HPLC法测定咳速停胶囊中盐酸麻黄碱含量方法改进

HPLC法测定咳速停胶囊中盐酸麻黄碱含量改进 【摘要】目的:对咳速停胶囊中盐酸麻黄碱含量测定方法进行改进。方法:采用高效 液相色谱法，选用UItimate AQ-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5μm);流动相:甲醇-乙腈-0.01 molμL-1磷酸二氢钾溶液(磷酸调节PH值至2.5)(5:1:94);流速:1.0 mL?min-1;紫外 波长:210 nm。结果:盐酸麻黄碱在0.060,0.400μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9999)， 平均加样回收率为97.99%(n=6)，RSD,0.9%。结论:本方法准确、可靠，可作为咳速停胶 囊质量控制的方法。 【关键词】咳速停胶囊;盐酸麻黄碱;含量测定;方法改进 To improve the Content Determination Mothed of Ephedrine Hydrochloride in Kesuting Capsule by HPLC HE Li1，TANG Xiao-bo2，wang Jiaping3; Chai Jun3(1Construction Hospital, 6th Engineering Company, Hunan Province, Changsha 410007;2Zhejiang Better Pharmaceuticals Co.,Ltd.，Shaoxing 312071;3 Shaoxing Institute for Food and Drug Control ,ZhejaingShaoxing312071) 【Abstract】Objective: To improve the content determination method of Ephedrine Hydrochloride in Kesuting Capsule by HPLC. Methods: The UItimate AQ-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm) column was used. The mobile phases consisted of methanol ,acetonitrile,0.01 molμL-1 potassium dihydrogen phosphate(adjusted pH to 2.5 with phosphoric acid)(5:1:94), the flow rate was 1.0 mL? min-1,the detection wavelength was at 210 nm. Results: The linear ranges of ephedrine hydrochlor was at 0.060,0.400μg (r=0.9999), the average recovery was 97.99% with a RSD of 0.9% (n=6). Conclusion: The method is accurate and reliable, could be used in the quality control of ephedrine hydrochloride in Kesuting Capsule. 【Key words】HPLC; XiaoKe Granule ;Ephedrine hydrochloride; Content determination 咳速停胶囊是由吉祥草、黄精、白尾参、桔梗、虎耳草、批把叶、麻黄、桑白皮和罂粟 壳九味中药组成的复方制剂，具有补气养阴，润肺止咳，益胃生津等功效。用于感冒及慢性 支气管炎引起的咳嗽，咽干，咯痰，气喘。该药现行对盐酸麻黄碱进行含量测定，重现 性差，提取所用的溶剂毒性大，且原标准色谱条件下出峰时间较长。经查阅和参考相关文献 及资料[1-2]，笔者对测定的色谱流动相、提取溶剂等条件进行改进，使得实验更加简单，分 析时间更快，且色谱峰形及分离度良好，适用于咳速停胶囊的含量测定。 1仪器与试药 1.1 仪器安捷伦1200高效液相色谱仪(四元泵、VWD检测器、自动进样器、1200化学工 作站)。 1.2 试药盐酸麻黄碱对照品(批号171242-200405，供含量测定)购自中国药品生物制 品检定所;超纯水，甲醇、乙腈均为色谱纯;咳速停胶囊三批(20101101，20110327，20090920) 均由贵州百灵企业集团制药股份有限公司生产。 2方法与结果 2.1 色谱条件色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，UItimate AQ -C18(250×4.6mm， 5μm);流动相:甲醇-乙腈-0.01 molμL-1磷酸二氢钾溶液(磷酸调节PH值至2.5)(5 :1: 94);检测波长210nm;柱温35?;流速1.0mL?min-1。 2.2 溶液制备 2.2.1对照品溶液的制备精密称取盐酸麻黄碱对照品10.00mg，置100mL量瓶中，加0.1%盐酸甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀;再精密量取10.0ml置25mL量瓶中，加0.1%盐酸甲醇溶液至刻度，摇匀，作为对照品溶液(浓度为40.00μg?mL-1)。 2.2.2供试品溶液制备 取本品装量差异项下的物，研细，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液1.5ml，密闭，使充分湿润，加入乙醚50ml，超声处理30分钟，放置至室温，滤过，滤渣用乙醚10ml洗涤，收集滤液与洗液，加0.1,盐酸甲醇溶液4ml，摇匀，低温挥干，残渣加0.1,盐酸甲醇溶液使溶解，转移至20ml量瓶中，加0.1,盐酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，离心，取上清液，即得。 2.2.3阴性供试品溶液制备按处方组成及生产制得缺麻黄的阴性样品，按供试品溶液制备法制得缺麻黄的阴性供试品溶液。 2.3系统适应性试验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性供试品溶液各5μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。理论板数以盐酸麻黄碱峰计大于3000;阴性供试品溶液色谱中在盐酸麻黄碱保留时间处无吸收峰，说明无干扰(见图1)。 图1HPLC色谱图 A 盐酸麻黄碱对照品; B供试品; C阴性对照 2.4线性关系考察分别精密量取盐酸麻黄碱对照品贮备液(0.100mg?mL-1)3.0，5.0，10.0，15.0，20.0 mL，置25 mL量瓶中，加0.1%盐酸甲醇溶液至刻度，摇匀，即得浓度为12.00,20.00，40.00,60.00 ,80.00μg?mL-1的对照品溶液，按上述色谱条件，分别进样5μl测定，记录峰面积，以峰面积为纵坐标(Y)，盐酸麻黄碱的进样量(X)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y =2177.4X -8.803(r =0.9999)。结果表明盐酸麻黄碱在0.060,0.400μg间线性良好。 2.5精密度试验取对照品溶液，按上述色谱条件，每次进样5μL，连续进样6次，记录盐酸麻黄碱色谱峰面积，结果RSD为 0.7%，精密度良好。 2.6 重复性试验取同一批号样品(批号20101101)按2.2.2.供试品溶液制备法，分别制得供试溶液6份，按上述色谱条件测定，分别计算盐酸麻黄碱含量，结果6份供试品测得含量的RSD为 1.0%。 2.7稳定性试验取同一批次的供试品溶液，分别在0，4，8，12，18.和24h，按上述色谱条件测定，进样5μL，记录盐酸麻黄碱色谱峰面积，结果RSD为 0.8%，表明供试品溶液在24h内稳定。 2.8加样回收率试验取已知含量的同一批样品(批号20101101，盐酸麻黄碱含量为1.18mg?g-1)0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，共6份，分别精密加入对照品溶液(浓度为0.100 mg?mL-1)6.0mL，摇匀，按2.2.2.供试品溶液制备法，分别测定盐酸麻黄碱含量，计算回收率，结果平均回收率为97.99%，RSD为 0.9%(见表1)。 2.9样品测定取上述三个批次的样品，分别按2.2.2.项下方法制备成供试品溶液，按上述色谱条件测定，盐酸麻黄碱的含量分别为0.59、0.64和0.53mg?粒-1。 3讨论 3.1流动相的选择 本品原标准采用的是甲醇与磷酸二氢钾溶液配制的流动相，经笔者实践，选用Agilent SB-C18柱(250×4.6mm，5μm)和Agilent Eclipse XDB-C18柱(150×4.6mm，5μm)出现不出峰的情况，换用UItimate AQ -C18柱(250×4.6mm，5μm)后，出现裂峰。查阅相关文献后，在原流动相中加入适当比例乙腈后，该系统检测峰保留时间恰当，峰形及分离度良好。 3.2提取溶剂的选择原标准采用氯仿作为提取溶剂，考虑减小实验的毒性，笔者选择极性相似的乙醚作为替代，发现乙醚提取的效果与氯仿相近，故改用乙醚作为提取溶剂。 3.3提取方法的改变考虑到提取溶剂乙醚挥发性大，为减小实验误差，将提取溶剂全部滤过后，蒸干。 本文试验结果，说明本法简便、快速、准确、重复性好，可作为咳速停胶囊的质量控制的理想方法。 参考文献 [1] 国家中成药标准地标升国标(内科 肺系(一)分册) 咳速停胶囊，504. [2] 国家药典委员会.中国药典2005年版[S].一部.北京:化学工业出版社，2005:588. 通信作者简介:唐小波， 男， 执业药师，从事药品生产 表1盐酸麻黄碱加样回收率试验结果 注:本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文