鹅大肠杆菌的分离鉴定

鹅大肠杆菌的分离鉴定 (1.金宇保灵生物药品有限公司，内蒙古 呼和浩特 0100302.;利拉伐(上海)乳业机械有限公司内蒙古办事 呼和浩特处，内蒙古 呼和浩特 010010;3.内蒙古艾迪动物标识技术有限公司，内蒙古010030) 鹅大肠杆菌病是一种原发或继发性的鹅肠道 摘要:鹅大肠杆菌病是一种原发或继发性 传染病，一年四季均可发生和流行，且流行地区相 的鹅的肠道传染病，主要侵害鹅的生殖器 当广泛，多为慢性经过。该病主要侵害鹅的生殖器 官，发病率和死亡率高。该试验从病鹅体内 官，发病率和死亡率高，常造成巨大的经济损失， 分离到一株细菌，对分离菌通过培养特性、 严重危害养鹅业的发展。笔者从陕西某鹅场病鹅 菌体形态、菌落形态、染色特性、生化试验等 体内分离到一株细菌，将分离菌通过培养特性、菌 一系列的系统鉴定，并进行了实验室诊断， 体形态、菌落形态、染色特性、生化试验等一系列 确定该菌为鹅大肠杆菌。动物试验证明，该 的系统鉴定，并进行了实验室诊断，确定该菌为鹅 菌株对雏鹅有很高的感染率和致死率。 大肠杆菌。动物试验证明，该菌株对雏鹅有很高的 感染率和致死率。 关键词:分离;鉴定;大肠杆菌;鹅 中图分类 号:S858.335.12 文献标识码:A 1 材料 文章顺序编号:1672- 5190(2008)03- 0032- 02 1.1 病料来源 病料采集于陕西关中地区疑似鹅 大肠杆菌感 染的鹅场。采集病鹅的脾脏、肝脏、心血和腹水4， ? 保存备用。 1.2 培养基 鲜血琼脂、普通琼脂、麦康凯琼脂、2 方法 半固体糖 2.1 发病情况 发酵培养基、普通肉汤、M- R、V- P、靛基质 、硝酸 某鹅场有不同日龄的雏鹅及青年鹅 1.2 万只。 盐利用试验、柠檬酸盐利用试验等培养基，按文献 青年鹅首先发病，随后雏鹅开始发病，其余3 批随 〔1〕方法制作。后也发病，发病数随时间呈递增状态1 ，周时间共 1.3 主要试剂死亡 1 100 只鹅。发病鹅表现为精神不振，羽毛蓬 M- R、V- P、靛基质、氧化酶、接触酶、硝酸盐还 乱，缩颈，闭目呆立，排黄白色稀粪，粪便玷污肛门 原试验应用试剂以及革兰氏染色液、美蓝染色液 周围羽毛。食欲减少或废绝，饮水增多。部分雏鹅 等，均按文献〔2〕方法配制。 可见结膜发炎，眼睑肿胀、流泪，有的上下眼睑粘 1.4 试验动物连，严重者头部、眼睑、下颌部分出现波动感，尤以 20 日龄雏鹅购于西北农林科技大学畜牧站。下颌部明显。有的鹅当天死亡，有的发病后5 ,6 d 死 1.5 微量糖发酵管亡。产蛋母鹅表现精神沉郁，产蛋减少或停产，产软 微量糖发酵管由上海医学化验所试剂厂生 壳蛋，行动缓慢，常蹲伏于地，离群落后;病鹅肛门 产，批号 20060802。 周围玷污发臭的排泄物，排泄物中混有蛋清、凝固 的蛋白或卵黄小块;病鹅体温升高，食欲减少或废 绝，渴欲增加，呼吸困难，气喘，喜卧，站立不稳。 2.2 细菌分离 无菌采取病鹅的脾脏、肝脏、心血 收稿日期:2007- 12- 24和腹水于鲜 作者简介:周宏伟(1977 —)，女，助理兽医师，主要 血琼脂平板上划线分离3，7 ?有氧条件培养 24 h， 从事疫苗质量监督工作。 可疑菌落接种于普通肉汤，再划线于鲜血琼脂平 板上，挑取单个菌落经涂片、染色、镜检，证实为纯 生化试验结果表 1 培养物，将其接种于鲜血琼脂斜面上进行培养，得 麦 葡 M 菌乳蔗V 柠- 〔3〕 萄 芽 盐到纯培养物。 糖 糖 株 糖 糖 R P 试分离菌接种于普通琼脂平板、鲜血琼脂平板、 - + -- 1 麦康凯琼脂平板、三糖铁琼脂斜面、普通肉汤等培 注: 表示产酸产气。养基中，37 ?培养，并观察其生长表现。 血，有大量的溃疡灶，十二指肠和直肠出2.3 分离细菌形态观察及培养特性观察 取初次 重，盲肠扁桃体水肿、出血、坏死;泄殖分离及纯培养的细菌。涂片、染色、镜 血;大脑、小脑有时有充血、出血的变化 检、观察分离菌在不同培养基的生长情况及菌落 3.2 分离培养和镜检 情况。采集具有典型病变器官作为细菌分离材料。 无菌分别接种普通营养琼脂、麦康无菌取病料直接在麦康凯琼脂平板或伊红美蓝琼 琼脂培养基，37 ?培养，24 h 后观察，形 脂平板上划线培养，置 37 ? 恒温箱培养 24 h，在 面光滑湿润、边缘整齐、灰白色半透明的麦康凯琼脂平板上可生成亮红色菌落，菌落较大， 的菌落;鲜血培养基上有一种与上述菌表面光滑，边缘整齐。在伊红美蓝琼脂平板上生长 且呈 β溶血;在麦康凯琼脂平板上形成的菌落大多为呈特征性黑色闪光的较大菌落。每 光滑、湿润、边缘整齐的红色小菌落。在个病例都可从琼脂上挑取 3,5 个疑似菌落，分别 中生长呈均匀混浊，管底有絮状沉淀、振接种作纯培养，以供菌属确定。 状分散，液面有菌环。培养物涂片，经革2.4 生化试验 用分离菌纯培养物进行糖发酵试 镜检可见革兰氏阴性、中等大小的杆菌验、靛基质 圆，多单个存在。也有成双或聚集成团。试验、M- R 试验、V- P 试验、柠檬盐利用试验、硫化 无两极着色现象。氢产生、接触酶试验、氧化酶试验、硝酸盐还原试 3.3 生化鉴定 能分解葡萄糖、乳糖、麦〔4〕 验等。 芽糖，不产 2.5 增菌纯培养 对生化试验鉴定为大肠杆菌的 M- R 试验阳性，V- P 试验阴性，不液化 菌株，无菌接 分解尿素，不能利用柠檬酸盐。该菌在三〔5〕 种普通肉汤培养基培养，置37 ?温箱 20 h。 斜面上培养后，使其斜面、底部均变黄， 2.6 动物试验 产生(见表 1)。 15 只 20 日龄雏鹅随机分为 2 组。第 1 组 10 3.4 致病性试验 只，腹腔注射 0.2 mL /只 24 h 肉汤培养物(含菌量 雏鹅腹腔感染后 12 h 全部开始发病 10 1.5×10cfu /mL);第 2 组 5 只，为空白对照组，腹 腹泻症状;至 24 h 时，8 只死亡，剩余 2 腔注射 0.2 mL /只灭菌普通肉汤。注射后隔离饲 郁，48 h 后耐过恢复正常。对死亡的雏养，观察其发病及死亡情况，对死亡鹅立即解剖， 检，发现肠道出血，尤其十二指肠出血严无菌采取肝脏、脾脏病料涂片、革兰氏染色、镜检， 有黄色渗出物。空白对照组未见异常。将并在麦康凯琼脂平板上划线分离培养。 的肝和脾分别接种于营养肉汤、营养琼2.7 回归动物后分离菌株的生化试验 用接种菌 麦康凯培养基，37 ?培养 24 h，肉汤均变 液后死亡的雏鹅肝脏和脾脏中分离 凯培养基上均有红色菌落生长。〔6〕 的菌落作生化试验。4 试验结果分析 3 试验结果 根据临床症状、剖检病变、实验室检 3.1 剖检结果 结果，确诊为该鹅场暴发大肠杆菌病。鼻腔内有可挤出的黏液， 口腔中有黏稠的分 5 讨论 泌物;股内侧皮下出现点状或斑块状出血。喉头点 根据流行病学调查，剖检、观察病理状或块状出血、气管黏膜充血、气管环状出血，气 集病料进行实验室诊断，分离菌通过培管内有黄白色黏液;肺充血、淤血，气囊混浊，有 体形态、菌落形态、染色特性、生化试验 刘小飞，唐晓玲，阳素兰 (湖南环境生物职业技术学院，湖南衡阳421005) 桂牧一号是禾本科牧草中的优良品种，是广 摘要:研究刈割后施不同形态和用量的氮 西畜牧兽医研究所于1992 年采用杂交狼尾草 肥对桂牧一号杂交象草农艺性状和产草量 (Pennisetum americanum×Purpureum)为母本和矮 的影响。试验采用完全随机区组设计，根据 象草(P. purpureum cv.Mott)为父本进 行 有 性 杂 每次刈割后施氮肥不同而分为7 个处理。 交，经多年选育获得的新型杂交象草。该草具有 结果表明，同一施氮水平下，施碳铵有更利 很强的杂种优势，产量高，质量好，质地柔软，适 于株高和叶长的增长，施尿素有利于叶宽 口性好，适于饲喂牛、羊、鹅、兔、鱼等草食动物。 的增长，施碳铵和尿素之间分蘖数差异不 大;平均叶长随着施氮量的增加而下降;株 近几年来，在我国南方大面积推广利用，广西、广 高随着施氮量的增加而增加;分蘖数随着 东、湖南、江西等省、自治区种植面积约为3. 33 万 施氮量的增加呈现出先上升后下降的趋 2hm，已成为我国南方丘陵、湖区的主要多年生当 势;试验组鲜草和干草产量均比对照组有 家草种之一。但是，关于桂牧一号的产量和品质 所增加。 受外界环境影响的研究报道甚少，特别是在我国 关键词:桂牧一号杂交象草;尿素;碳铵;农艺性状; 南方的土壤、气候条件下应如何施氮肥尚未报 产草量道。因此，笔者研究了不同氮肥种类及水平对桂 中图分类号:Q949.714.2 文献标识码:A 文章顺序编号:1672- 5190(2008)03- 0034- 04 牧一号产量和农艺性状的影响，以期找准氮肥种 类，实现减少肥料用量，提高肥料利用率，稳定牧 草产量，改善牧草品质，提高种草的经济效益，形 收稿日期:2008- 01- 21 基金项目:湖南环境生物职业技术学院院长基金 成一个科学、经济、易被广大农民接受的施肥模(YJ07- 05)。 式，对指导湖南省乃至整个亚热带红黄壤地区桂 作者简介:刘小飞(1981 —)，女，在读硕士研究生， 牧一号杂交象草生产，提高种草的科技含量，具有 主要研究方向为牧草的研究与开发。 特别重要的意义。 ############################################ 〔3〕 廖延雄. 兽医微生物实验诊断手册〔M〕.北京:中国农20 日龄雏鹅腹腔感染发病死亡，出现与自然病例 业大学出版社，1995. 81- 114. 〔7〕相似的临床症状和病理变化，这表明大肠杆菌感 朱明，等. J.盐城地区鹅大肠杆菌的分离与鉴定〔〕中 〔4〕 染鹅和雏鹅，其致病性强，病程短，死亡快。 2003，(2):24- 25. 韩文瑜，何昭阳，刘玉国兽医杂志， . 病原细菌学检查技术〔M〕. 长春:吉林科技出版斌参考文献: 〔5〕 1998.23- 24. 社，〔1〕 陈一兵，刘建凤，印继华，等. 鹅感染多杀性巴氏杆菌 曹澎泽，郭玉瑛. 兽医微生物学及免疫学技术〔M〕. J〕.动物医学，2004，(8):54- 和大肠杆菌的分离鉴定〔北京:北京农业大学出版社，1992.1- 53. 黄缨，范根〔6〕 56. . 鸡大肠杆菌病的特征及防制〔J〕.动物 成 〔2〕 李健强，李六金. 兽医微生物学实验实习指导〔M〕. 西 〔7〕 安: 陕西科学技术出版社，1999.44- 48. ? 科学与动物医学，2002，19(5):52.