细胞DNA倍体分析评价251例宫颈病变的临床研究

细胞DNA倍体分析评价251例宫颈病变的临床研究 细胞DNA倍体分析评价251例宫颈病变的 临床研究 第40卷第3期第337页 2011年6月 华中科技大学(医学版) ActaMedUnivSciTechnolHuazhong Vo1.40NO.3P.337 Jun.2O11 细胞DNA倍体分析评价251例 宫颈病变的临床研究 张黎,任杰林,姜姗,李莉 湖北省中山医院病理科,武汉430033 摘要:目的探讨细胞DNA倍体分析在宫颈病变诊断中的效果及与病理活检的差异.方法对251例患者采用病 理活检及细胞DNA倍体分析两种方法作出宫颈病变诊断,并进行对比分析结果病理活检诊断251例患者中CINI1 级及以下病变为212例,CIN?级以上病变为39例;细胞DNA倍体分析发现43例患者出现?3个DNA异倍体细胞,3O 例患者出现非整倍体细胞峰,以上两种情况有临床意义.若以出现?3个DNA异倍体细胞作为评估CINII级累及腺体 及以上病变的,其诊断性能评价指标较准确可靠,其敏感度为70.0,特异度为77.1,阳性预测值为31.5,阴性 预测值为94.3;若以出现非整倍体细胞峰作为诊断CIN11级累及腺体病变及以上宫颈上皮内瘤变为标准则与病理活 检相比无差异性.结论DNA倍体分析可作为病理活检确诊宫颈病变的参考指标,为DNA倍分析系统提供新的临 床资料. 关键词:细胞DNA倍体分析;活体组织检查;宫颈病变 中图分类号:R711.74DOI:10.3870/i.issn.1672—0741.2011.03.020 DNAPloidAnalysison251CasesofCervicalLesions ZhangLi,RenJielin,JiangShanetal DepartmentofPathology,ZhongshanHospitalofHubeiProvince,Wuhan430033,China AkstractObjectiveToexplorethediagnosticvalueofDNAimagecytometry(DNA— ICM)incervicallesionsandcompare thedifferencebetweenDNA— ICMandpathologicbiopsies.Methods251womenwithcervicallesionsinZhongshanhospital werealldiagnosedbyusingpathologicbiopsiesandDNA— ICMrespectively,andtwomethodswerecompared.Results39cases ofcervicalintraepithelialneoplasiaII(CINIIorover)outof251caseswerediagnosedbypathologicbiopsies.DNAploidanaly— sisdemonstratedthat43caseshad3ormorecellswithDNAgreaterthan5Cand30caseshadaneuploidcel1peak.Moreexact andreliablevaluescouldbeobtainedif3ormorecellswithDNAgreaterthan5CwereassessedtOdiagnoseCINIIoroverle— sions,andthesensitivity,specificity,positivepredictivevalueandnegativepredictivevaluewere7O.O,77.1,31.5%and 94.3,respectively.TherewasnosignificantdifferencebetweenDAN— ICMandbiopsiesifaneuploidcelIpeakwasusedas standardtOdiagnoseCINlIorover.ConclusionDNAploidanalysisservedasreferencefordiagnosingcervicallesionsbybiop— siesandalsoprovidedextremelyvaluabledataforDNA—ICMsystem. KeywordsDNAploidanalysis:biopsy;cervicallesions 宫颈癌是妇女较常见的恶性肿瘤之一,仅次于 乳腺癌口].通过对宫颈癌癌前病变的早期筛查可以 大大降低宫颈癌的发生率.对于宫颈癌的诊断目前 的金标准仍为病理活检,近年来国外将细胞DNA 倍体分析作为新的临床检测方法[2来进行宫颈癌癌 前评价.但DNA倍体分析方法与病理活检的差异 性如何文献报道不多,且DNA倍体分析的评价效 果国内报道较少,故本研究主要用DNA倍体分析 系统评估诊断宫颈上皮内瘤样病变的效果及与病理 活检这一金标准的差异,同时也提供了有价值的 DNA倍体分析临床资料. 张黎,女,1970年生,主治医师,E—mail:408050636@qq.com 1材料与方法 1.1临床资料 2010年3月至2010年8月,251名妇女在湖北 省中山医院进行宫颈癌癌前检查,并对其进行活检, 参与检查的妇女年龄介于22岁至56岁之间. 1.2方法 1.2.1取材妇科医师在阴道扩张器直视下,手持 宫颈刷柄,通过扩阴器,将宫颈刷刷头中央较长的刷 丝插入子宫颈管内(约8mlTl处),周边刷丝顶部抵 触在子宫颈黏膜面,顺时针或逆时针旋转3,5圈即 可,取出宫颈刷,用镊子夹紧刷头底座,拔脱刷头,将 刷尖向下垂直方向浸泡在样本收集管的固定液中, ? 338?华中科技大学(医学版)2011年6月第4O卷第3期 旋紧管盖,标记受检者姓名和样本号,送到细胞实验 室制片. 1.2.2制片及染色将装有固定液和刷头的标本 收集管,经化学和物理处理,制成薄层细胞学片,采 用Feulgen染色作DNA定量测定. 1.2.3细胞DNA定量分析所有Feulgen染色 片用AcCell全自动细胞图像分析系统进行扫描处 理].标准对照细胞为同张玻片上的100个正常 上皮细胞,所测出的平均吸光度(A)为2倍体细胞 的参考值,其变异系数(CV)值小于5.如果出现 以下3种情况就诊断异常:?出现5C(DNA指数> 2.5)非整倍细胞;?4C细胞数超过被测细胞总数的 1O;?出现非整倍体细胞峰.凡是有DNA指数 >2.5以上细胞的玻片,需要细胞技术员或细胞病 理医师核实,以排除AcCell系统的误读为癌细胞或 异常细胞. 1.2.4病理活检对每位患者宫颈可疑部位进行 4点以上的组织活检,活检标本由有经验的病理医 师作出病理诊断报告.病理诊断依次为正常,慢 性宫颈炎,湿疣病变,CIN工级,CINI一?级,CIN ?级累及腺体,CIN?一m级累及腺体,CINm级累 及腺体,宫颈原位癌累及腺体,宫颈鳞癌累及腺体 伴局部浸润. 1.2.5诊断试验评估分析以宫颈活检病理诊断 CINlI级累及腺体及以上为阳性标准,计算DNA倍 体分析系统诊断方法的敏感度,特异度,阳性预测 值,阴性预测值. 1.3统计学分析 应用SPSS17.0软件对数据进行统计学分析. 病理活检与DNA倍体分析的差异比较采用x.检 验,以P<0.05为差异有统计学意义. 2结果 2.1组织病理学活检 对25l例患者行组织活检.病理诊断报告慢性 宫颈炎136人,湿疣病变43人,CINI级33人,CIN I一?级6人,CIN1I级累及腺体13人,CIN1IlI级 累及腺体10人,CIN?级累及腺体6人,宫颈原位 癌累及腺体3人,宫颈鳞癌累及腺体伴局部浸润1 人.见表1. 2.2细胞DNA倍体分析 251例患者中,经AcCell系统发现97例 (38.6)正常,154例(61.4)异常.详见表1, DNA倍体分析系统分为正常和异常,异常包括?1 , 2个>5C细胞;?3个或3个以上>5C细胞,但 无非整倍体细胞峰出现;?有非整倍体细胞峰. 表1细胞DNA倍体分析与病理诊断结果 TablelResultsofDNAploidanalysisandpathologicaldiagnosis Chroniccervieitis Condylomalesions CINI C1NI一1I CIN1Iinvolvinggland CIN1I—U1involvinggland CIN?involvinggland Carcinomainsituinvolvinggland Cervixsquamouscellcarcinomainvolvinggland withloealinvasion 2.3诊断试验评估 若以1,2个DNA非整倍体细胞作为活检标 准,发现CIN?级累及腺体及以上病变的敏感度,特 异度,阳性预测值,阴性预测值分别为87.9, 42.7,18.8,95.9;发现CIN1]I级累及腺体及 以上病变的敏感度,特异度,阳性预测值,阴性预测 值分别为90.0%,39.8,5.8%,99.0.若以3 个及以上DNA非整倍体细胞作为活检标准,发现 CINlI级累及腺体及以上病变的敏感度,特异度,阳 性预测值,阴性预测值分别为70.0,77.1, 43OO1O 蝎娼6?63 张黎等.细胞DNA倍体分析评价251例宫颈病变的临床研究?339? 31.5,94.3;发现CINIll级累及腺体及以上病变 的敏感度,特异度,阳性预测值,阴性预测值分别为 70.0,72.6,9.6,98.3%.若以出现非整倍体 细胞峰作为活检标准,发现CIN?级累及腺体及以 上病变的敏感度,特异度,阳性预测值,阴性预测值 分别为48.5,93.6,53.3,92.3;发现CIN ?级累及腺体及以上病变的敏感度,特异度,阳性预 测值,阴性预测值分别为40.0,89.2%,13.3, 97.3.其中敏感度及阴性预测值最高的为以1, 2个DNA非整倍体细胞作为活检标准,而特异度及 阳性预测值最高的为以出现非整倍体细胞峰作为活 检标准. 2.4倍体分析与病理活检之间的关系 若以1,2个或3个及以上的DNA非整倍体 细胞作为诊断CIN11级累及腺体及以上宫颈上皮内 瘤变为标准,与病理活检相比差异具有统计学意义 (P<0.01),因此建议进行病理活检进一步确定. 但是若以出现非整倍体细胞峰作为诊断CIN?级累 及腺体及以上宫颈上皮内瘤变为标准,则与病理活 检相比差异无统计学意义(P>0.05),因此可以确 定宫颈癌变不需进行病理活检.若以DNA非整倍 体细胞作为诊断CIN?级累及腺体及以上宫颈上皮 内瘤变为标准,与病理活检相比差异有统计学意义 (P<0.01) 3讨论 目前,国内仍以宫颈常规细胞学检查作为宫颈 癌筛查诊断主要手段,而用DNA倍体分析系统对 宫颈癌及癌前病变进行诊断已经在国外使用[5],北 美,欧洲甚至将细胞DNA定量分析诊断方法作为 一 种常规的临床检测方法,通常采用细胞DNA定 量分析等临床筛选方法结合病理活检方法来诊断宫 颈癌[6].本研究对251例患者均采用细胞DNA定 量分析方法与病理活检两种方法检测.结果表明通 过DNA定量分析方法发现97例患者未见非整倍 体细胞,81例患者出现1,2个非整倍体细胞,43例 患者出现大于等于3个非整倍体细胞,而有3O例患 者出现非整倍体细胞峰;病理活检结果发现CINlI 级以下的患者有212例,CIN?级及以上患者有39 例,这表明病理活检金标准与DNA定量分析存在 一 定的差异,因此建议先结合DNA定量分析的筛 选再进行病理活检,势必可以更好地降低漏诊及误 诊率. 大量国内外文献报道,采用细胞DNA定量分 析无论从其诊断的灵敏度,特异度还是阳性,阴性预 测值都明显高于宫颈常规细胞学检查[7_8].孙小蓉 等_g曾报道以大于等于3个DNA异倍体细胞作为 评估CIN?级及以上病理改变的标准,其敏感度为 72.7,特异度为87.5,阳性预测值为90.9%,阴 性预测值为65.1.本研究对251例患者的细胞 DNA定量分析进行了诊断效果评价,结果表明若以 病理诊断CIN1I级累及腺体及以上为阳性标准,大 于等于3个DNA异倍体细胞的诊断敏感度为 70.0,特异度为77.1,出现非整倍体细胞峰的 诊断敏感度为48.5,特异度为93.6,其结果与 国内外的文献报告基本符合,以大于等于3个DNA 非整倍体细胞作为诊断CIN11级及以上的病理改变 有着较高的敏感度与特异度.此外,本研究还发现, 若以出现非整倍体细胞峰作为诊断CIN11级及以上 病变的标准,与病理活检相比,两种方法不存在统计 学上的差异(P>0.05).这表明对于CIN?级及以 上的病变,理论上可以通过细胞DNA定量分析直 接得出诊断无需进行病理活检. 那么非整倍体细胞峰的出现是否就表示为CIN ?级或者宫颈癌呢?本研究发现,当我们将出现非 整倍体细胞峰作为诊断CINIII级或宫颈癌病变的标 准与病理活检相比,却发现两者之间差异具有统计 学意义(P<0.01),无法将其诊断作为最后诊断,仍 需要通过病理活检来确定是否有癌变的发生.除此 之外,若以病理诊断CINIlI级累及腺体及以上为阳 性标准,大于等于3个DNA异倍体细胞的诊断敏 感度为70.0,特异度72.6,阳性预测值为 9.6,阴性预测值为98.3;出现非整倍体细胞峰 的诊断敏感度为40.0,特异度为89.2,显然与 诊断CIN11级及以上的病变相比在敏感度与特异度 都有所下降.这其中的因素很多,比如HPV感 染..等,因此在用DNA定量分析的同时要排除诸 多因素,并以病理活检作为确诊和临床制订治疗方 案的依据. 综上所述,本研究为细胞DNA倍体分析系统 提供了又一新的临床资料,并证实细胞DNA定量 分析对于诊断宫颈上皮内瘤变方面有比较高的敏感 度与特异度,有时甚至可以直接作为确诊标准之一, 同时为病理活检确诊宫颈病变提供了又一个参考依 据. 参考文献 [1]ScarinciIC,GarciaFA,KobetzE,eta1.Cervicalcancerpre— vention:newtoolsandoldbarriers[J].Cancer,2010,116 (11):2531—2542. (下转第342页) ? 342?华中科技大学(医学版)2011年6月第4O卷第3期 为子痫前期患者全身小动脉痉挛,而NSP在此基础 上合并低蛋白血症,高脂血症,胎儿血管粥样硬化, 易致胎盘早剥,组织水肿,胎儿因高脂,低蛋白血症, 胎盘低灌注的影响,出现生长受限及新生儿并发症 发生率高.本资料显示.肾病组围产儿FGR的发生 率及胎儿窘迫的发病率和病死率显着高于对照组. 3.5子痫前期型肾病综合征的治疗 NSP是在子痫前期基础上病情加重发生的,加 强产前检查,及早发现子痫前期并进行有效的综合 治疗对于预防NSP尤为重要.一旦确诊,应在解 痉,降压的基础上综合治疗,包括低盐低脂饮食,补 充蛋白质等,Magriples等已经证实,NSP肾脏呈 早期局灶性节段性肾小球硬化改变,激素治疗有效, 肾上腺皮质激素可抑制免疫反应,稳定细胞膜,减少 渗出,减轻水肿及蛋白尿,还可促进胎肺成熟,但使 用激素的类别及剂量掌握方面尚未有统一标准.有 资料表明],孕期大剂量,频繁使用糖皮质激素对胎 儿有远期影响,可能与儿童的问行为有关,如儿童 攻击/破坏行为,注意力分散,学习障碍和过度活跃 等,并导致儿童认知发育落后和远期的精神运动发 育延迟,因此妊娠期如何发挥激素对肾病综合征的 治疗作用有待进一步研究.利尿剂可进一步减少血 容量影响胎盘灌注,故应慎用.本组NSP患者多为 年龄较轻的初产妇(19,32岁),收缩压升高不明 显,临床表现以水肿,蛋白尿为主,不易引起患者本 人的重视,住院依从性差,多因胎儿窘迫,FGR,胎 死官内,大量腹水及子痫等终止妊娠,终止妊娠前的 平均住院治疗时间显着短于其他子痫前期患者. 目前对NSP尚无确实有效的治疗方法,病程越 长对母婴越不利,适时终止妊娠是治疗NSP的重要 手段.单纯尿蛋白增加不伴有血压升高和肾功能损 害且孕周尚早时,可暂不终止妊娠.但是对于发病 孕周早,病程长,经上述积极治疗后症状无明显改 善,甚至出现大量腹水,明显FGR者,或孕妇伴严重 合并症如心,肾功能衰竭,胎盘早剥等应及时终止妊 娠.终止妊娠的方式以剖宫产为宜.产后应继续监 测患者病情变化及肾功能,如持续蛋白尿或合并肾 功能不良,应转入内科继续治疗.但如何找到更加 客观的依据来决定终止妊娠的时机,还需要更大样 本,前瞻性,多指标分析,以期达到减少NSP患者妊 娠期并发症和降低围产儿发病率,死亡率的目的. 总之,子痫前期型肾病综合征病情重,进展快, 对母婴的影响大,早诊断,综合治疗和适时终止妊娠 是提高围产质量的重要措施. 参考文献 MagriplesU,LaiferS,HayslettJP.Dilutionalhyponatremia inpreeclampsiawithandwithoutnephroticsyndrome[J].Am JObstetGynecol,2001,184(2):231-232. 姚天一,要惠芬,王焕荣.妊娠期肾病综合征的诊治[J].中国 实用妇科与产科杂志,1993,9(5):277278. 叶任高,刘冠贤.临床肾脏病学[M].北京:人民卫生出版社, 1997:6770. AgabaEI.OdiliAN.Pre—eclampsiapresentingasnephrotic syndrome:acasereport[J].NigerJMed,2004,13(1):62—63. MedinaIJM,MedinaCN.Differencesandsimilaritiesof preeclampsiaandgestationalhypertension[J].GinecolOb— stetMex,2005,73(1):48—53. 乐杰.妇产科学[M].第7版.北京:人民卫生出版社,2008: 92—99. 叶任高,陆再英.内科学[M].第6版.北京:人民卫生出版 社,2004:508—509. WangYP,ScottWW,HecenHK.Placenta1lipidperoxides andthromboxaneareincreasedandprostacyclinisdecreased inwomenwithpre—eclampsia[J].AmJObstetGynecol, 1992,167(4):946949. CunninghamFG,LevenoKJ,BloomSI,eta1.Hypertensive disordersinpregnancy[M]//WilliamsObstetrics.22nd ed.NewYork:McGrawHillCompanicsInc,2005:761-808. 蔡卫平,朱蕴秋,闫丰,等.妊娠期肾病综合征的临床与病理 特点EJ].中华肾脏病杂志,2002,18(5):368—371. (2O】0—05—05收稿) (上接第339页) [23GroteHJ,NguyenHV,LeickAG,eta1.Identificationof progressivecervicalepithelialeellabnormalitiesusingDNA imagecytometry[J].Cancer,2004,102(6):373—379. 13iDoudkineA,MacaulayC,PoulinN,eta1.Nucleartextureme— asurementsinimagecytometry[J].Pathologiea,1995,87(3): 286—299. [4]PalcicB,GarnerDM,MacaulayCE,eta1.Oncometriesima gingcorporationandxillixtechnologiescorporation.Useof thecytosavantinquantitativecytology[J].ActaCytol,1996, 40(1):67--72. L5SinghM,MehrotraS,KalraN,eta1.CorrelationofDNApl— oidywithprogressionofcervicalcancer[J].JCancerEpidemi— ol,2008,2008:298495. L6jRemmerbachFW,WeidenbaehH,PomianskiN,eta1.Cyto— logicandDNAeytometricearlydiagnosisoforalcaneer[J]. AnalCellPathol,200l,22(4):211-221. L7jNguyenVQ,GroteHJ,PomjanskiN,eta1.Interobserverre producibilityofDNA—image—cytometryinASCUSorhigher cervicalcytology[J].Cell0ncol,2004,26(3):143—150. [8]童华,王祝鸣,申艳,等.细胞DNA倍体分析与常规细胞学 诊断对宫颈上皮内瘤变诊断评估的比较EJ].中华临床医师杂 志(电子版),2009,3(1):47—55. [9]孙小蓉,车东媛,涂洪章,等.细胞DNA倍体分析评估宫颈 上皮内瘤变[J].中华肿瘤杂志,2006,28(11):831835. L103DuensingS,DuensingA,CrumCP,eta1.Humanpapilloma— virustype16E7oncoprotein—inducedabnormalcentrosome synthesisisanearlyeventintheevolvingmalignantpheno type[J].CancerRes,2001,61(6):23562360. (2010l0—13收稿)