ABO反定型的必要性

ABO反定型的必要性ABO血型鉴定的原理 ABO血型鉴定的原理是根据红细胞上有或无A抗原或／和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。可利用红细胞凝集试验，通过正（血清试验）反（细胞试验）定型准确鉴定ABO血型。正定型、反定型定义 正定型是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或／和B抗原， 反定型是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗A或抗B。操作过程中的注意点 （1）严格查对，标记明确 （2）吸管等不得混用 （3）先加血清再加细胞 （4）要求正反定型结果相符 （5）不要使悬液干涸（玻片法），肉眼观察必要时再用显微镜观察。 （6）反定型不宜用玻片法 （7）试管法离心后应先观察上清液有无溶血，然后再摇动管底红细胞进行观察。ABO血型反定型用红细胞试剂盒说明 主要组成成分:A1型、B型、O型红细胞 有效期：两个月 样本要求：被检者血清或血浆 检验方法：试管法（1）取被检者血清（或血浆）各一滴（50ul）分别加入三支标记好的小试管中（2）分别各加一滴（50ul)A1、B、O试剂红细胞（3）摇动试管离心，速度1000rpm1分钟或3400rpm15秒即可（4）先观察是否溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），然后轻轻摇晃，使细胞再悬浮起来（5）观察凝集状况，并立即结果ABO正反定型结果 正定型 反定型 血型 抗A试剂 抗B试剂 A细胞 B细胞 O细胞 + － － + － A － + + － － B － － + + － O + + － － － ABABO反定型实验的局限性 本实验必须与正定型一起进行，正反定型不一致需做进一步研究。单独反定型结果不能作为判断血型的依据。结果判读注意事项 1.如果在反定型试验中，受检者的血清或血浆与O型红细胞试剂产生阳性反应，则需要添加自身对照试验。如果自身对照为阳性，明是自身冷凝激素导致。如果自身对照为阴性，则表明被检者血清或血浆中可能存在ABO系统以外的其他系统的抗体干扰定型。结果判读注意事项 2.本品如出现红细胞颜色变成暗紫色或红细胞发生凝集，出现菌落或溶血严重，则不能使用，尽量避免因制品污染、变质失效而造成的鉴定错误。结果判断 4+（++++）：红细胞凝集成一大块，血清清晰透明，无游离细胞。 3+（+++）：红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。 2+（++）：红细胞凝块分散成许多小块，见到游离细胞。 1+（+）：肉眼可见颗粒状细小凝块，游离细胞较多，上清液呈红色。 （+﹣）：肉眼很难看清，要用显微镜观察。镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多的游离红细胞。 MF：混合外观，即镜下可见极少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。 （－）：镜下未见凝集，红细胞均匀分布。ABO血型鉴定的意义 1.保证安全输血 2.辅助诊断新生儿溶血病 3.器官移植中的应用 4.亲子鉴定及其他（如法医学）红细胞ABO血型正反定型不合的原因分析 ABO正反定型不合的技术性问 1-1假阴性 （1）弄错样品，试管或玻片 （2）实验过程中未加血清或抗体试剂 （3）结果判读方法不规范，将溶血现象忽略 （4）血清或抗体试剂与血球比例不合适 （5）没有在室温或低于室温下放置一段时间 （6）试剂失效，离心不够 （7）使用的器皿不清洁 （8）解释记录不正确，书写错误等ABO正反定型不合的技术性问题 1-2假阳性 （1）弄错样品，试管或玻片 （2）抗体试剂，红细胞试剂或生理盐水被污染 （3）过度离心 （4）使用的器皿不清洁 （5）解释或记录不正确 ABO血型正反定型不合的技术性问题比较好解决，只要认真的重复试验，仔细核对血样和试剂，正确读取结果以及防止书写错误即可避免。ABO正反定型不合的理论性问题 2-1正定型不合 （1）弱A或弱B亚型 （2）白血病使A抗原或B抗原减弱 （3）何杰金病也有类似白血病抑制抗原的作用 （4）类B抗原：某些G杆菌感染可吸附于红细胞上与抗-B凝集素反应而凝集 （5）类孟买型 （6）抗-A，抗-B血清中存在某种低频率抗原的抗体 （7）某些疾病如胃癌、胰腺癌患者红细胞的血清或血浆中含有高浓度A或B血型物质，中和了抗体试剂，出现了假阴性反应 （8）某些疾病血清中高活性、高浓度自身冷凝集素严重致敏自身红细胞，以致在稀释液存在的条件下，自觉地发生凝集，而不是抗体试剂的特异性作用。补充知识点 类B抗原的存在，如O型或A型患者因肠道细菌感染，通常由革兰杆菌引起，其代谢产物可使红细胞上获得类B抗原，与抗B试剂出现凝集反应的假象。 多凝集红细胞具有以下特点：①能被人和家兔的许多血清凝集。②能与大多数成年人血清凝集，不管有无相应的同种抗体。③不被脐带血清凝集。④通常不与自身血清凝集。⑤如有条件可用外源凝集素加以鉴别。 冷抗体也就是天然抗体，是在没有任何可觉察的抗原刺激下而产生的抗体，以IgM为主，也可以是一种无察觉的免疫刺激而得。正常情况下，健康人体内均含有少量的冷抗体，效价很低，一般在1:16以下。分子量较大，不耐热，在4~25℃盐水中与相应红细胞发生肉眼可见凝集，随着温度升高，活性降低。如支原体及病毒性肺炎、传染性单核细胞增多症、再生障碍性贫血、自身免疫性溶血性贫血、红斑狼疮等患者，血清中有较高效价冷抗体，容易导致ABO正反定型出现全凝集现象。一般37℃0.9%生理盐水洗涤红细胞即可排除干扰，也可用巯基乙醇或二硫苏糖醇可将其灭活ABO正反定型不合的理论性问题 2-2反定型不合常见原因 （1）新生儿抗-A、抗-B检出率为29.3% ~89.4% （2）老年人随着年龄增加，抗体水平减弱 （3）白血病、恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤以及使用免疫抑制剂的病人 （4）先天性丙种球蛋白缺乏的病人 （5）免疫缺陷的病人 （6）M蛋白伴抗-A、抗-B减弱或缺乏 （7）嵌合体 （8）骨髓移植病人，外周血干细胞移植或脐带移植的病人 （9）血清中存在某些额外的抗体，如抗-P1、抗-M、抗-HABO正反定型不合的理论性问题 2-3被检者蛋白或血浆异常 （1）巨球蛋白增加，如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症等浆细胞病，某些何杰金淋巴瘤，纤维蛋白原水平升高会形成缗钱串。用生理盐水洗涤病人红细胞或向试管中加入1滴或2滴生理盐水可驱散缗钱串假凝集。（2）血浆增溶剂：如右旋糖酐、聚乙烯吡咯酮（PVP）等可引起RBC缗钱串假凝集，解决方法与上相同（3）脐血中沃顿氏胶含有粘多糖物质，能引起自发缗钱串假凝集。将脐血洗涤6~8次即可。（4）有些疾病如骨癌、胰腺癌，病人血浆中过剩的可溶性血型物质（BGSS）会中和试剂抗-A，或抗-B，在正定型中会出现假阴性或弱反应。用生理盐水洗去可解决此问题。ABO正反定型不合的理论性问题 2-4其他原因 （1）多凝集，由隐匿红细胞抗原引起（如T抗原），见于细菌性及病毒性感染。 （2）前带现象，病人的抗-A或抗-B水平不合适 （3）强冷凝集素：这种红细胞常直接抗球蛋白试验（DAT）阳性，如果此抗体与所有成人红细胞凝集，则反定型时与A、B型红细胞必凝集。将患者红细胞用37℃生理盐水洗涤三次，如果血中存在强冷凝集素，可以做自吸收实验，从血清中除去自身抗体，再用谱细胞鉴定抗体特异性。 （4）免疫性抗体：为输血工作中常见原因，产生的抗体包裹红细胞，直接抗球蛋白试验（DAT）呈阳性，正定型可发生混合外观或弱凝集。 （5）温自身抗体：由AIHA、药物引起，如甲基多巴，红细胞包裹足够的抗体，启动自然凝集，其反应强度室温较37℃弱得多。 （6）病人血清中有ABO同种凝集素以外的额外同种抗体，反定型红细胞有A及B以外的抗原，以及患者血清中的其他抗体，可以凝集这些细胞。 （7）抗-A、抗-B以外的抗体，可形成抗原-抗体复合物，这种复合物可以吸附在红细胞上。ABO正反定型不合的解决办法 （1）重新采集标本 （2）重复试验 （3）洗涤 （4）亚型测定 （5）显微镜核实 （6）其他方法（酶法或直接抗球蛋白法) 谢谢