乳酸脱氢酶催化活性浓度测定参考方法（可编辑）

乳酸脱氢酶催化活性浓度测定参考方法（可编辑） 乳酸脱氢酶催化活性浓度测定参考方法 ICS 11 020 C 50 卫 和 生 业 华人民共 国 行 中 Ws/T361-? ll 催 活 度测定 乳酸脱氢酶 化 性浓 参考方法 Reference procedure For the measurement of catalytic activity concentration of lactate dehydrogenase 2011-12-14 2012-06-o1发 布 实施 卫 中华人民共和国 生部 发布、 Vs/T 361-ˉ 2011 亠 刖 曰 照 GB/T1.1??09给 本标准按 出的规则起草。 JCTLM批 本标准修改采用由国际检验医学溯源联 委员 《 I「CC37? 合 会 准的 酶催化活性浓度测 级 3部 定原 参考方法 第 分 :乳酸脱氢酶催化浓度测定参考方法》 ,丿仁参 IsO15193:2009《 考 体外诊断 ?? ? ? 器具 生物源样品中量的测定 参考测定程 的 》 序 表述适当增加内容。 本标 由卫生 准 部临床检验标准专业委员会提出。 本标准起草位 :茼都医科大学附属北京朝阳医 。 院 本标准主要起草人 :贾慧敏、赵 弘、王 书 清涛、杨振华。、 Vs/T 361-ˉ2011 酸脱氢酶催 活 浓度测定参考方法 乳 化 性 1 范 围 ? DH催 规 了在临 医学应用中 ,测定乳酸脱氢酶 化活性浓度的参考方法。 本标准 定 床 ,作 ,也 活性 主要适用于参考实验室 为乳酸脱氢酶催化活性浓度测定的溯源 可作为与 酶催化 本标准 的 和试剂生产 业的溯源 ,可供有关认可单位及质量管理部门应用。 浓度检验有关 仪器 企 2 术语和缩略语 2.1 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1.1 原 始样本 primary mmpIe ,旨 对 统 出 最初从一个系统中取出的一个或几J个部分的集合物 在提供该系统的信息 或作为 该系 做 决定的基础。 、 ,此 统是 些系统的组成部分。 注:在 些 况下所提供的信息可以适用于一个较大的系统或一组系统 时取 样系 这 某 情 2.1.2 e 实验室样本 Iabc,ratory mmp【 。 送到实验室或实验室接收的川于测定的原始样本或原始样本的分样本 准各 2,1.3 样本 anaIyticaI sample 的、可从巾取出分析部分的样本。 ` 白实验室样本制备 ,分 之 析样本可经过各种处理。 注:在取出分析部分 前 2.1.4 /9,k anaIyticaI portion 彡卜+f音阝 析样本中取出的用于实际测定和观察的物质部分。 从分 注:如果不需预处理,分析部分亩接从原始样本或实验室样本中取出。某些怙 况下,需将分析部分溶解成分析溶液 冉上机测定。 2.1,5 分 析溶液 anaIyticaI solution 、液 或固 巾而制 的 液 ,溶解过程中可以有反应发生或无反应发生。 将分析部分溶解在气体 体 体 备 溶 21.6 某 一 物 系统的基质 matriXof a materiaI Wstem 质 一 之 的 。 个物质系统中除被分析物 外 所有成分 2,1.7 方法 reference procedure 参考 测 果所 的测定方法 ,适用丁评定由同类量的其他测定方 在校准或表征标准物质时为提供 定结 采用 法获得的被测定量值的测定止确度。ˉ Ws/T361ˉ 2011 2,1,8 g system 测 系 灵 度 变nsitivity of a measuri? 定 统的 敏 灵敏度 scnsitivity 以 测定系统的示值变化除 相应的被测定值变化所得的商。 注 1:测定系统的灵敏度可能与被测定的蚩值有关。 注2:所 必 考虑的被测定值的变化 须大于测定系统的分辨力。 2.1.9 彡卜lf卡手 anaIytical specificity 乒旮l? 测 法只测 可测 的 定方 定 定 量的能力。 2.1.10 分 析干扰 anaIyticaI interference 影 ,该 由一个 响量引起的系统测定误差 影响壁向身在测定系统中不产生 号 ,但 示 信 它会引起 值的增 高或降低。 2.1,11 口 最彡向量 莨 infIuence quantity 以 被测定 外的可影响测定结果的壁。 2.1.12 被测量 measurand 拟测定的量。 注 1:对 ,以 被测定的说明要求了解量的种类 及含有该址的现象、物体或物质状态的 述, 包 及 描 括有关成分 所涉及 n勺 。 化学实体 注2:在 VIM第二版和 IEC60θ 5ll s0θ 01中 .被 :? 测定定义为受到测定的量。 注3:测定包括测定系统和实施测定 ,它刂 ,使 的条件 能会改变研究屮的现象、物体或物质 被测定的坩町能不同于 。 定义的被测定。在这种情况卜适肖的修正楚必耍 ‘ 的 2.1.13 ? 检出限 detection mit,?mit of detection 定测 ,其 由给 定方法获得的测得值 声称的物质成分不存在的误判概率为 称物质成 在的误 分存 判概 α。 率为 `,声 lT论 1UPAC推 注 1:国际? α 和应用化学联合会 荐 和 的默认 为 0,05。 卩 值 注2:有时 写词 LD。 使用缩 “ ” “ "。 注3:不要用术语灵敏 示 度表 检出限 2.1.14 准品 caIibrator 校 校 测 用丁 准的 定标准。 2.2 缩略语 下 列缩略语适用于本文件。 lac1a1e clehydrogemse LDH:乳 酸脱氢酶 alanine aminotransferase ALT:丙 氨酸氨基转移酶 aspartate aminotra灬 AST:大 门冬氨酸 基 ferase 氨 转移酶 β -nic? NAD:氧 型 二 1inamide~adenine dinucle。 化 烟酰胺腺嘌呤 核苷酸 tide,oxidized forn1 β β -ni? NADH:还 二 原型 烟酰胺腺嘌呤 核苷酸 1inamide~adenine dinucleo1ide,reduced form β international federation of dinical chemistry and IFCC:国 际临床化学与检验医 联 学 合会 laboratorv medicine s1andard opera1ion procedure SP :标 准操作方法Ws/T361-ˉ2011 3 参考方法描述 3.1 测定原理和方法 ,生 丙酮 ,同 NAl还 NADH、反应式如下 : 本法采用乳酸脱氢酶催化乳酸 成 酸 时 原成 翌 L-+-孚 +N?D|竺 丙 +N?DH+H 1酸 酮酸 339nm下 ,监 NAD的 ,吸 LDH催 在 测 还原速率 光度的上升速率与 化活性浓度呈正比。 3.2 检查列表 3.2.1 试剂列表 所用试剂按表 l列出。 将 表 1 试剂列表 .缩 通用名称 略语 -D-葡 N-甲 胺 甲葡胺,MEG 基 萄糖 L+-乳酸 ,一锂盐 .氧 胺腺嘌呤二核苷酸 化型 ,游离酸 NAD游 离酉 炱 β烟酰 N?D钾 烟酰胺腺嘌呤二核苻酸,氧化型,二水合钾盐 盐 β 电 双 质量与 蒸水类似的高纯度水 导率 0.1mg? 2uS? cm l,pH6~7。 I'l 硅酸盐 或 同 批 的 考物质 JCTLM和 家 准 参 常规系统校准品 3,2.2 分光光度计和 助仪器列表 辅 分 点 pH计 2登 主要 器 光光度计和主要 助 器 式温度计、天平、 、 参考实验室应在表 记 测定仪 辅 仪 、 器 。 恒温水浴箱、稀释配液仪移液 等 表 2 分光光度计和辅助仪器 器 名 称 1i产 厂 家 | 型 仪 分光光度计 点式温度计 恒温水浴箱 配 稀释 液仪ˉ Ws/T361ˉ 2011 3.3 试 剂 3.3.1 试剂原料信息 按表 3详细填写试 原 细 。 剂 料详 信息 表 3 试剂原料详细信息 试剂系统名 通用名` 信 息 指 标 内 容 讠 s,C? ? RN注册号 生产厂家 货号/批弓 分子式 相对分子质量 纯瘦 如 特定合格要求 有 危险度 贮 存要求 失效期 LDH测 定所用每个试剂原料 细 格见 B。 详 信息表 附录 如怀疑一种化学药品含有不纯的 质影 物 响 ,应 了分析物的催化活忤 进行进一步的研究 ,例 ,比 不 厂 如 较 同 家和不同批号的产品。建议 川 对比 使 在 试验中已经鉴定或认町的试 。以 剂 下一种试剂需耍注意安伞 : 盐酸 :健康危害:接触其蒸 或烟 ,可 口 气 雾 引起急性中毒 ,出现眼结膜炎 ,鼻及 腔黏膜 烧 ,鼻 有 灼感 衄、齿龈出血 ,气管炎等。误服可引起 化道 消 灼伤、溃疡形成 ,有可能引起胃穿孔、腹膜炎 。眼和 等 皮肤 接触可致灼伤。慢性影响 :长期 触 ,引 接 起慢性鼻炎、慢性支气管炎、牙齿酸蚀症及皮肤 。 损害 操作人员 全 必 ,严 须经过专门培训 格遵守操 规 ,佩 作 程 戴自吸过滤式防毒面具 面罩,穿 胶耐酸 i戴 橡 碱服 橡胶耐 酸碱手套。远离易燃、可 物。 燃 3.3.2 试剂溶液 3.3,2,1 一般要求 制备溶液时各成分给出的质量是指 100%含 。 果 100%E例 y%],则 量 如 化学物质的含量低于 如 lAl子 应用 :F。mt"100/y,计算出与给出质 量相当的某化学物质的质量。 电 溶液的 制备应使用质量与双蒸水类似的高纯度 2us? cm l,pH6~7,硅 水 导率 酸 盐 l。 0.1mg? Lˉ 虑 包 2不 每次称重的扩展 确定度 括物质纯度的不确定度正 .应 1.5%。 态分布 ? 3,3,2.2 反应溶液 -D-葡 7.30gN-甲 称量 0.552g乳 基 糖胺、 酸一锂 ,将上 盐 述物质按以下步骤处理 : ?? 溶 80mI'水 在约 中 ; ?? 2m? l? Ll的 pH37? 用 盐酸调节 歪刂9.4; 4、 Vs/T 361-ˉ 2011 ?? 100mL容 转移至 量瓶中 ; ?? 量瓶和 至?? 将容 水平衡 ; ?? 20? 至 加水 容量瓶的刻度线。 -D-葡 最终配制的溶液中 N-甲基 浓 373,8mmol? Ll、 一 57.50mmol? L1 糖胺 度为 孚L酸 锂盐浓度为 ~8? 2? 该溶液 稳定忤为 1个月 。 3.3,2,3 起始试剂溶液 0.240g NAD游 称量 离酸及 0,558g NAD二 锂 ,将 以 水合 盐 ?述物质按 下步骤处理 : ?? 6mL水 溶于约 中 ; ?? 转 至 10mL容 瓶 移 量 ; ?? ?? 将容量瓶和水平衡至 ; ?? 2O? 加水 至刻度 。 线 最终配制的溶液中N`0游 酸 36.23mmd? LI、 N?D二 离 浓度为 水合锂盐浓度为 m。 78mmd.I'l。 ~8? 2? l月 该溶液 稳定性为 。 如 注 1:在 ,只 NAD游 ,不 配制起始试剂溶液时 用 离酸 川 N?D锂耠 IFCC30? 会 参考方法 适度地降低终反应混 pH值 合液的 。起始溶液含有NAD游 酸和NAD锂 pH值 离 盐的优点有:一是终反应混合液的 不会 低;二 降 NAD吸 pH值 .然 pH值 :白 是 光度的变化强烈依赖 而,由于 的变化丨 nF引起 吸 的 光度的变化并丨丨然发 :。 困 '丨 NAD游 此,如果 离酸被 为起 加人 碱 反 ,刃 4min~6min仍 作 始溶液 到 忤 应溶液巾 阝么试剂空白率在 为|线 r+。 如果起 反 NAD游 NAD钾 但 始 应溶液包含 离酸和 盐两种物质,将大大减小这种彩响. 到 注2:上述推荐的 N?D游离酸和 N?D锂盐棍合物 解相当缓慢。 10? 可 溶 升高温庋 加速溶解过程。 3.3.3 温度对 pH的 缓冲溶液 影响 37? 卩 ,调 pH值 pH电 当温度偏离 寸 节 的方法 :将温度计与 极 浸人 同时 混合液中。然后将溶液边 pH值 搅拌边滴定至表中列举在当前测定温度下的 。 校 、 pH的 ,搅 在 准控制和调节 过程中 拌速度耍一 pH电 极 致。 应位于被搅拌溶液的中心。 pH的 应考虑到在调节 滴定 ,温 过程中 度是可能改变的囚素。为此 ,接近靶 时应重新 , 值 控制温度,根 A调 pH靶 pH训 如果需要 据附录 辂 值。同样的方法也适用 于 的温度补偿调节。 配制反应 液时 ,需根 不 pH值 A来 pH值 溶 据 同温度调整 。参阅附录 调节溶液的 。 3.4 仪器 分光光度计及辅助 器主要 ,见 4。 仪 性能的要求 表 表 4 分光光 度计、辅助仪器主要性能的要求 仪器名称 性 ? 能指标 CC参考方法要 求 /nm 波长准确度 339? 1虍2 分光光度计、件 nm ? 带宽 ?2 `吧 光径/mm pH计 点式温度汁ˉ Ws/T361ˉ 2011 3,5 采样和样本 3,5,1 通则 的影 。 ,不白行采 ml,一般不需考虑分析前因素对样本特性 响 参考实验室主要接受外检样本 3.5,2 对收检样本的要求 联 ,见 5。 对不 样本收检要求的样本应及时与委托方 系。 官以 格肜式记录样本的详细信息 表 符合 表 5 LDH收 要求 表 检样本 内 容 要 指标 求 ?血l清 ? lll浆 ?贝他 可接受样本种类 ? 他 ? 干粉 ?液体 ?冰冻 其 町接受样本类型 冻 人血 ?牛血清 ?水?其他 皋质类型说明 ? 清 攴 样本最低数且 mL 每支 每支样本最低体积 加 允许添 物 ?干冰 ?常温 ?冰袋 ?其他 运 条件 输 ? ? zO? -70? ?共他 ?常温 ?4? ? ? 贮 条件 存 稳定性 危险性 注意事项 3.6 测定系统和分析部分的准备 3.6.1 测定系统的准备 度 准备 3,6.1.1 分光光 计 ,填 6。 S0P文 对 光光度计进行检查 写表 测定T作前 ,按已制定的 件 分 6 度 准备 表 分光光 计 具体内容 准备事项 ? 机?是否独 h开机 ? 源 ?接地 ?电脑 打印 电 不机前检查 ?比色 洁洁 ?比色窗洁洁 ?温度 ?湿度 ?机身洁洁 仓 开机 置 : ?与分光光度汁迕接完辂 ?提前 恒温装 爪 ?测 探头勿挤 、碰撞坚硬物体 测温装置 : ?电? 温 组合 ? 搅拌装置 : ?洁洁 转速 比色杯 : ?完整 ?清沽度 :? 预 光源灯 提前 热 项 开机注总节 匹 比色杯 :?光径 ?比色杯问 配 6、 Vs/T 361-ˉ2011 6续 表 准备节项 艮体内容 核实楚否在田家计量机构检定含格有效期内 每日开机性能检查 :?波长准确庋 ?波长雾复性 ? 丞线平商度扫描 仪器性能检查 ?带宽测试 ? 音测试 噪 大型实验 :? 前性能检查 氧化钬玻璃检查波长准确度 ?国家标准溶液检查吸光度准确度 分光光度计 :?无明显振动?及时待机 ?无线电十扰?UPS 预防性维护 辅助仪糌: ?更换进、出水竹 ?定期清沽 ?使用后清洁点温计探头、 搅拌装置 各实验室可根据具体情况制定本实验室分光光度计 流 图 准备 程 。 3.6.1.2 点式温度计准备 工 sP文 测定 作前 ,按已制定的 对 ,填 7。 件 点式温度计进行检查 写表 7 表 点式温度计准备 准 项 各事 具体内容 廾机前检杏 ?电源 ?机 清洁 ?点 温 头是 下 身 式 度计温度探 否 常 ?主机与点式温度计温度探头 接完整 迕 :?杳 电呈 看剩余电量 廾机注 项 意筝 校准捉示 :?合看校准有效期是否到期 核实娃否在国家计量机构检定 格效 内 合 期 仪器性能检查 大刷实验前性能检查 :? 母 格的 用计 合 标准温庋计检查温庋的准确性 主机 :?机身清沽 顶防性维护 温度探头 :?使用后及时 清沽 ? 证 、不 保 苴形 弯曲 可根 各实验室 据具体情况制定本实验室点式温度计准备流程图。 3.6.1.3 恒温水浴箱准备 测定 I?作前 ,按已 定的 SP文 8。 制 件对恒温水浴箱进行检查 ,填写表 8 表 恒温水浴箱测定系统的准 备 开机前检查 ?电源 ?温度 ?机 身清洁 ?与分光光度 连接 计 开机注意 项 ? 冂 冂 事 水上 ?进 水管 ?出 水符 仪器性能检杏 ?温度校正 ? 温度稳定性 口 ?定期更换进 水管 ?定 更 出口 期 换 水管 预防性维护 ?沽洗滤网 ? 水箱内部消毒Ws/T361-ˉ2011 可根 况 本实 室恒温 浴箱准备流程图。 各实验室 据具体情 制定 验 水 实 36,1.4 稀释配液仪准备 验室若有 SOP文 ,填 9。 测定工作前,按已制定的 件对稀释配液仪进行检查 写表 9 表 稀释配液仪测定系统的准各 准备事项 其体内容 廾机前检杳 ?电源 ?温度 ?湿度 ?机身清洁 冂 开机注意事项 ?注别器 ?移液 ?符路冲洗 仪器性能检查 ?加样量正确性 ?加样量精密度 顶防性维护 ?定期 换注射搽 ?定期 换移液符 各实验室可根据具体情况制定本实验室稀释配液仪准备流程图。 3.6.1.5 移液器准备 sOP文 10。 测定T作前 ,按已制定的 件对移液器进行检查 ,填写表 10 定系 表 移液器测 统的准备 应用前检查 ?温度 ?湿度?机身清洁?机械移动 加 度 仪器性能检查 ?加样量正确性 ? 样母精密 预防性维护 定期进行保养 ?定期校准 ? 各实验室可根据具体情况制定本实验室移液器准备流程图。 3,6,1.6 天平准备 SP文 11。 测定T作前 ,按已制定的 件对天平进行检查 ,填写表 表 11 天平准备 准备事项 | 具 体 内 容 不机前检查 电源?打印机?水平珠位置 |? 开机自检 ?电量?零位显示 定合格有效期内 孟 耻 %1罗 校准|箕 量愿窨昆曩召烬 每次应用前 :仪器白带校准 天 ? 源充足 不机注意事项 ? 使用前洁洁 平 电 各实验室可根据具体情况制定本实验室天平准备流程图。 36.1.7 pH计 准备 pH计 测 ? ,按已 的 sP文 对 进行检查,填写表 12。 定 作前 制定 件 8、 Vs/T 361-ˉ2011 12 pH计 表 准备 打印机 不机前检查 ?嚣 ?裒 |? 罨霪 营 彗清洁 pH计 探头:? 连 完整 温度 与 接 tj pH计 ? 的 ?外液的 电极:? 连接完整 内液 量 量 器: ? 源 ? 地 ?转速 磁力搅拌 电 接 ? ? 沽度 ?磁力 磁力搅拌 r: 完袼 清 : ? 鼓 ?有效期 PH标准溶液 剩余 每次应用前性能保证 : 和 活 仪器性能保证 更换电极内液 电极外液进行电极激 pH标 采用 准溶液进行校准 应用 :?更换电极内液和电极外液 :电极激活 前 应用后 :?更换电极内液和电极外液 :电极保芥 顸防性维护 ?清洁温度探头、电极 pH计 具 况 定本实验室 准备流程图。 各实验室可根据 体情 制 3.6.2 分 分的准备 析部 3.6.2.1 分 的类型 析样本 LDH参 方法测定样本主要有 : 考 ?? RM; 考物质 参 ?? 质控品 ; ?? 室间比对样本 ; ?? 测 验室送检样本 ; 检 实 ?? 其他样本。 3.6,2,2 分析系列的结构 样本按下列顺序排列 : 分析 ?? RM; 参考物质 ?? 品 质控 ; ?? ,如 :生 空白样本 理盐水 ; “ ” ?? 被 析的未知物质。 分 一 一 测 可 测 果不确定度。从 个样本到下 个样本的携带污染应小丁 上述样本重复 定 减小 定结 0.5%。 3.6.2.3 分析部分 LDH参 ,测 处理 均 的液状状态,分 考方法测定的样本多为冻T粉或深低温的冰冻样本 定前需 为 匀 对 测的 种 经过一 方法处理后 ,取出分析部分进行测定。 析部分应取白该液体样本。实验室需 待 各 样本 定Ws/T361-ˉ2011 sOP文 对每一类型实验室样本应制定详尽的样本处理 件 ,并有记录证实操作达到 预期要求。实验 2us? 电 ,应 cm l,pH6~7,硅 室样本若为冻干粉或干粉 使用质量与双蒸水类似的高纯度水 导率 酸 0,1mg? SOP义 盐 Ll溶解 ;若为冷冻液体如冰冻 ml清等 ,应按 件在严格控制的条件下 溶解。 应有处理参考物质的方法和记录。 测定过的样本有贮存待复查、销毁的文件和记录。 3.7 酶催化活性浓度测定 3,7.1 测定条件 13。 见表 表 13 LDH催 浓度测定 化活性 条件 参 数 指 标 ^ 37.0? 0.1? 温度 ? 339nn、 ? 1nn`? 波长 ?2nm 带宽 光径 10.00mm? 0,01m mn 180s 孵育时问 90s 延迟时间 180s 测定时闸 测 ? 彡 6 渎数 定点 虑 扩展不确定度 2 见 1 3.7.2 测定步骤 图 3.7.2.1 测比色 度 ,达 要 开 试剂和 液。 监 杯内温 到 求时 始准备 分析溶 ~ 约 3.7.2.2 一 0,4mL起 37? 2? 将 份适当体积 始试剂溶液在 下平衡 ,剩余的起始试剂应保存在 8?。 3,7.2,3 3.3.2中 14的 将 所列试剂体积按表 顺序加人到反应杯中。 LDH催 14 总 换 测定 分 系 反应 空 表 体转 率 的 析 统 化 速率和 白率 体 积 测 定 步 骤 反应液 n1L 2.00θ 37? 平衡至 样本 0 100mL 180s。 ,反 s7【 充分混合并孵育 在孵育结束时 应杯中的溶液温庋应达到 试 起始 剂溶液 0,200mL ,等 90s,监 180s的 充分混合 候 测另外 时闸和吸光lJt 汝 止 I比 2合 注:此动态光度测定的扩展 成不确定度 态分布不应超过 1%。 不 定度不 括波K调整的不确 确 包 乃 lH态 。 展 2合 不 应?1%【 定度 样本体积分数的扩 成 确定度 分布、 Vs/T 361-ˉ2011 监浏比色杯内温度 达37? 准备试剂和分析溶浓 ”育反应液试剂 达37? 比色杯内加入2.000mL反 应液 在 37? 0.100mL,充 混 加入分析潜液 分 匀 180s 孵育 37? 0,?O mL,充 混匀 加入启动试剂 分 等符90s 监 浏吸光度 180s 记录吸 度值 光 处理数据 洁比色杯 涫 1 LDH参考方法测定流程图 图 3.7,3 完全反应混和物的浓度 最终 15。 见表 全反应混合物的浓度 15 LDH催化活性浓度测定最终完 表 指 标 参 数 325mml? I' JV甲錾 D-葡糖胺 9,4θ ?0,05 pH37η C 50mmol? L I'+乳酸 l -NADˉ 10n1n、 ol? I'ˉ β 白 315mmol? L 由酸 β NAD? -N? 6,85mmol? I' D锂 盐 β 0 0/t3 51 : 23 样本容积分数 虍 2〉 扩展不确定度 空 测定 3,7.4 试剂 白率 .坝 37.2。 L1Na?l溶 样本 刂定方法同 ,用 9g? L115d mmol? 液代替 了测定试剂空白率 为 3.7.5 空 测定 样本 白率 .不 町 测定样本空白率。 由于样本中存在乳酸 能2011 、 Vs/T 361-ˉ 3.7.6 确认 结果 或 如 /校 ,应先测定 JCTLM和 品赋 、测定室问比对样本等 要测定前 给参考物质 准 值 在进行重 “ ” 正 性。 ? ,否则应确认建立方法的 确 ,测 果应在靶值 不确定度范围内 国家批准的参考物质 定结 P文 证 此 动。 有 s〉 件和记录 实 活 实验室应 理 3.8 测定结果处 理 结 计算及数据处 3.8.1 测定 果 3,8.1.1 计算 。 后即校正 去试剂空白率 最 变 减 二 计 吸光度随时间的改 Es lmin l]。 回 小 乘法 算 通过 归分析 1计 LDH催 活性浓度 : 算 化 变化率。按公式 后的样本吸光度 ????? ????????1 ? ? ru,H ” /? LpHF× 式中 : U? ukat? I' ; ?? I'l或 升 单位每 ,单 微凯塔尔每升 I'DH催 活性浓度 位为 诊 化 LL,「l ? morl; ? ,e"9NADH630m'? 3651在 长测定时 ,等 「 系数 丁 "9nm波 min|。 s l或 ? 秒 每分 变化率,单位为每 ? 校正后的样本吸光度 经过试剂空白率 A/Ar.nH? 处理 3.8.1.2 数据 则。 的数据剔除规 ,每 验室应建立适当 :必要时 个实 3.8.1.2.1 数据剔除 标 的标准偏差 分布类型 ,计算均值 ,必耍时应检查数据 的 、标准差 批次测定值 均值 3,8.1.2.2 计算每 。 准误 度。 测定纬果不确定 GUM和 则计算 根据 QUAM原 3.8.1.2.3 及换算关系 3.8.2 酶活性单位 nka? L l表 以 Ll或 ,日前常 丨丨 |现多位小数 uht? kat? Ll,使用时常 常用单位为 酶催化活性 1。 U? Lˉ 如下 : 用 换算关系 医 中仍习惯于使 示 ,但临床 学 /0。 L lc 01667转化成 以 浓度可通过乘 系数 ukat? 以 U? Ll单位表示的催化 3.9 分 可靠性 析 及其应用 3.9.1 概念、价值 文献及 可靠性。相关 LDH参考方法的分析 出限等来评估 密度、线性范围、检 应 据不确定度、精 依 常 规方法。适合于临床 于临床酶活性浓度常 方法的分析性能优 测定数据表明本参考 方法的实验室 参考 。 规 法的溯源 方 3.9.2 测定不确定度 不确定度 果的相对合成标准 。本参考方法测定结 测定不确定度 GUM和 则计算 应根据 QUAM原 1.5%。 L H寸宜小于 4.17ukat? Ll250U? 浓度 在 3.9.3 精密度 方法测定 、现性精密度。本参考 方法的重复性复 评估建立的参考 实验室测定条件 应根据本 l样 1.5%。 官 1,0%,实 现性精密度 小于 官 于 验室内复 Lˉ 本的重复性精密度 小 4.17‘火 kat? Ll250U? 12VVs/T361-ˉ2011 3.9.4检 出限 O.22ukat? L 13.3U? I'l。 出限为 号有关。本参考方法测定的最低检 分光光度计的最小分析信 与 3.9.5 线性范围 10.04`? Ll。 h卜 Ll602,4U? 线性范围 源 3.9.6 误差的来 As'I′ 试混 液中 AsT,必 要 虑 /AL'I′测 合 .如 ArI′或 须 考 LDH活 之 果在反应杯中测定过 测定 性 前 LDH的可能干扰。 确认 室间比对进行 3.10 通过实验 .经 认真评 IFCC提出 多个参考实验室 组织 医学国际权威学术 浓度参考方法由检验 I'DH催化活性 酶的参考方 ,公 r30?测定本 70年 ,I「CC经过 验和讨沦 布 ?世纪 代 实 准。甲在 估后经JCTLM批 30? 37?C的 2002年 了取代 的 37?、IFCC在 颁布 泛应用 ,鉴 生化分析仪广 ,并 于临床 于临床 法 应用 正式同际参考方法。 02年 准成为 。? 得到JCTLM批 LDH原级参考方法 历 项日之一。从 年 REI'?〕 酶列为比对 对 划? 中将本 03年 实验室能力比 计 M在? 的国际参考 JCTI冫 用。 方法适合预期临床使 ?5,25%内 ,可确认此参考 在均值 ,大 验室测定结果都 果看 多数参加实 比对结 应用的需要。 可达到临床医学特定 经过广泛确认 14个 。测定结 ,?09年 至 实验室 RELA比对 增 6个 此酶的 实验室参加 从 2006年开始有 中国 源。 规方法测定结果的溯 可 于我国临床常 证 此参考方法 用 果和国际一致。 实 区间 3,1l 参考 ? 17岁 的 考区间。 性 参 调查男性与女 初步 ” 90%可 区 限 信 间 性别 参考值上 Ll Ll~4,25ukat? Ll4.07ukat? 性 4.12ukat? 女 I'l Ll~4.22uka1? Ll4.05uka1? 男性 4,13ukat? D90%町 区 卜限 信 间 参考值 性别Ll Ll~255U? 7U? L1211U? 性 2亻 女 l~253U? Ll Lˉ Ll243U? 男性 248U? lx问尚在调查巾。 LDH催化活性浓度参考 注:巾冂 3.12 报告 不限 以下内容 : 测 结果报告格式 ,包括但 于 适官的 定 应 ?? 雨 他 ; mt清、浆或其 ?? 日 日期和测定 期 ; 取样 级 方法 ; ?? LDH催 活性浓度的原 参考 37?下测定 化 法 :IFCC在 测 所使用的参考方 定 ?? 和测定单位 : 、测定结果数字值 被测定的名称 贝 :LLH; 被氵刂定的名称 Ll或 U? Ll; :ukat? 测定单位 90%叫倍区问。 9T5的百分位点的 975的百分位点.括号内为第 上限指参照系的第 l 参考值ˉ Ws/T361ˉ 2011 ? ? 虑 不 定 :一般取 2; 评定测定结果的 确 度 ?? 特性记录 :如溶血、黄疸、乳糜等 ; 样本异常 ? ? 测 方法记录。 测定方法的异常情况或改变 定 3.13 量 证 质 保 3,13,1 室 量控制 内质 人正式测定。应建讧包括 工 日 正 测定样本前均测定质控品 ,当质控符合耍求后才进 每个 作 开始 式 sP文 。 、 步骤的室内质控 件及记录 质控规则操作 评价 3.13,2 室间质量控制 况 ,应认真查找 ,结 耍 。当出现不符合情 时 IFCC和 室能力比对 果应符合 求 定期参加 田内参考实验 市失 及失控跟踪记录。 原 lAl、建 控 日志 3,13.3 质量 录。 工 日 工 日志及环境控制的质量记 每个 作 完成 作 14Ws/T361-ˉ2011 录 A 附 规 范性附录 pH值 不 温度下反应溶液的 同 pH值 A,1 应 表 不同温度下反 溶液的 温度 温度 温度 pH pH pH ? ? ? 32.00 9.552 9,976 23,50 9.741 15.00 32.25 9.516 9.734 9 969 2s,75 9.509 9 728 32.50 9 962 24,00 327 9.503 24,25 9.721 9,955 9 197 9 71刂 3s 00 9.948 24 50 9 491 9~708 33 25 9~940 24.75 9 485 9. 9.933 25.00 16.50 9.479 9 695 33.75 9,926 9.472 s1.0θ 25,50 9.688 17.00 9.919 9.166 9.681 9.912 L7. 9.刂60 9.675 31.50 26.00 17.50 9.905 9.154 9.668 31.75 9.898 17.75 9 448 9.662 35.0θ 9.891 26,50 18.00 9.442 9.655 9,884 26.75 18.25 9 436 9.649 35 5θ 9.877 27.00 18.50 35.75 9.430 9.642 9.870 9 36.00 27.50 9.636 19.00 9~864 9 118 9.629 36 25 9.857 27.75 19.25 丨 6.30 9 112 28.00 9.623 19. 9.830 9 406 9 617 36.7s 9.843 28.25 94 9,610 9 836 28,50 20.00 ‘7 25 394 。 9.6θ 4 20.25 829 28.7弓 9 388 9.597 37.50 9.822 29,00 20.50 9.382 9,591 37 75 9,815 29,25 20 75 9,s76 9.585 21~00 9.809 29,50 9 9 802 9,578 21 25 9 365 9,572 38 50 9 795 30,00 21.50 9,359 9,566 38.75 9.788 30.25 21.75 9 353 9 559 39.00 22,00 9 781 30,50 9 547 3ll 50 9 3/l1 9 768 s1.00 22.50 9.5/lo s9~75 9 s35 9.761 s1 25 0,00 9 531 ? ?9,330 9 75/l 31,50 2s.00 31.75 9.528 23~25 9.748 15、 Vs/T 361-ˉ2011 录 B 附 资 料性附录 试剂原料详细信息表 表 B.1 试剂原料详细信息表 葡 ? 萄糖胺 通用名 甲葡胺 试剂系统名 N-甲基 容 信 息 指 标 6284-40-8 C?S,C?RN注册号 生产厂家 货号/批号 ′ C7Hli? 刂O^ 分子式 分子质壁 相刈 纯度 : ˉˉ J兰 女 ? 特定合格要求 有 ? ?-ˉ | 危险度 要 贮存 求 失效期 表 B.2 试剂详细内容表 +乳 ,一 酸锂肃 酸 锂盐 通用名 试剂系统名 Iˇ ~乳 内 容 标 信 息 指 I二二二 Γ?1二I二 ? 1二 二二 -? 丬 屦 镶 分子式 相对分子质量 纯庋 ?? ? ? ? ?? ˉ ? ?? ? ? 菔榀 耐 寸 ??? ?ˉ ???? ? ???ˉ ??? ???? ? ?????? ???? ??? ?ˉ ???????? +? 度| 危险 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ˉ ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? ? ? --? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? -ˉ -? ? ˉ? ? ? ? ? ? ? ? ˉ ? | 贮存要求| ????? ????? -???ˉ ? ?ˉˉˉ ?ˉ ? ? ?? ˉ?????? ˉ ? 效 失 期2011 、 Vs/T 361-ˉ 表 B,3 试剂详细内容表 -烟 二 酸 型 酰胺腺嘌呤 核苷酸,游离酸 通用名 NAD游 离 试剂系统名 氧化 β 内 容 信 息 指 标 53-84-9 CAS,CARN汨 :丿毋兮 生产厂家 号/批弓 货 C'1Hzf N7Θ ll Pz 分子式 相对分子质量 纯度 女 要 口有 特定合格 求 s24/25 危险度 贮 要求 存 失效期 B,4 试剂详细内容表 表 -烟 通用名 型 酰 皿 试剂系统名 氧化 β 胂 ` 容 内信 息 指 标 61417-72-7 C?S,CARN注 llI号 厂 生产 家 /批 货号 号 N7014Pz Li? 2H20 C?1H2“ 分子式 对分子质量 相 度 纯 如 特定合格要求 有 度 危险 要求 贮存 期 矢效 B.5 试剂详细内容表 表 名 盐酸 试剂系统 容 内标 信 息 指 7647-01-o CAS,CARN注册号 厂 生产 家 /批 货号 号 HCl 分子式 对分子质量 相 纯度 如 有 特定合格要求 危险度 贮存要求 失效期 17Ws/T361-ˉ2011 B。 6 表 试剂详细内容表 化钠 试剂系统名 氢 内 容 指标 信息 7617-11 C?S,C?RN注 册号 内容 佶息指标 厂 生产 家 号/批号 货 NaCl 分子式 58,14 棚对分子质量 纯度 如 要 有 特定合格 求 R36,R22,S24/25 危险度 要 贮存 求 失效期Ws/T361-2011 附 录 C 资 料性附录 LDH IFCC37? 考方法与 30?参考方法的比较 参 最 条 。 SOP源 IFCC参 ,该 方法为 LDH的催化活性浓度的测定提供了 佳 件 C,1 目前的 白 考方法 参考 留最适的测定条件。 37? 30? 为测定温度 ,只需对某些测定参数进行微小的改变即可保 由 取代 作 ,为 的 ,如果 30?参考方法比较时 提高测定 高标准 C。 2 附录巾列出了修改并对其进行解释。另外 与 C,1。 的 明是必要的。参见表 化而需要更准确 说 表 C.1 37?和 30?参考方法的比较 3θ?参考方法 37? IFCC参考方法 定样本 测 和质 温,的测定 参考方法主耍用于校准物 控 人 校准物质、标准品和 血清 不 定度 调节测定温度的 确 光 计 0.05? 调节和 温装置的高质世分光 度 :小 ? 带有温度 控 偏倚 于 2 ?0,l?C虑 不确定度 虍 2?θ,1? 的不确定度 :小于?0,1? 可使温度测定 不精密度 pH值调节的不确定度 pH?θ 05 特别耍求 Δ 无 延迟时闸 ,试 空白速率仍有 加人初始试剂溶液后 刹 非线性 测定时问 着时问 是非线性的,并J非线性部分随 反应速率 ,缩 LDH催 成比例的增加 短测定时闸 和 化浓皮 少 线忤 意味右减 ‖ 注加体积及体积分数 规吸坩体系的体积‘冈此试剂溶 R 2700uL 采用适宜丁常 R 2000uL 溶液 溶液 样 n勺 积分数 本体积分数 液 n勺浓度应适合新的体 血清 150uL lllL清100uL 1:21到 1:23 300uL 变化从 200uL 起始反应液 起始反应液 试剂溶液 起始 改变反应混合物的 NAD游离酸作为起始试剃会 '": NAD游 NAD锂盐的水 离酸和 NAD游 NAD锉盐的混合物更稳 NAD游 。 离酸和 离酸水忤溶液 |pH值 猊含物 豇ξ 土 :些些望 缓冲储存溶液 0Kh准 液 液 不必 备缓冲储存溶 液 有缓冲储存溶 不制备缓冲储存溶 试 的温度 使用前起始 剂 要 起始溶液 起始试剂的温 未叙述 平衡 用底物启动:使用前 反 内的温度 用室湍的起始液会降低 应杯 |应 37?C。 温度 度应为 | | ~ ~~ ˉ ~ˉˉ Ws/T361ˉ 2011 表 C1续 ′ 30? 解释 37? I「CC参考方法 参考方法 数据采集 .渎 码 处理 统 数次 现代分光光度计使川数 数据 系 .不 6可以 证 足 确 再使 ?6 连续监测吸光皮的升高 数? 保 Jt测定结果 够的精 渎数次数 用迕续监测装昔 H寸 斜率的确定 问对吸光度 以 算的 需要 个明确的统计学方法 确保斜率计 归 方 无 最小平方差的回 分析 法 信息 可霓笈性 参考范 u丨 ^l ?412ukat 女忤和男性 男忤和女性 参考范围分别进行调查 蚕琉篮 楂 的 瓦 ? 2`15U? Ll |