甲胎蛋白(AFP)

甲胎蛋白(AFP) AFP 甲胎蛋白(AFP) 酶免疫定量试剂盒 96人份 一、临床应用简介 三、自备材料 本试剂盒用于人血清AFP浓度值的定量检测。 1(精密吸管:0.02，0.05，0.10，0.15，0.20和1.0mL; 阿尔法-甲胎蛋白(AFP)为一糖蛋白，分子量约2(一次性吸管吸头; 为70000道尔顿。AFP一般在胎儿期和新生儿发育3(蒸馏水; 期由肝、卵黄囊产生。消化道也产生微量的AFP。4(涡旋混合器或等同物; 出生之后，AFP浓度迅速下降。其后，最迟在第二5(吸水纸或纸巾; 年，一般的在血清中仅检测到微量血清AFP。血清6(坐标纸; AFP升高到异常高的值的情况发生在几个恶性疾病7(酶标仪。 中，最值得注意的是非精原细胞睾丸癌和初级肝细 胞癌。在非精原细胞睾丸癌中，已观察到在AFP升四、样品的采集和制备 高的血清水平的影响范围和该病的发展阶段之间的 按规定的医学技术从获得的全血样品中制直接关系。也观察到患有非精原细胞精原细胞癌的备血清，此试剂盒仅使用血清样品，且无任何添加患者。但是单纯性精原细胞瘤患者的AFP不升高。 剂。 另外，在患有其他非癌疾病的患者中，也检测 到血清AFP浓度的升高。这些疾病包括:Ataxia毛五、试剂盒的保存和仪器 细管扩张，遗传性高酪氨酸血，新生儿高胆红素血，未启封的试剂盒须保存在2~8?的环境下;微急性病毒性肝炎，慢性活动性肝炎，肝硬变。血清孔板存放在有干燥剂的密封袋里，以尽量减少其在AFP浓度升高也见于孕妇。因此，不推荐把AFP筛潮湿空气中的暴露;已启封的试剂盒在上述保存条查作为一般人群的肿瘤检测。 件下，在有效期内可保持稳定。用酶标仪在450nm 处测定吸收值时，要求谱宽?10nm，光密度值O.D.二、试剂盒的组成 在0~2间或更大些。 1(兔抗AFP包被的微孔板:96孔，1块; 2(零缓冲液:1瓶，13mL; 六、试剂准备 3(冻干参照品:1套(0，20，50，150，500和1(检测前使所有试剂达到室温(18~25?，下同)。 1000ng/mL); 2(用0.5mL蒸馏水溶解每个冻干的标准品(至少需4(酶联试剂:13 mL; 20分钟)并轻轻混合。已溶解的标准品须在2~8?5(TMB试剂(一步):1lmL; 下密封保存。 6(终止液(1N HGL):1lmL。 七、检测步骤 第1页 共4页 AFP 1(把所需数量的微孔固定在支架上。 示的AFP浓度值得出典型的标准曲线。此标准曲线2(分别吸取10µL标准品、样品和稀释对照品加入仅用于说明，不能用于计算未知样品。每个使用者相应微孔。 应根据自己的数据制作标准曲线。 3(将100µL零缓冲液分别加入到每个微孔中。 AFP(ng/mL) Absorbance(450nm) 4(充分混合30秒钟(此步充分混合至关重要)。 0 0.059 5(室温温育30分钟。 20 0.256 6(翻转微孔架，弃掉温育混合物。 50 0.544 7(用蒸馏水或去离子水冲洗微孔5次。 150 1.238 8(在吸水纸或纸巾上扣击微孔板以完全除去微孔中500 2.389 残余的水滴。 49(向每个微孔中分别加入100µL的酶联试剂，轻轻 3混合5秒钟。 210(室温温育30分钟。 111(翻转微孔架，弃掉温育混合物。 12(用蒸馏水冲洗微孔5次(请勿使用自来水)。 0Absorbance (450 nm)05001000150013(在吸水纸上扣击微孔板以除去残余的水滴。 Conc. of AFP (ng/ml)14(向每个微孔中分别加入100µL的TMB试剂， 轻轻混合5秒钟。 1000 2.906 15(室温温育20分钟。 16(向每个微孔加入100µL终止液(1N HCL)终止反十、期望值和灵敏度 应。 在高危患者血清中，用本试剂盒所测得的AFP17(轻轻混合30秒钟(此步对确保蓝色完全变成黄值在100~350ng/mL之间可诊断为肝细胞癌。其AFP色至关重要)。 水平超过350ng/mg，通常明已患病。大约97,的18(在15分钟内用酶标仪在450m处读出光密度值。 健康受试者AFP水平低于8.5ng/mL。本试剂盒可检 测的AFP的最小浓度为2.0ng/mL。 八、结果计算 1(计算出每个参照标准品、样品、对照品和患者样十一、检测步骤的限制性因素 品的平均吸收值(A450)。 1(进行检测步骤时，必须完全读懂说明书，并遵循2(以每个参照标准品的平均吸收值作纵轴(Y)，浓规范的实验操作(GLP)才能获得可靠和重现性的度值(ng/mL)作横轴(X)在坐标纸上绘制出标准曲结果。 线。 2(冲洗步骤很关键。冲洗不充分将导致精确度误差3(根据每个样品的平均吸收值，在标准曲线上找出及吸收值错误地升高。 相应的AFP浓度值(ng/mL)。 3(对医生而言，本试剂盒所获得的结果仅作为用其 他诊断方法所获得的有效信息的辅助。 九、标准曲线实例 注册证号:国食药监械(进)字2006第3401374号 在450nm处以Y轴上显示的吸收值，X轴上显 产品标准号:YZB/USA 0612-2006 第2页 共4页 AFP 生产厂商:美国BC公司 第3页 共4页 AFP 第4页 共4页