甲胎蛋白操作规程

甲胎蛋白操作规程 甲胎蛋白(AFP)诊断试剂盒 时间分辨免疫荧光分析法 操作规程 文件编号 编写者 审核者 批准者 医院 甲胎蛋白诊断试剂盒 医院: 版本: 时间分辨免疫荧光分析法 科: 执行日期: 标准操作规程 室: 共3 页 第 1 页 1.原理 试剂盒采用双抗体夹心二步法:单克隆抗AFP抗体包被96孔荧免板，用铕离子标记另一株配对的抗AFP单克隆抗体(抗AFP-DTTA-Eu)。加入标准品和待测样本, 标准品和待测样本中的AFP与包被在微孔内的单克隆抗体结合，形成抗AFP—AFP。洗涤，加入抗AFP-DTTA-Eu，抗AFP-DTTA-Eu与结合在板上的AFP形成抗AFP—AFP—抗AFP-DTTA-Eu免疫复合物。洗涤去除游离的抗AFP-DTTA-Eu，加入荧光增强液，微孔表面免疫复合物上的Eu被荧光增强液解离，并形成稳定的荧光配合物，荧光强度与标准或样品中的AFP浓度呈正比例，通过标准曲线可得出样品中AFP浓度。 2.样本处理 0使用血清或以肝素、EDTA、柠檬酸盐作抗凝剂的血浆。2,8C条件下样本可保存2 0天，–20C可保存更长时间。样本避免反复冻融。 若样本中AFP含量大于1000U/ml，请用生理盐水稀释样本后再测量。 3.试剂 本科室使用苏州新波生物技术有限公司甲胎蛋白(AFP)时间分辨免疫荧 光法诊断试剂盒，试剂盒主要组分如下: a. 甲胎蛋白参考标准品(1U=1.21ng):1套，6瓶，1ml/瓶 A:0 U/ml; B:1 U/ml; C:5 U/ml;D:32 U/ml;E:320 U/ml;F:1000 U/ml b. 铕标记物:1瓶，1ml c. 实验缓冲液:1瓶，50ml d. 浓缩洗液:1瓶(40ml，使用前用去离子水作1:25倍稀释) e. 荧光增强液:1瓶，30ml f. 微孔反应板:1块(12×8) g. 吸头:20支 h. 说明:1份 甲胎蛋白诊断试剂盒 医院: 版本: 时间分辨免疫荧光分析法 科: 执行日期: 标准操作规程 室 共 3 页 第 2 页 4.仪器(用户自备) 4.1 时间分辨荧光分析仪; 4.2 微孔洗涤机; 4.3 微孔振荡器; 5.操作步骤 5.1 试剂的准备:将40ml浓缩洗液和960ml去离子水在干净的洗液瓶中混合，作为工作洗涤液备用。 05.2 将实验缓冲液、标准品、待测样品和所需数量的微孔反应条平衡至室温(20,25C)。 5.3 吸取25μl的标准品和样品，按顺序加入相应微孔;在各微孔中加入200μl实验缓冲液，室温慢速振动60分钟。 5.4 稀释铕标记物:用实验缓冲液按1:50稀释铕标记(详见操作流程图)，混匀备用。 5.5 60分钟后，洗板2次，将板条在洁净的吸水纸上拍干。 5.6 在各微孔中加入200μl已稀释的铕标记溶液，在室温下慢速振动60分钟。 5.7 洗板6次，将板条在洁净的吸水纸上拍干。 5.8 在每个微孔内加入200μl的增强液，慢速孵育5分钟。 5.9 确定微孔反应条已固定在时间分辨荧光测定仪上，开始。 6.结果判断: 6(1结果测定 用本公司ANYTEST2000时间分辨荧光测定仪或WALLAC公司时间分辨荧光测定仪 (1230、1234、1420)测量时，检查程序的参数是否如下所示。如不符，请修改。 ASSAY TYPE(分析类型):IFMA(时间分辨免疫荧光分析法) FITTING METHOD(曲线拟和方式):PLINE SMOOTHED(平滑样条函数) X-AXIS(X轴):LOG Y-AXIS(Y轴):LOG-B BLANKS(背景孔数):2 STANDARDS(参考标准点):5 STANDARDS REPLICATES(参考标准点复孔数):2 STANDARD CONC(参考标准点浓度):1 STANDARD CONC(参考标准点浓度):5 STANDARD CONC(参考标准点浓度):32 STANDARD CONC(参考标准点浓度):320 STANDARD CONC(参考标准点浓度):1000 UNKNOWN REPLICATES(待测样品孔数):1 6.2 结果判读:用本试剂盒对70份正常人血清进行检测，甲胎蛋白测量范围为0.88-10.2 U/ml。建议各实验室建立自己的正常值范围。 7(临床意义 AFP是胚胎的重要血清成分，分子量为70kD，是一条多肽链糖蛋白，由590个氨基酸组成，含糖量4%。在正常妊娠过程中，少量AFP可通过胎盘进入母体内，使母亲血清AFP浓度逐渐升高，当胎儿低氧症、胎儿危急或死亡时，母体血清AFP浓度会很高。检测母体血清AFP浓度可用于产前诊断胎儿有无遗传缺陷及畸形存在。 血清AFP的检测，使肝细胞癌的诊断和早期诊断有所突破，并成为肝癌流行病学调查的重要手段。AFP的检测是应用最早、最常用的肿瘤标志物之一。对于原发性肝癌，AFP主要应用于: 1) 原发性肝癌的辅助诊断; 2) 与其他肝脏疾病相鉴别; 3) 协助判断肝癌的分化程度:AFP的含量与肿瘤大小、癌细胞的分化程度有一定的关系。 4) 对肝癌患者病情和预后的判断。 甲胎蛋白诊断试剂盒 医院: 版本: 时间分辨免疫荧光分析法 科: 执行日期: 标准操作规程 室 共 3 页 第 3 页 8(参考值 甲胎蛋白测量范围为0.88-10.2 U/ml。建议各实验室建立自己的正常值范围。 9(注意事项 9.1 理解说明书，不要混用不同批号的试剂，不要使用过期的试剂。 9.2 尽量建立一个干净无尘的实验室环境，对实验的成功起到决定性作用。(因为尘 土中含有很多金属离子，会影响实验结果)。 9.3 试剂盒与被测样本使用前必须达到室温。 9.4 振荡器按照《2510变频振荡器标准操作规程》设定需要的振荡频率。 9.5 微孔洗涤机按照《Egate2310全自动微孔洗涤机标准操作规程》在每天使用前应 进行校正注液量和残自量，注意管道是否畅通。洗涤时，确认每孔必须是干的， 洗涤液都注满微孔。洗涤后，每个孔必须是干的，如果仍有水则需拍干。 9.6 吸取增强液和铕标记物时，请使用干净的吸头，避免尘土等不必要的污染。加增 强液时探头应悬空，避免碰到小孔边缘或其中试剂。 9.7 使用医用蒸馏水或去离子水配制洗液。 9.8 宜用干净的一次性容器配制铕标记物，应避免铕标记稀释液进入标记物原液中。 9.9 封片不能重复使用。 9.10 如需稀释标本，请用小牛血清稀释。 9.11 所有的样本和本试剂盒应作为潜在的传染原看待，按传染病实验室检查规程 操作。 9.12 如对实验结果有疑问，应重复试验。 9.13 胆红素800u mol/L，甘油三脂20 mol/L，血红蛋白18g/dl对本试剂盒无干 扰作用。 9.14 本试剂盒应置2—8?保存，有效期参照瓶上所贴标签。