活络镇痛片中欧前胡素含量的测定

活络镇痛片中欧前胡素含量的测定 【关键词】 高效液相色谱,,,活络镇痛片,,,欧前胡素 摘要:目的建立活络镇痛片中欧前胡素的含量测定方法。方法 采用HPLC～ODSHypersil色谱柱 (4.6 mm×200 mm～5μm) , 乙腈? 水,45?55,为流动相,检测波长249 nm 。结果平均回收率为98.4%～ RSD = 2.53%。结论所建方法准确～可靠～可用于该药的质量控制。 关键词:高效液相色谱, 活络镇痛片, 欧前胡素 Determination of Imperatorin in Huoluo Zhentong Tablet by HPLC Abstract:ObjectiveTo establish an HPLC method for determination of imperatorin in Huoluo Zhentong Tabeles. MethodsODSHypersil column(4.6 mm×200 mm～5μm) was used; The mobile phase was acetonitrilewater(45:55),and detection wavelength was 249 nm. ResultsThe average rate of recovery was 98.4%～RSD= 2.53%.ConclusionThe method is accurate and reliable. It can be used for determination of imperatorin in Huoluo Zhentong Tablets. Key words:HPLC, Huoluo zhentong Tablet, Imperatorin 活络镇痛片是由天南星、红花、防风、白芷和当归组成的中药制剂,《中华人民共和国卫生部药品标准・中成药制剂》,～具有舒筋活血～消淤止痛的功效～临床用于闪腰岔气～淤血作痛～筋骨疼痛～腰痛腿痛。《中国药典》,2005年版,中未记载活络镇痛片的质量控制标准。欧前胡素为方中白芷所含的有效成分～对欧前胡素的测定方法曾有报道,1~3,～但尚未有对活络镇痛片中欧前胡素的含量测定方法。为控制活络镇痛片的质量～本实验建立测定其中欧前胡素含量的高效液相色谱法。 1 仪器与试药 美国惠普 1100高效液相色谱仪:真空脱气机,G1322A,～四元泵,G1311A,～自动进样器,G1313A,～紫外-可见光检测器,G1314A,,HP1100色谱工作站。欧前胡素对照品,上海友思生物技术有限公司提供～批号:040412,,活络镇痛片,延边大学医院药剂科自制～批号:040425～040504～040526,,乙腈,色谱纯,,其他试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱: ODSHypersil (4.6 mm×200 mm～5μm) , 流动相?乙腈?水,45?55,,流速:0.8 ml・min1 , 检测波长:249 nm ,柱温:20?,进样量:5μl。 2.2 溶液的制备对照品溶液 精密称取欧前胡素对照品适量～加甲醇制成每毫升中含0.5 mg的溶液～即得。供试品溶液 取活络镇痛片数片～研细～精密称取0.1 g～加氯仿超声提取30 min～水浴挥干～残渣加甲醇溶解并定容于10 ml容量瓶中～摇匀～0.45μm微孔滤膜过滤～即得。 2.3 阴性对照品溶液的制备及测定为考察实验设计及测定方法的可行性～按制备工艺制成缺白芷的阴性对照品～再按供试品溶液的制备方法项下制成阴性对照品溶液。按上述方法测定～结果明阴性对照品的色谱图在欧前胡素相应的保留时间附近几乎无干扰峰。结果见图1。 图1 阴性对照色谱图(略) 2.4 线性关系考察取欧前胡素对照品溶液,0.5 mg・ml1 ,～加甲醇稀释成50.0～25.0～12.5～6.25～3.125～1.563 mg・ml1 溶液～注入高效液相色谱仪～以进样量,mg, 为横坐标～峰面积积分值为纵坐标绘制工作曲线～经回归分析～得回归方程为Y = 57 243 X - 1.330 6～r= 0.999 8。 2.5 精密度实验精密吸取供试品溶液～重复进样5次～5μl・次1, 以欧前胡素峰面积积分值为指标～测定其精密度～计算其平均值为175.118～RSD为0.74%～说明本实验用仪器精密度良好。 2.6 重现性实验精密称取同一批号(040425)供试品溶液5 份～按供试品溶液项下制备～依法测定～计算样品含量～以考察本法的重现性～结果欧前胡素含量分别为0.233～0.231～0.226～0.239和0.224 mg・g1,平均含量为0.237 mg・g1～RSD为2.50%,提示本实验重现性良好。 2.7 稳定性实验精密吸取同一批号供试品溶液～每隔1 h注入液相色谱仪各5 μl～依法于0,1～2～3～4 h分别测定1次～观察其稳定性～结果欧前胡素在4h内稳定性良好～RSD为0.851%。 2.8 加样回收率实验精密称取已知含量,0.230 mg・g1,的样品共5份～分别精密加入对照品0.01 mg～依法测定～每份测定2次～计算平均回收率为98.4%～RSD为2.53%。 2.9 样品含量测定 取3批样品～依法制备供试品溶液～每批2份～分别进样5 μl～测定峰面积～计算5批样品的含量。结果见表1。 3 讨论 3.1 测定波长的选择 取欧前胡素对照品适量～加甲醇制成每毫升中含0.5 mg的溶液～于紫外可见分光光度计在200~500 nm波长范围内进行扫描～结果在249 nm波长处有最大吸收～故选定检测波长为249 nm。 表1 3批样品中欧前胡素的含量测定结果,略, 3.2 提取方法的考察 (方法1)曾采用加醋酸乙酯超声提取30 min～水浴挥干～残渣加甲醇溶解的方法提取～结果以加氯仿超声提取30 min～水浴挥干～残渣加甲醇溶解,方法2,提取时欧前胡素含量较高～重复性好～此方法提取的更为充分～故作为本文的提取方法。 3.3 系统适用性实验的考察 依上述方法～测得欧前胡素对照品、供试品色谱图。结果见图2~3～计算其理论塔板数n为7 650。 图2 对照品色谱图(略) 图3 样品色谱图(略) 本实验采用高效液相色谱法对活络镇痛片中欧前胡素的含量进行测定～通过对仪器精密度、样品溶液的稳定性等进行考察～证明所建立的实验方法高效、快速、稳定、灵敏～可作为活络镇痛片质量控制的有效方法。应注意的是～欧前胡素遇光不稳定～在操作过程中应注意避光。本实验所建方法准确～可靠～可用于该制剂中欧前胡素的质量控制。 参考文献: ,1, 温莉萍～王秀兰～郜 宁.HPLC测定通窍鼻炎胶囊中欧前胡素的含量,J,.华西药学杂志～2003～18,1,:65. ,2, 马 开～秦文杰.HPLC测定痛可宁胶囊中欧前胡素和异欧前胡素含量,J,.中成药～2003～25,10,:801. ,3, 朱央央～余伯阳.RP-HPLC测定元胡止痛方中延胡索乙素和欧前胡素的含量,J,.中成药～2004～26,6,:455.