人弥漫大B细胞淋巴瘤阿霉素耐药细胞

人弥漫大B细胞淋巴瘤阿霉素耐药细胞 ・３３２・，ｏ点ＮＡ品Ｆ品ＡＮ教。盔。。ｃ羔ｕ煮ｖＥ悉。ＴＹＪｏＵＲＮＡＬＯＦＧＵＡＮＧＸＩＭＥＤＩＣＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ２ⅢＭａｒ．ｓ４ｃ３，…。…～……７ 人弥漫大Ｂ细胞淋巴瘤阿霉素耐药细胞株的 建立及其生物学特性研究＊ 黄云，孙洁，柯晴，梁碧琦，谭晓虹，岑洪△ （广西医科大学附属肿瘤医院淋巴血液肿瘤科，南宁５３００２１） 摘要目的：建立人弥漫大Ｂ细胞淋巴瘤（ＤＬＢＣＬ）阿霉素（ＡＤＭ）耐药细胞株，为研究ＤＬＢＣＬ耐药机制提供模型。：以体外低浓度梯度递增法诱导筛选人ＤＬＢＣＬ耐ＡＤＭ细胞株Ｐｆｅｉｆｆｅｒ／ＡＤＭ。在显微镜下观察细胞形态变化，绘制生长曲线，计算倍增时间。ｃｃＩ（－８法检测Ｐｆｅｉｆｆｅｒ／ＡＤＭ对不同药物的耐药系数（ＲＩ）及脱药１个月后的耐药稳定性。在含补体的血清中，ＣＣＫ一８法比较两细胞株对利妥昔单抗（ＲＴＸ）介导的补体依赖性细胞毒性（ｃＤｃ）的差别，荧光定量ＰＣＲ（ｑＲＴ—ＰＣＲ）法检测两株细胞中多药耐药基因１（ＭＤＲｌ）ｍＲＮＡ相对达量。结果：经过约７个月的诱导，成功构建耐ＡＤＭ细胞株Ｐｆｅｉｆｆｅｒ／ＡＤＭ；显微镜下Ｐｆｅｉｆｆｅｒ和Ｐｆｅｉｆｆｅｒ／ＡＤＭ细胞形态无明显差别，亲代加药后死亡细胞更多，而耐药株生长依旧良好；Ｐｆｅｉｆｆｅｒ和Ｐｆｅｉｆｆｅｒ／ＡＤＭ的倍增时间分别为（３２．２８±１．１８）ｈ和（３１．４１±２．０３）ｈ，两者比较差异无统计学意义（Ｐ＞ｏ．０５）；通过ＣＣＫ一８法测得Ｐｆｅｉｆｆｅｒ／ＡＤＭ对ＡＤＭ、依托泊苷（ＶＰ＿１６）和长春新碱（ＶｃＲ）的耐药指数（ＲＩ）分别为１２．８７、１３．１８、１６．９５；脱药１个月和冻存复苏后，Ｐｆｅｉｆｆｅｒ／ＡＤＭ依旧能保持耐药性，其对ＡＤＭ的１ｃ。。值分别为ｏ．５２ｍｇ／Ｌ、ｏ．４９ｍｇ／Ｌ；两细胞株对于不同浓度的ＲＴｘ介导的ｃＤＣ效应无明显差别（Ｐ＞ｏ．０５）；Ｐｆｅｉｆｆｅｒ／ＡＤＭ细胞的ＭＤＲｌｍＲＮＡ相对表达量明显高于Ｐｆｅｉｆｆｅｒ细胞株（Ｐ＜Ｏ．０５）。结论：成功建立具有多药耐药性的ＤＬＢＣＬＰｆｅｉｆｆｅｒ／ＡＤＭ细胞株，化疗耐药的Ｐｆｅｉｆｆｅｒ／ＡＤＭ细胞与ＲＴＸ无交叉耐药性，该细胞是研究ＤＬＢＣＬ获得性耐药的机制和逆转耐药的理想模型。 关键词多药耐药；阿霉素；弥漫性大Ｂ细胞淋巴瘤；ＭＤＲｌ；利妥昔单抗 文献标志码：Ａ文章编号：ｌ００５—９３０Ｘ（２０１７）０３一０３３２一０６中图分类号：Ｒ７３３．４ ＤＯＩ：１０．１６１９０／ｉ．ｃｎｋｉ．４５—１２１１／ｒ．２０１７．０３．００３ Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆａｄｒｉａｍｙｃｉｎ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔｈｕｍａｎｄｉｆｆｕｓｅｌａｒｇｅＢ—ｃｅＵｌｙｍｐｈｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅｓａｎｄｓｔｕｄｙＯｎｉｔｓｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ＨｕａｎｇＹｕｎ，ＳｕｎＪｉｅ，ＫｅＱｉｎｇ，ＬｉａｎｇＢｉｑｉ，ＴａｎＸｉａｏｈｏｎｇ，ＣｅｎＨｏｎｇ．（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ０ｎ—ｃｏｌｏｇｙ，ＴｈｅＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＴｕｍｏｒＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＧｕａｎｇｘｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ５３００２１，Ｃｈｉｎａ） ＡｂｓｔｒａｃｔｏｂｊｅｃｔｉＶｅ：Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｄｒｉａｍｙｃｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔｈｕｍａｎｄｉｆｆｕｓｅ１ａｒｇｅＢ—ｃｅｌｌｌｙｍｐｈｏｍａ（ＤＬＢＣＬ）ｃｅｌｌ ｉｎｓｔｅｐｗｉｓｅｅｓｃａｌａｔｉｎｇｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆａｄｒｉａ—ｌｉｎｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＨｕｍａｎＤＬＢＣＬｃｅｌｌｓ（Ｐｆｅｉｆｆｅｒ）ｗｅｒｅｅｘｐｏｓｅｄ ｍｙｃｉｎｕｎｔｉｌｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｔｃｅｌｌ１ｉｎｅ（Ｐｆｅｉｆｆｅｒ／ＡＤＭ）ｗａｓｄｅｖｅｌｏｐｅｄ．ＴｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙａｎｄｃｅＵｄｏｕｂｌｉｎｇｔｉｍｅｏｆＰｆｅｉｆｆｅｒａｎｄＰｆｅｉｆｆｅｒ／ＡＤＭｃｅｌｌｓｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄｕｎｄｅｒｔｈｅｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．Ｔｈｅｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｆ０１ｄ，ｓｔａｂｉｌｉｔｙａｎｄｒｉｔｕｘｉｍａｂ（ＲＴＸ）一ｍｅｄｉａｔｅｄｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＣＣＫ一８ ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｌａｓｓａｙ．Ｔｈｅ（ＭＤＲｌ）ｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄ ７ｂｙｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｒｅａｌ—ｔｉｍｅＰＣＲ（ｑＲＴ—ａＰＣＲ）．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｐｆｅｉｆｆｅｒ／ＡＤＭｃｅｌｌ１ｉｎｅｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄａｆｔｅｒｍｏｎｔｈｓｏｆｉｎｄｕｃｔｉｏｎ．Ｉｎｍｅｄｉｕｍｃｏｎｔａｉｎｅｄ ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ，Ｐｆｅｉｆｆｅｒ／ＡＤＭｇｒｅｗｗｅＵ，ｂｕｔｍｏｓｔｏｆＰｆｅｉｆｆｅｒｃｅｌｌｓｗｅｒｅｄｅａｄ．ＴｈｅｄｏｕｂｌｉｎｇｔｉｍｅｏｆＰｆｅｉｆｆｅｒａｎｄＰｆｅｉｆｆｅｒ／ＡＤＭｃｅｌｌｓｗｅｒｅ（３２．２８±１．１８）ｈａｎｄ（３１．４１±２．０３）ｈ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ（Ｐ＞０．０５）．ＣＣＫ一８ ｓａｙａｓ—ｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｉｎｄｅｘｅｓｏｆｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｔｔｏａｄｒｉａｍｙｃｉｎ，ｅｔｏｐｏｓｉｄｅａｎｄｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅｉｎＰｆｅｉｆｆｅｒ／ＡＤＭ ａｔｗｅｒｅ１２．８７，１３．１８ａｎｄ１６．８５，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｐｆｅｉｆｆｅｒ／ＡＤＭｒｅｍａｉｎｅｄｄｒｕｇｓｒｅｓｉｓｔａｎｔｉｎｄｒｕｇ—ｆｒｅｅｍｅｄｉｕｍ ｌｅａｓｔ１ｍｏｎｔｈｏｒａｆｔｅｒｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｙｆｒｏｍｔｈｅｆｒｏｚｅｎ． ＊基金项目：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ．８１１６０２９８）； 广西医疗卫生适宜技术研究与开发项目（Ｎｏ．Ｓ２０１３０１一０２） △通信作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｅｎ－ｈｏｎｇ＠１６３．ｃｏｍ 收稿日期：２０１６—１１—１４ＴｈｅｒｅｗａｓｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎＰｆｅｉｆｆｅｒＲＴ）【－ｍｅｄｉａｔｅｄｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ—ａｎｄＰｆｅｉｆｆｅｒ／ＡＤＭｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ（Ｐ＞Ｏ．０５）．Ｐｆｅｉｆｆｅｒ／ＡＤＭ ｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎＰｆｅｉｆｆｅｒｉｎＭＤＲｌｍＲ— 万方数据