新辅助化疗对大肠癌细胞凋亡的研究009

江西医药 2009年 5月 第 44卷 第 5期 Jian~i Medical Journal，May 2009，Vo1．44，No．5 ·473· 施后好转时间等指标进行分析．以探讨抗结核药物 致肝功能损害的最佳治疗与措施 1资料与方法 1．1一般情况 男 28例、女 17例；年龄 15～82岁； 其中初治病例 35例，复治病例 10例。初治病例均通 过 2～4种抗结核药物常规剂量下治疗．用药时间为 1～24周．服药前均无丙氨酸转氨酶(ALa3异常史． 无肝炎病史。肝功能正常。于治疗前已除外肝结核。 1．2 方法 45例病人均采用异烟肼(INH)0．3g．每 日1 次口服；利福平(RFP)0．45g，每 日1次口服；吡嗪酰胺 (PZA)0．5g，每 日3次口服；乙胺丁醇(EMB)0．75g，每 日1次口服。保肝治疗使用肝泰乐 0．2g，复方维生素 B片每次2片．每日3次口服，甘利欣 150m9静滴每 日 1次 。 1．3 症状体征及肝功能检查 (1)乏力、纳差、恶心 18例(40％)，黄疸 2例(4．4％)，肝大 1例(2．2％)，无 症状24例(53．3％)。·(2)ltI1．清ALT(正常值 0～40u／L) 升高4O～80u几17例(37．8％)；80 200u／L18(40％)；> 200u／LlO例(22．2％)，HBSAg均呈阴性。 1．4 血清 ALT升高时间 用抗结核药后<1周 14 例；1～2周 18例；3～6周 11例；>12周 2例。 2结果 本组 45例 。乏力、纳差、恶心。ALT明显升高多 发生在抗结核治疗 2周以内．只有极少数出现肝肿 大。轻者未停用抗结核药，按药物性肝炎[1]予肝泰乐、 甘利欣、复方维生素 B片等保肝治疗 1～2周后 ，症 状、体征、化验指标均恢复正常。重者停用异烟肼、利 福平、吡嗪酰胺等对肝功能有损伤的药物．待肝功能 恢复正常后再选用常规剂量下的抗结核药物治疗。 结果 45例肝功能均恢复正常 3讨论 3．1肝功能损伤是抗结核药物的最常见副作用．约 占所有药物性肝病的 12％~2J。从本组血清 ALT升高 时间可以看出．多数药物致肝损害都在应用抗结核 药初期出现(两周以内71．1％)，说明药肝出现较早， 早期应用保肝药物可预防或减轻药物性肝损害。 3．2 通过对 45例发现药物性肝损害后进行保肝治 疗取得效果如下：(1)单项转氨酶升高小于正常 上限的2倍时一般为药物的毒性反应或肝脏对药物 的一时性不适应。大多不需要更改治疗方案。(2)单 项转氨酶升高至正常上限 2～5倍持续两周以上者 可以使用保肝药．也可适当减少用药种类或减少药 物剂量或延长用药时间间隔，每周评价一次肝功能。 (3)转氨酶升高大于正常上限 5倍或伴有持续恶心、 呕吐、乏力、黄疸、肝肿大等症状，应及时停用抗结核 药物并给予保肝治疗，1～2周后肝功能基本恢复。 在给予保肝药物治疗的下．再按原方案将 RFP改为 利福喷叮继续抗结核治疗。并每周复查一次肝功能。 3．3 因抗结核药物对肝功能影响较大．在应用抗结 核药物之前先检查肝功能．以明确肝损害的原因．利 于抗结核药物方案的制定与执行。在治疗期间，在保 肝治疗同时应监测肝功能以便及早发现肝功能是否 受损．根据肝功能情况采取相应治疗措施。 综上所述，虽然抗结核药可引起严重肝损害．但 适当的保肝治疗是可以使肝功能恢复正常．并可继 续进行抗结核药物治疗。临床上预防和早期发现药 物性肝损害并及时进行处理对抗结核治疗是非常重 要的。 参 考 文 献 【l】姚光弼盗 物性肝病．中华消化杂志，1999，19(6)：339 【2】赵金满．药物性肝病 76例临床分析．中国实用内科杂志，2001，21 (1o】：613 (收稿 日期 2009—03—11) 新辅助化疗对大肠癌细胞凋亡的研究 袁春雷 牛佳木 [摘要】目的 根据奥沙利铂+5一FU+CF新辅助化疗方案对大肠癌细胞凋亡的变化，判断大肠癌患者对该方案的敏感程度。 方法 大肠癌患者 40例，分为低分化(含未分化)、中分化、高分化 3组 ，根据同一患者化疗前、后的肿瘤细胞凋亡率 (AI)变化． 评估三组不同分化程度大肠癌患者对化疗方案的敏感性。结论 化疗后的AI(29．4％)明显高于化疗前(13．5％)，提示新辅助化 疗对肿瘤细胞有显著的治疗作用 ，同时证实了奥沙利铂+5一FU+CF这一化疗方案对低、中、高分化大肠癌的疗效是确切的．并且 分化程度与对化疗的敏感性成反比 【关键词】大肠癌；新辅助化疗；凋亡 【中图分类号】R735．34 ·474· 江西医药 2009年 5月 第 44卷 第 5期 Jian~xi Medical Journal。May 2009，Vo1．44，No．5 大肠癌是我国最常见的恶性肿瘤之一．发病率 呈逐年上升的趋势 ，以年平均 4．2％的速度递增。大 肠癌的治疗是以手术为主的综合治疗 早期大肠癌 根治术后 5年生存率为 90％，但大部分患者(>70％1 就诊时即为Ⅲ、Ⅳ期．手术不能改变残留癌细胞局部 复发及远处转移的生物学特性．局部复发和远处转 移是治疗失败的主要原因【” 大肠癌手术治疗虽经多 年努力 ．治疗效果提高不明显 ．针对大肠癌术后的化 疗也一直不尽人意 目前新辅助化疗作为一种术前 化疗方法可以降低肿瘤细胞活性．甚至可以消灭转 移灶及血液中散在的癌细胞 。使术后复发 、转移的可 能性降至最低．改善预后。本研究旨在通过检测大肠 癌患者新辅助化疗前、后的肿瘤细胞凋亡率变化，探 讨肿瘤患者对化疗方案的敏感性．从而为术前及术 后辅助化疗方案的选择、调整提供新的依据．为大肠 癌的综合治疗提供新的思路和方法圆 1材料与方法 1．1临床资料 2008年 5月～2009年 2月我科收治 的进展期大肠癌患者f经肠镜确诊)40例，分为低分 化(含未分化)组 15例，中分化组 15例，高分化组 10例共 3组 每例患者化疗前通过肠镜取大肠癌组 织标本．流式细胞仪检测肿瘤细胞坏死及凋亡率．全 部病例均行“奥沙利铂+5一FU+CF方案”：化疗结束 后 2周行大肠癌根治术 ．术 中再次取大肠癌组织标 本检测肿瘤细胞坏死及凋亡率。比较化疗前、后的肿 瘤细胞凋亡率变化 1．2 病例收集 纳入标准：临床诊断进展期大肠癌 患者(肠镜确诊为高、中、低及未分化腺者)。排除严 重心肺疾病不能手术者 ：全身情况差．血象异常 (HB<9Og／L，WBC<4．Oxl09g／L，PLT<100~109／L)，合并 严重疾病，如消化道大出血、胃肠道梗阻、穿孔、明显 黄疸 、严重感染不能耐受化疗者。 1-3 主要试剂与仪器 Annexin V Flous Staining Kit (Roche1、奥沙利铂及亚叶酸钙(江苏恒瑞医药有限 公司)、5一FU(江苏恒瑞医药有限公司)、流式细胞仪 (Beckman Coulter，Epise XL型)。 1．4 组织标本获取及处理【3_选取已确诊为进展期 大肠癌患者的电子肠镜检查活组织标本 ，取至少 lmm3大小新鲜大肠癌组织多块．将所取组织标本放 入平皿，去表面黏液并剔除脂肪、筋膜 ；PBS洗涤 3 次。洗去组织中血液。用眼科剪将组织剪至匀浆状， 加 5ml生理盐水．以300目尼龙网过滤到试管内， 2000 r／min离心 5min。PBS洗涤两次，调整细胞数为 5～6x106／ml 按 1：1：50比例将 Annexin V、PI、HEPES 缓冲液配成 Annexin V／PI染液 每 100~1染液重悬 1~106个瘤 细胞 ．4~C孵育 15 min后加入 lml HEPES 缓冲液混匀上机。以488nm波长激发，525、620nm 带通滤片分别检测 FITC和 PI荧光 每收集 20000个细胞荧光信号 计算肿瘤组织细胞坏死及 凋亡率 术中取至少 1mm3大小新鲜大肠癌组织多 块．同法检测肿瘤组织细胞坏死及凋亡率 1．5 结果判断及统计学处理 Annexin V—FITC／PI双 标记流式细胞术可以将实验样本中正常、坏死、凋亡 细胞区分开。以 FITC和 PI荧光作双参数点图．可见 肿瘤 细胞分为 四个亚群：A：Annexin V—FITC一、PI一， 代表活细胞：B：Annexin V—FITC一、PI+，代表机械损 伤细胞：C：Annexin V—FITC+、PI一，为早期凋亡细胞； D：Annexin V—FITC+、PI+为坏死细胞。WinMDI2．8软 件分析结果．分别计算四群细胞比例。计算凋亡指 数，以百分数表示。分别计算每群细胞的比例。采用 SPSSIO软件作统计学处理．数据用均数±标准差表 示．组内每个患者新辅助化疗前后指标采用配对 t 检验．组间均数间比较应用t检验，两个变量间的关 系采用直线相关分析。P<0．05为差别有统计意义。 2结果 2．1全部病例化疗前后的比较 流式细胞仪检测发 现．化疗前后坏死细胞比例分别为 4 2％及 4．32％， 两者之间无明显差别(P>0．05)．而在凋亡细胞比例 方面．化疗后为 29．4％．明显高于化疗前的 13．5％ (P<0．o1)。说明化疗前后各组肿瘤细胞坏死率均无 显著性差异．而各组肿瘤细胞凋亡率在化疗后均有 显著提高 并且三组数据提示：随着肿瘤分化程度降 低 ．凋亡率变化越大[41。见表 1。 表 1 化疗前后肿瘤细胞坏死及凋亡比例 (％) 化疗前后比较P>0．05： 化疗前后比较P<0．05 2．2 各组间比较 流式细胞仪检测发现，低分化组 与中分化组在化疗前后肿瘤细胞坏死率的变化无统 计学意义 0．o5)，中分化组与高分化组在化疗前后 坏死率的变化同样无统计学意义(P 0．o1)，但是低分 作者单位 ：330006 南昌，南昌大学 2006级硕士研究生(袁春雷)；330029 南昌，江西省肿瘤医院外一科(牛佳木) 江西医药 2009年 5月 第 44卷 第5期 Jian~xi Medical Journal May 2o09'V(d．44，No．5 化组与高分化组在化疗前后坏死率的变化有统计学 意X(P<0．051，说明低分化腺癌比高分化腺癌的细胞 坏死比例更高．这可能与分化程度越低，生长越迅 速，缺血、缺氧导致的坏死比例提高有关。而对于化 疗前后细胞凋亡率的变化 ．3组两 两间均有显著差 异．说明不同分化程度肿瘤对化疗的敏感性显著不 同．并且分化程度越低．对化疗的敏感性越高。见表 2 表 2 各组病例化疗前后肿瘤细胞坏死及凋亡率变化(％) 低分化组与中分化组比较P<0．01： 中分化组与高分化组比较 P