五指毛桃水提液体外抗菌作用的实验研究_135324

五指毛桃水提液体外抗菌作用的实验研究_135324 五指毛桃水提液体外抗菌作用的实验研究 [标签:来源] 作者:王晓平,段丽菊，陈晓白，李丽梅，陆奇丰，李鉴清 【摘要】 目的研究五指毛桃水提液体外抗菌作用，为其在临床的应用提供依据。制备五指毛桃水提液，采用圆滤纸片法测定其对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉、黄曲霉的抗菌效果;采用圆滤纸片-二倍连续稀释法测定其最低抑菌浓度。结果在一定的浓度下，五指毛桃水提液对大肠杆菌、枯草芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌均具有抑制作用，最低抑菌浓度均为1g /ml，而对黑曲霉、黄曲霉没有抑制作用。结论五指毛桃水提液对细菌具有较强的抑制作用，具有良好的开发前景。 【关键词】 五指毛桃; 体外抗菌; 最低抑菌浓度 五指毛桃Radix fici Hirtae为桑科植物粗叶榕Ficus hirta Vah1.的干燥根，又名“南芪”“五爪龙”“五指牛奶”“土北芪”[1]。五指毛桃味辛、甘，性平，具有健脾利湿、益肺止咳、舒筋通络的功效，在临床上主要用于治疗脾虚浮肿、食少无力、肝炎、风湿痹痛、肺痨咳嗽等症[2]。原植物分布在我国南部及西南部地区，因疗效独特而在华南地区较为广泛地应用。五指毛桃具有抗炎镇痛作用，在临床上用来治疗慢性盆腔炎、慢性支气管炎、肝炎、膀胱炎、肺结核等病[3，4]。但其药理研究报道较少，本文初次对其水提液的抗菌作用进行了研究，为其在临床的应用提供实验依据。 1 1.1 实验菌种金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus，枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis，大肠杆菌Escherichia coli，黑曲霉Aspergillus niger，黄曲霉Aspergillus flavus均由本系微生物与制药实验室提供。 1.2 试剂和仪器五指毛桃购于玉林市中药材市场。牛肉膏蛋白胨培养基，查氏培养基。细菌培养箱、低温离心机等。 2 方法 2.1 五指毛桃水提液的制备称取五指毛桃200g，加蒸馏水10倍，浸泡1h，加热煮沸后 文火煎煮2h，趁热滤取药液。药渣再加5倍水，煎煮1h后取滤液。2次滤液合并后，加热浓缩，药液浓缩至4g/ml。115?灭菌30 min，置4?冰箱保存备用[5]。 2.2 细菌悬液的制备将菌种分别接种到相应斜面培养基上，置于恒温箱中活化，细菌和霉菌的活化条件分别为28?下培养48h、37?下培养24h。经活化后的菌种用生理盐水稀释到106CFU/ml。 2.3 体外抗菌实验 2.3.1 抑菌圈的测定采用圆滤纸片法。取已灭菌的6 mm圆滤纸片，浸入五指毛桃水提液中浸泡2h后取出，放到无菌操作台中晾干。将5种菌悬液各取0.1 ml分别涂布于相应的培养基中，制成含菌平板。用灭菌镊子夹取圆滤纸片置于含菌平板面，每个平板放3片，各滤纸片的距离大致相等，纸片距平板边沿大于1 cm，用灭菌蒸馏水设阴性对照，每个菌种做3个平行。将平板置于恒温箱中培养(细菌37?下培养24 h，霉菌28?下培养48 h)。用游标卡尺测其抑菌直径，取3个平行的平均值[6]。 2.3.2 最低抑菌浓度的测定采用圆滤纸片-二倍连续稀释法。取五指毛桃水提液原液5ml，二倍递减浓度稀释,即将药液依次按1?2，1?4，1?8，1?16，1?32的比例进行稀释,最终药液的质量浓度依次为2，1，0.5，0.25，0.125 g/ml。取已灭菌的圆滤纸片分别浸入上述提取液中浸泡2h，置于无菌操作台晾干。其余操作同“2.3.1”项。以有抑菌圈的最低浓度为五指毛桃的最低抑菌浓度[7]。 3 结果 3.1 抑菌圈测定结果五指毛桃对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、黑曲霉和黄曲霉这5株菌种的抑菌圈直径测定结果见表1表1 五指毛桃水提液对5株菌种的抑菌圈直径mm由表1可知，五指毛桃水提液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌均有明显的抑制作用，而对黑曲霉、黄曲霉无抑制作用。 3.2 最低抑菌浓度的测定结果不同浓度五指毛桃水提液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的最低抑菌浓度测定结果见表2表2 五指毛桃水提液对3株菌种最低抑菌浓度的测定结果五指毛桃水提液浓度C/g?ml- 由表2可知，不同浓度五指毛桃水提液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的抑菌效果相似，最低抑菌浓度均为g /ml。 4 讨论 近年来，由于抗生素的不合理使用，临床耐药菌株不断增加，致使临床感染死亡率不断增高，减少耐药菌株的生成和研制新的抗菌药物已成为21世纪医学界的重要课。中药几千年来为中国人的健康作出了重大贡献，在现代预防和控制细菌性感染疾病方面也发挥了积极作用。由于中药的特殊性，细菌较少对中药产生耐药，而且中药具有来源广泛，费用低廉等优势。因此，研究和开发抗菌中药对解决耐药菌株的产生和抗生素短缺问题具有重要意义。 五指毛桃是华南地区常用的中药材之一，在民间和临床运用广泛。尤其是广东河源五指毛桃生产基地建立以后，以五指毛桃为原料的多种产品相继进入市场。本文对五指毛桃水提液进行体外抗菌实验研究，初步证明五指毛桃对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌 3种细菌有较强的抑制作用，其抑菌主要机理为:干扰细胞壁合成，损伤胞浆膜，影响细胞蛋白合成，影响核酸合成，干扰遗传密码复制等[8]。对五指毛桃化学成分的研究表明[9]，五指毛桃含有丰富的多糖、生物碱、香豆素等生物活性物质，具有抗菌、抗病毒、抑制肿瘤、抗凝、免疫调节、激素样作用和影响药物代谢等功效[4]。五指毛桃作为一种地道民族用药，在两广地区资源丰富，具有广阔的发展前景。 【参考文献】 [1] 温 玲,徐 刚,杨文豪,等.岭南草药五指毛桃研究概况[J].中药研究进展,2007,24(1):18. [2] 国家药典委员会.中国药典[S]. 北京:人民卫生出版社,1977:90. [3] 李红英.自拟五指毛桃液治疗慢性盆腔炎的疗效观察[J].现代医院,2005,5(5):49. [4] 董青松,欧 彪,陈乾平.五指毛桃研究进展[J].广西医学,2006,28(6): 950. [5] 蔡青圆,陈虎彪,赵中振,等.五指毛桃拮抗毒品可卡因的肝毒性作用及其活性成分研究[J].中国中药杂志,2007,32(12):1190. [6] 张 雁,李健雄,丘银清,等.苦瓜水提物抑菌作用的初步探讨[J].食品工业科技,2008,12(29):104. [7] 曲晓华,辛玉峰.银杏提取物抑菌效果的研究[J].黑龙江农业科学,2008, 31(1):25. [8] 李建志,刘旭红,杨丽珍,等.11种中草药抗菌作用实验研究[J].中医药信息,2009,26(3):82. [9] 刘春玲,魏 刚,何健雄,等.五指毛桃不同采收部位挥发油及醇提物成分的分析[J].广州中医药大学学报,2004,21(3):204.