血细胞分析仪

血细胞分析仪 深 圳 大 学 实 验 报 告 课程名称: 体外诊断仪器原理与实践 实验项目名称: 血细胞分析仪 学院: 医学院 专业: 医疗器械工程 指导教师: 报告人: 学号: 班级: 实验时间: 2014-05-09 实验报告提交时间: 教务部制 实验目的与要求, 1. 介绍血细胞分析仪的计数原理、血红蛋白浓度测定原理。 2. 血细胞分析仪的测试流程。 3.简单分析血细胞分析仪检测报告中白细胞、红细胞、血小板以及白细胞分类的意义。 方法、步骤: 实验仪器: 三分类血细胞分析仪: 一、简要操作指南及注意事项 1、 开机前的准备 检查试剂是否足量，有无浑浊变质，试剂管道有无扭结，并倒空废液瓶 2、 开机 打开机器后部的开关，等待机器自动冲洗内部管路后，自动测量本底并出现计数界面 3、 本底检查 出现计数界面后，机器将自动测量的本底数值显示在屏幕上，本底结果要求: WBC?0.3 RBC?0.03 HGB?1 PLT?10 如果本底没有达到仪器的要求，仪器将会提示“本底异常”请执行清洗或维护程序 4、 全血测量 A. 在计数界面下，按[模式]键，将模式设置为“全血” B. 混匀抗凝血后，送到采样针下，让采样针插入抗凝血 C. 按开始键，开始对样本计数 二、三分类血细胞分析仪原理和主要结构及其参数意义: 所谓三分类 是把白细胞分成大中小,测量方法是基于库尔特原理. ?.计数原理--库尔特原理: 库尔特原理也叫电阻抗法 , 其主要原理是依据电解质溶液中悬浮颗粒在通过计数小孔时 , 引起电阻变化 , 在恒流电路中 , 电阻的变化引起电压的变化来进行细胞计数和体积测定的。 如图 1 所示, 将等渗电解质溶液稀释的细胞悬液倒入一个不导电的容器中, 再将镶有宝石小孔的管子插入到细胞悬液中, 在小孔管内侧充满稀释液,并在其内外各置一个电极。当细胞通过小孔时, 由于血细胞具有非传导性的性质, 因此, 将引起内、外电极间的电阻增加, 产生一个脉冲。若在两电极间加上一个恒流源, 则这个电阻的变化就转换成了电压的变化。脉冲变化的次数代血细胞通过小孔的个数, 其脉冲的高度表征细胞体积的大小。 综上可知: 不同脉冲波的大小表示细胞体积的不同. 不同脉冲波的数量即为细胞的个数 库尔特原理主要由测量杯、小孔管、内外电极等组成。其中 , 小孔管(主要是红宝石孔)下图 是整个测量系统的主要部分 , 它决定了血球分析仪的测量准确度。小孔越小(大概100μ米那样) , 测量准确度越高 , 但易造成堵孔 ; 小孔越大 ,测量准确度越低 , 但不易堵孔。目前市场上销售的利用电阻抗法设计的血球分析仪的竞争焦点就在于把小孔做得小而不易堵孔 ,为了实现细胞逐个通过可采用鞘流法,根据两侧鞘流的流速不同使细胞一个个的进入孔内从而不造成堵孔和细胞并排进入的误差的问(如下图): 其排堵方法大致有反冲法和电灼烧法两种 , 或二者兼而有之。测量系统得到的电平信号经放大、阈值调节、甄别、整形后进行计数 , 得到 RBC、WBC、PLT 的数量。但三者的计数原理又略有不同。白细胞计数时 , 机内微型计算机按体积大小将白细胞从 30,45fl 分为 256 个通道 , 每个通道为1164fl。根据细胞大小被分别放在不同的通道中得到白细胞体积的直方图 , 根据体积大小可分为不同的细胞群 , 第一群主要是淋巴细胞 , 第二群主要是单核细胞 , 第三群为粒细胞 , 这就是“三分群法”也就是常说的三分类。 红细胞计数原理同白细胞计数原理大致相同。在红细胞计数的同时 , 把各脉冲幅度相加 , 得到红细胞的总体积 , 经计算得到红细胞的平均体积。血红蛋白的测量通常用比色法得到。红细胞的平均体积 (MCV) , 红细胞平均血红蛋白含量 (MCH) , 平均血红蛋白浓度 (MCHC) , 红细胞体积分布宽度(RDW) 都是通过计算得来的。血小板计数时 , 微型计算机按体积分成 64 个通道 , 范围为 2,28fl 之间 , 血小板的平均体积(MPV) 是计算得来的 ?.血红蛋白测定原理--朗伯比尔定律. 在仪器的内部,当仪器把血液样本吸进来的时候会分成两个杯子(通道)。一个是测量红细胞和血小板的(因为红细胞和血小板的体积比较容易根据信号强度区分，白细胞造成的影响可以忽略因为红细胞的数量比较大)。另外一个杯子是测量血红蛋白和白细胞的，白细胞依然使用库尔特原理计数，而血红蛋白的测定我们知道红细胞通过溶血素可以使红细胞破裂释放血红蛋白出来，然后其与溶血剂结合形成血红蛋白衍生物 , 进入血红蛋白测试系统 , 在特定波长 (一般在 530,550nm) 下比色 ,吸光度的变化与液体中 Hb 含量成比例 ,仪器便可显示 Hb 浓度。不同系列的血液分析仪配套溶血剂配方不同 , 形成的血红蛋白衍生物也不同 , 但大多数的最大吸收光谱接近 540nm ，所以血红蛋白的含量用朗伯比尔定律可以将测得的吸光度换算成浓度。 A=KCL 其中A是吸光度无单位 K是摩尔吸光系数单位L/(MOL*CM) C是物质的浓度单位MOL/L L是 光径单位是CM 由于A可以测定 K已知 L已知从而可以计算出C。达到测量的目的。 左图是机器的内部局部结构图，核心的是在第二个管子，是吸取血液样本的，每次只能吸收15μL的样本，非常精确。右侧的管子是装清洗液用的以ML为单位，所以不需要非常精确。 ?(相关参数意义: 红细胞直方图，是反映红细胞大小或任何相当于红细胞颗粒分布图，正常呈光滑的正态曲线，其峰值即MCV值，细胞大小分布在25--175fl范围。峰左移，为小红细胞性贫血;峰右移，为大红细胞贫血。由于仪器还同时提供许多其他参数，所以可明显提高疾病诊断的准确性。 白细胞直方图，是一条有两个峰的光滑曲线，从左至右的分布分别为淋巴细胞，中间细胞,中性粒细胞，其分布范围相应为35-90fL, 160-400fL。但其他与淋巴、粒细胞相似的颗粒都可干扰白细胞直方图，在慢性淋巴细胞白血病、再障等淋巴细胞峰抬高，急慢性粒细胞白血病时粒细胞峰抬高，淋巴细胞峰降低甚至消失。 血小板直方图，是一条光滑的倾向左侧的偏态曲线。正常分布范围在2-25fL之间，与血小相当的其他颗粒也可在其范围出现。在慢性特发性血小板减少性紫殿时，血小板数量减少，巨大血小板增多，表现为曲线峰右移。 三、三分类血细胞分析仪耗材: 稀释液(内置电容传感器检测液面高度) 废弃罐(内置电容传感器检测液面高度) 溶血素(内置电容传感器检测液面高度) 清洗液(内置电容传感器检测液面高度) 同上，其他各种清洗液 四、实验过程 1.清洗血液探头，开机自检 2.采集血液 3.把机器设置为全血模式(蓝底) 4.把血液样本没过探头，然后按下蓝色的按钮 5.观察结果 6结果分析 从上述原理我们知道 纯测出来的数据只有WBC RBC PLT的数目和HB的浓度.其他数值都是计算的出来的结果.我们主要要看的也就是这四项,重点看白细胞,我自己的血液测得的结果如上图,表示全部都正常.后来我又再测了一次,还是正常,说明机器的重复性比较良好,其他同学测得有些是PLT偏高有些HB浓度偏高,可能因素也有很多不过并没有什么大碍,以下也列出了可能的原因. PLT偏高: 偏高的原因第一是前段时间有过出血，血小板参与止血，生成过多，此时还没恢复正常水平。如果是因为这个，那过些天就会恢复正常。第二就是与骨髓造血功能有关。第三是与激素有关，促血小板生成素分泌过多。 HB偏高: 饮水过少或出汗过多，排除水分过多可导致暂时性的血液浓缩，造成红细胞和血红蛋白轻度升高。 五、血细胞分析仪检测报告中白细胞、红细胞、血小板以及白细胞分类的意义 报告单中白细胞分类计数可以确定某些疾病，比如: 一、白细胞: 1.中性粒细胞:增多和减少的临床意义与白细胞计数相同 2.淋巴细胞:多见于病毒或细菌感染 3.嗜酸性粒细胞:增多见于变态反应，寄生虫病 4.嗜碱性粒细胞:增多见于慢性粒细胞性白血病、何杰金氏病、癌 转移、铅铋中毒、等。 5.单核细胞:增多见于某些细菌感染 二、红细胞和血红蛋白: ?增多 1(相对性增多:由于某些原因使血浆中水分丢失，血液浓缩，使红细胞和血红蛋白含量相对增多。如连续剧烈呕吐、大面积烧伤、严重腹泻、大量出汗等;另见于慢性肾上腺皮质功能减退、尿崩症、甲状腺功能亢进等。 2(绝对性增多:由各种原因引起血液中红细胞和血红蛋白绝对值增多，多与机体循环及组织缺氧、血中促红细胞生成素水平升高、骨髓加速释放红细胞有关。 (1)生理性增多:见于高原居民、胎儿和新生儿、剧烈劳动、恐惧、冷水浴等。 (2)病理性增多:由于促红细胞生成素代偿性增多所致，见于严重的先天性及后天性心肺疾病和血管畸形，如法洛四联症、紫绀型先天性心脏病、阻塞性肺气肿、肺源性心脏病、肺动-静脉瘘以及携氧能力低的异常血红蛋白病等。 在另一些情况下，病人并无组织缺氧，促红细胞生医学教 育网 收集 整理成素的增多并非机体需要，红细胞和血红蛋白增多亦无代偿意义，见于某些肿瘤或肾脏疾病，如肾癌、肝细胞癌、肾胚胎瘤以及肾盂积水、多囊肾等。 ?减少: 1(生理性减少:3个月的婴儿至15岁以前的儿童，因生长发育迅速而致造 血原料相对不足，红细胞和血红蛋白可较正常人低10,,20,。妊娠中、后期由于孕妇血容量增加使血液稀释，老年人由于骨髓造血功能逐渐减低，均可导致红细胞和血红蛋白含量减少。 2(病理性减少: (1)红细胞生成减少所致的贫血: 1)骨髓造血功能衰竭:再生障碍性贫血、骨髓纤维化等伴发的贫血。 2)因造血物质缺乏或利用障碍引起的贫血:如缺铁性贫血、铁粒幼细胞性贫血、叶酸及维生素B12缺乏所致的巨幼细胞性贫血。 (2)因红细胞膜、酶遗传性的缺陷或外来因素造成红细胞破坏过多导致的贫血，如遗传性球形红细胞增多症、地中海性贫血、阵发性睡眠性血红蛋白尿、异常血红蛋白病、免疫性溶血性贫血、心脏体外循环的大手术及一些化学、生物因素等引起的溶血性贫血。 (3)失血:急性失血或消化道溃疡、钧虫病等慢性失血所致的贫血。 三、血小板 (一)生理性增高或降低 1.剧烈运动后血小板增高，饱餐后也有增高，冬季略增高。 2.妇女月经前血小板降低。 3.少年较成年人血小板偏低。 4.新生儿血小板数目较少，到3个月后至成人水平。 5.静脉血血小板略高于外周血。 (二)病理性 ?减少: (1)骨髓造血功能受损而导致血小板生成减少，如再生障碍性贫血、急性白血病、放射病、抗癌药的应用等。 (2)血小板破坏过多而致的血小板减少，如特发性血小板减少性紫癜、脾亢、体外循环等。 (3)血小板消耗过多而致的血小板减少，如弥散性血管内凝血(DIC)、血栓性血小板减少性紫癜。 (4)家族性血小板减少，如巨大血小板综合征。 ?增多: (1)组织受损及术后特别是脾切除后血小板可增高。 (2)血小板持续增高见于慢性粒细胞白血病、多发性骨髓瘤、血小板增多症、真性红细胞增多症、恶性肿瘤的早期。 (3)急性反应，如急性感染、急性失血、急性溶血等。 深圳大学学生实验报告用纸 实验结论: 1.血液细胞分析是目前临床检验中应用最多的检测项目之一。在库尔特原理发明之前 , 临床检验一直延用手工计数法。50 年代后期 , 世界上第一台血细胞分析仪问世后 , 使血液细胞检验实现自动化成为可能。目前 , 红细胞和血小板的检测原理主要是库尔特原理 ; 白细胞的分类方法主要有容量、电导、光散射法 (VCS 法) , 阻抗与射频技术联合法 , 光散射与细胞化学技术。 2.血细胞分析仪的参数只有WBC,RBC,PLT,HB是直接测定的，其他都是计算的出来的 3.本血液分析仪主要使用了库尔特原理和朗伯比尔定律 4.本机器内置了很多电磁阀，加大了机器的稳定性和精确性 5.在有液面的地方，都内置了电容传感器，当液面太低或者过高都会报警，提高了机器的安全性 4.本实验的过程非常简便，整个过程耗时非常短，但是由于还是属于半自动的，每次都要手去接触血液非常危险，而且是三分类的只能粗略的测白细胞进一步确定病症还需五分类的机器，由此可见国内的技术仍需要加强。 指导教师批阅意见: 成绩评定: 指导教师签字: 年 月 日 备注: 注:1、报告内的项目或内容设置，可根据实际情况加以调整和补充。 2、教师批改学生实验报告时间应在学生提交实验报告时间后10日内。