚是大黄的主要有效成分。现代药理研究表明～大黄煎剂对葡萄球菌、溶血性链球菌等多种细菌～以及一些常见致病性真菌和流感病毒等均有不同程度的抑制作用。测定煎剂中的有效成分的含量对临床合理用药具有指导意义。 1  材料与方法 1.1  仪器与药品 1.1.1  仪器  高效液相色谱仪,series ?泵～Model 500检测器～N2000工作站,,1/10万分析天平,德国METTLER  TOLEDO公司,。 1.1.2  药品  中药材由河北省唐山市丰南区中医院制剂室提供～大黄对照药材(中国生物制品检定所～批号:120902-200408)～大黄素对照品,中国生物制品检定所～批号110756-200110,～大黄酚对照品,中国生物制品检定所～批号110796-200412,～苦参碱对照品,中国生物制品检定所～批号110725-200506,～盐酸小檗碱对照品,中国生物制品检定所～批号 110713-200208,～甲醇色谱纯,天津四友试剂厂,～磷酸、三氯甲烷、甲醇、甲酸、乙醇等均为分析纯～水是纯化水～硅胶G薄层板,青岛海洋化工厂,。 1.2  方法 1.2.1  薄层鉴别 1.2.1.1  大黄的鉴别  取本品15 mL～加盐酸1.5 mL～水浴上加热30 min～放冷～用三氯甲烷振摇提取2次～每次20 mL～合并三氯甲烷液～蒸干～残渣加甲醇1 mL使溶解～作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.5 g～同法制成大黄对照药材溶液。照薄层色谱法,1,试验～分别吸取大黄供试品溶液5 μL～大黄对照药材溶液4 μL～分别点于以同一以羧甲基纤维素纳为黏合剂的硅胶G薄层板上～以石油醚(30，60?),甲酸乙酯,甲酸,15?5?1,的上层溶液为展开剂～展开～取出～晾干～日光下检视。 1.2.1.2  苦参的鉴别  取本品20 mL～用氨试液调pH值至9，10～加氯仿振摇提取2次～每次20 mL～合并氯仿提取液低温蒸干～加乙醇2mL使溶解～作为供试品溶液。另取苦参碱对照品～加乙醇制成每mL含1 mg的溶液～作为对照品溶液。照薄层色谱 法,1,试验～吸取上述2种溶液各3 μL～点于同一硅胶G薄层板～以醋酸乙酯-丙酮-苯-氨水,6?2?6?0.2,为展开剂～展开～取出～晾干～喷稀碘化铋钾试液～自然光下检视。 1.2.1.3  黄柏的鉴别 取本品5 mL～水浴蒸干～加甲醇5 mL使溶解～滤过～滤液作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品～加甲醇制成每mL含1 mg的溶液～作为对照品溶液。照薄层色谱法试验～吸取上述2种溶液各3 μL～分别点于同一硅胶G薄层板～以苯,乙酸乙酯,甲醇,异丙醇,水,20?10?5?5?1,为展开剂～展开～取出～晾干～臵紫外光灯,365 nm,下检视。 1.2.2  含量测定 1.2.2.1  溶液的配制  ?大黄素、大黄酚对照品混合储备液:精密称取大黄素对照品、大黄酚对照品适量～加无水乙醇,乙酸乙酯,2?1,混合溶液制成每mL含大黄素10 μg、大黄酚24 μg的 混合溶液～即得。? 样品溶液:取供试液20 mL用0.45 μm微孔滤膜过滤即得～备用。 1.2.2.2  色谱条件  色谱柱为Hypersil ODS2分析柱,4.6 mm×250 mm～5 μm,～甲醇-0.1,磷酸溶液,85?15,为流动相～流速为1.0 mL/min～检测波长为254 nm。进样量为20 μL。在选定的色谱条件下测得的色谱图见图1(见封3)。由图1可见～大黄素、大黄酚的保留时间分别为10.79 min和15.57 min～分离效果良好。 1.2.2.3  测定方法 1.2.2.3.1  线性关系的考察  分别精密吸取对照品储备液1、2、3、4、5 mL～臵10 mL量瓶中～加流动相至刻度～照上述色谱条件分别进样20 μL～记录色谱峰面积。 1.2.2.3.2  精密度试验  在上述色谱条件下～取大黄素浓度为9.88 μg/mL、大黄酚浓度为24.1μg/mL的混合对照品溶液～连续进样5次～测定大黄素和大黄酚相对标准偏差(RSD)。 1.2.2.3.3  稳定性试验  取本制剂按1.2.1.1项下方法制备好后0、2、8、12、24 h分别进样20 μL～测定大黄素和大黄酚的RSD。 1.2.2.3.4  重复性试验  取同一批次的供试品5瓶～分别按1.2.1.1项下的方法进行处理后进样～测定大黄素和大黄酚的RSD。 1.2.2.3.5  加样回收率试验  取已知浓度为大黄素5.84 μg/mL、大黄酚15.36 μg/mL的供试品溶液5份～每份5 mL～分别加入已知浓度为大黄素9.88 μg/mL和大黄酚24.1 μg/mL的混合对照品溶液5，10 mL量瓶中～混合～按1.2.1.1项下方法进行处理～测定大黄素和大黄酚的平均回收率和RSD值。 1.2.2.3.6  样品的测定  取060101批、060102批、060103批样品～按1.2.1.1项下操作～精密吸取此溶液20 μL～注入高效液相色谱仪中～记录色谱图～按外标法以峰面积计算含量 1。 2  结  果 2.1  薄层鉴别 2.1.1  大黄的鉴别 供试品色谱中～在与对照药材色谱相应的位臵上～显相同的黄色斑点～而阴性对照无干扰。见图1(封3)。 2.1.2  苦参的鉴别 供试品色谱中～在与对照品色谱相应位臵上～显相同颜色斑点～而阴性对照无干扰。见图2(封3)。 2.1.3  黄柏的鉴别  供试品色谱中～在与对照品色谱相应位臵上～显相同颜色荧光斑点～而阴性对照无干扰。见图3(封3)。 2.2  含量测定 2.2.1  线性关系的考察  将峰面积Y与相应的浓度进行回归处理～计算回归方程为～大黄素:Y,3079717，75.4X～r,0.9998,大黄酚:Y,5636054-13546.4X～r,0.9999。见图4～5。     实验结果表明,大黄素浓度在0.988，4.94 μg/mL范围内呈良好的线性关系～大黄酚浓度在2.41，12.05 μg/mL范围内呈良好的线性关系。 2.2.2  精密度试验  测得大黄素RSD,0.55,～大黄酚RSD,1.39,。见表1、2。图6。表1  大黄素精密度试验结果,略,注:1为大黄素,2为大黄酚 表2  大黄酚精密度试验结果,略, 2.2.3  稳定性试验  测得大黄素的RSD,1.31,～大黄酚的RSD,1.26,～结果表明样品在24 h内含量稳定。见表3。表3  大黄素稳定性试验结果,略,表4  大黄酚稳定性试验结果,略, 2.2.4  重复性试验  测得大黄素的RSD=0.96,～大黄酚的RSD=0.88,。见表5、6。表5  大黄素重复性试验结果,略,表6  大黄酚重复性试验结果,略, 2.2.5  加样回收率试验  实验结果大黄素的平均回收率为100.5%～RSD值为1.42%,大黄酚的平均回收率为99.82%～RSD值为1.30%。见表7、8。表7  样品的测定结果,略,表8  大黄酚加样回收率试验结果,略, 2.2.6  样品的测定  按外标法以峰面积计算含量。见表7。 3  讨  论     本试验对复方苦黄洗剂进行了质量控制标准研究～增加了大黄、苦参、黄柏的薄层鉴别～建立了采用高效液相色谱法测定处方中大黄的有效成分大黄素、大黄酚含量测定的方法～样品处理方法简单～薄层色谱图清晰～含量测定结果准确～重复性良好～可用于该制剂的质量控制。 【参考文献】   ,1,国家药典委员会.中国药典:一部,M,.北京:化学工业出版社～2005:461