骨碎补柚皮苷对人牙周组织细胞增殖和成骨分化潜能的影响

骨碎补柚皮苷对人牙周组织细胞增殖和成骨分化潜能的影响 浙江大学医学院 硕士学位论文骨碎补柚皮苷对人牙周组织细胞增殖和成骨分化潜能的影响 姓名:胡其勇 申请学位级别:硕士 专业:口腔医学 指导教师:陈莉丽 20100101浙江人学硕一【:学位论文 中文摘要 骨碎补柚皮苷对人牙周组织细胞增殖 和成骨分化潜能的影响 浙江大学医学院 口腔医学 硕士研究生 胡其勇 导 师 陈莉丽教授 中文摘要 牙周病是牙周组织(牙龈，牙周韧带，牙槽骨，牙骨质)的疾病。牙周病是各国人群的常见病和多发病。我国人群中牙周病发病率高达,,,以上。牙周病的持续发展可导致牙齿缺失，影响咀嚼和消化，造成患者营养不良。然而，牙周病至今尚无理想的治疗方法和药物。牙龈炎症，牙周袋形成，牙槽骨吸收和牙齿松动是牙周病的四大临床症状，其中牙槽骨吸收和牙周袋形成是最主要的症状。牙槽骨吸收是导致临床咀嚼困难和失牙的主要原因。如何抑制牙槽骨吸收，促进牙槽骨修复重建，成为治愈牙周病的一个关键性问题。 中草药是祖国传统医学的瑰宝，利用中草药开发研制治疗牙周病的新药是我们的优势。中药骨碎补是中医骨伤科方剂中常用主药，具有促进骨折愈合，强骨补肾的功效，骨碎补中有效成分主要为一种黄酮类化合物——柚皮苷，本实验选择骨碎补柚皮苷作为实验用药。 目的:探讨骨碎补柚皮苷对人牙周组织细胞的增殖能力以及成骨分化潜能的影响。 方法:制备含不同浓度骨碎补柚皮苷的细胞培养液。人牙周组织细胞作为药物筛选细胞模型。用,,,法检测在不同浓度下柚皮苷对细胞增殖的促进作用;检测不同浓度柚皮苷刺激下，细胞培养液中细胞分化指标——,,,活性的改变。 ，,,浙江 结果:,,,,,,?,,、, ,,,,?,(,含柚人学硕士学位论文 中文摘要 皮苷培养液,,小时后，,(,岬,,?,,,含柚皮苷培养液,,小时后，,(,,肛,,,?,。含柚皮苷培养液,,小时后均能促进入牙周组织细胞数目增加(,,,(,,)，其余浓度药物在不同时间点均无促细胞增殖作用(,,,(,,)。除,(,,,,,,,(,,浓度组外，各浓度组的,,,,随着培养时间的延长，细胞数量均有显著性增加。 与相应对照组比较，同,,,法各组别在同一作用时间均能使细胞,,,活性升高(,,,(,,)。其中，,,岬,,?,,,含柚皮苷培养液,,小时后，, ,,,,?,,,含柚皮苷培养液,,小时后， ,(, ,,,,?,„,含柚皮苷培养液,,小时后，均能使细胞,,,活性显著性升高(,,,(,,)。其余浓度药物在不同时间点均无使细胞,,,活性升高作用(,,,(,,)。除,(,,,,,,,?,,浓度组外，各浓度组的,,,,随着培养时间的延长，细胞,,,活性有显著性增加。 结论:骨碎补柚皮苷可提高人牙周组织细胞的增殖能力及成骨分化的潜能。关键词:骨碎补,投药和剂量;橙皮苷;牙周组织细胞;细胞培养，细胞增殖;细胞分化;,,,法，碱性磷酸酶，,浙江人学硕，学位论文 英文摘要 。„ ,„, ,,,,,,,„,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,, ,, ,,,,,,,,,,,？ ,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,, ;,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,;,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,, ,(,,,,, ,,,,,,,, ,;,,,, ,, ,,,,;,,,，,,,, ,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,?, ,,,,,,: ,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,: ,,,,(,,,, ,,,, ,,,,,,;, ,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,, ,,,,,,,, ,,,, ,,,,;, ,,, ,, ,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,:,,,,,,,, ,,,,，,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,，;,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,(,,, ,,;,,,,;, ,,,,,, ,,, ,,,,,,, ,,,, ,, ,,,,, ,,,,,(,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,, ,, ,,,, ,, ,,,,,，,,,;, ;,,,,, ,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,(,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,, ,,;,,, ,,,,,,,,,，,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,, ,,, ,,,,, ,,,,, ,,, ,,, ,,,, ;,,,,;,, ,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,,,, ,,, ,,,,, ,,, ,, ,,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,, ,,,,,,,(,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,, ,,;,,, ,,, ;,,,,,,,,, ,, ,, ,,,, ,,,,,,,,,,,;, ,,, ,,, ,,,,, ,,,,,, ,, ,,?螅恚幔螅澹螅椋?,,, ,,,,,,,,,(,,, ,, ,,;,,,,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,;, ,,, ,,, ,,,,,,, ,, ,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,( ,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,;,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,;, ,, ,,,,,,, , 浙江人学硕(,学位论文 英文摘要 ,,,,,(，, ,,, ,,,, ,,,,,, ,,,, ,, ,,, ,,;,,,, ,,,,, ,, ,,,,, ,,,;,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,; ,,,,,,,,,(,, ,,, ,,,,, ,, ,,,,,, ,,,,;,,,, ;,,,,,,,,，,,,,,,,, ,,,,,,,, ,(,,,,,， ,,,;, ,,,,,,, ;,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,，, ,,,, ,, ,,,,,,,，,,, ,,,,,;,,, ,,, ,,,, ,, ,,,, ,,,,,,;,( ,,,,;,,,,:,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,;,, ,, ,,,,,,,, ,,,,,,,, ,(,,,,, ,,,,,,,,(,,,,),,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,, ;,,,,( ,,,,,,,:,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,, ;,,,, ,,,, ;,,,,,,, ,, ,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,(,,,,,,,, ,,,,,,,, ,(,,,,, ,,,,,,,,(,,,,),, ,,,,,,,,, ;,,;,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,(,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,;;,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,(,,,),;,, ,,,,,,(,,,,,,,:(,),,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,, ;,,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,?,,, ,,, , ，,,,,,?,,,,,,, ,,, ,,,,,,, ,,,,;,, ,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,,，,(, ,，,,,?,,,,,,, ,,,, ,,,, ,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,,(,,, ,(,, ,,,,,。,一, ,,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,(,,,(,,)(,,,,,,,，,, ,,,,,,,;,,, ;,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,, ;,,,, ;,,,, ,, ,,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,, ,, ,,,,, ;,,;,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,;,,,,,, ,,,,(,,,(,,)(,, ,,, ,,,, ,,,, ,,，,,;,,, ,,, ,(,, , ,,,,,?,一, ,,,,,，,,,, ,,, ; , ,,,,,,?,一, ,, ,,;,,,,,,,,, ,,,,, ,, ,(, ,,,,,,?,,, ,,,,,, , ,,,,,,,,, ,,,,;, ,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,, ;,,,,( (,),,,,,,, ,, ;,,,,,, ,,,,,，,,,, ,,,,,,,, ,,, ,;,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,—,,,,,,,，,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,, ,,, ,,,,,,, ,, ,,,(,,,(,,)(,, ，,,,,,?,一, ,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,;,, ,, ,,;,,,,,,, ,,, ,;,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,, ;,,,, ,,,,,,,,，, ，(,,,,?,? ?,,,, ,,,,, ,,, ,,, ,(, ,(,,,,?【广, ,,,, ,,,,, ,,, ,,,(,,,(,,)(，, ;,, ,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,, ;,,,, ,, ,,,,,,,浙江人学硕十学位论文 英文摘要;,,;,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ;,,,,,, ,,,,(,,,(,,)(,,,,, ,,,, ,,,, ,,,,,,,，,,,,;,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,, ;,,,, ,,;,,,,, ,,;,,, ,,, ,(,, , ,,,,,„,一, ,,,,,(,,,;,,,,,,:,,,,,,,, ,,,,,,,, ,(,,,,, ,,,,,,,, ;,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,, ;,,,,(,,, ,,,,,:,,,,,,，, ,,,,,,,，,,,,,,;,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,, ,,,,,, ;,,,;,,,,;,,,,,,，,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,;,,,, ,,,,,,,,,,,,,;,,,，,,, ,，， 浙江大学研究生学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获 得逝姿盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名:五,茁包 签字同期: 乙,口年 ?月澎同 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解 逝姿盘堂 有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝姿盘鲎可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名:气，面,琴 导师签名:签字日期:, ,口年 ?月, 签字日期: 年 月 日浙江人学硕士学位论文 致谢 致 谢 衷心感谢导师陈莉丽教授这几年来对我的悉心指导和谆谆教诲。 感谢同事张伟的倾力指导及李化，王辉的大力协助。 感谢师姐孙伟莲的帮助和鼓励。 感谢浙江大学医学院附属第二医院口腔科各位老师对我的教导和帮助。 深深的感谢我的家人，正是他们无私的支持与鼓励付出才能让我顺利完成学业～浙江大学硕上学位论文 引言 骨碎补柚皮苷对人牙周组织细胞增殖 和成骨分化潜能 硕士研究生 胡其勇 导 师 陈莉丽教授,引 言 的影响 浙江大学医学院 口腔医学 牙周炎是各国人群中最为常见的口腔疾病之一，我国约有,,,的人群患有各种牙周炎…。牙周炎主要病理改变是牙周袋形成和牙槽骨吸收，导致牙松动甚至脱落【,,。因而牙周组织再生和修复是牙周病学研究的重要课题。 牙龈炎症、牙周袋形成、牙槽骨吸收和牙齿松动是牙周病的四大临床症状，其中牙槽骨吸收和牙周袋形成是最主要的症状。牙周袋的形成主要始于牙龈结缔组织的炎症及其引起的胶原纤维破坏和结合上皮的根方增殖。结合上皮根方增殖，靠近冠方的部分由于炎症而从牙面剥离，致使附着丧失，龈沟底移向根方而形成牙周袋。牙槽骨吸收是多因素综合作用的结果，菌斑细菌和细菌产物的刺激、咬合力过大或力的方向的改变、宿主免疫应答所释放的一系列因子均可引起牙槽骨吸收。牙槽骨受到以上因素作用时，牙槽骨中骨吸收超过骨重建，临床上即出现牙槽骨吸收。牙槽骨吸收有水平型吸收和垂直型吸收两种形式，使牙体松动脱落，并给牙周再附着带来困难。牙槽骨吸收是成人失牙的主要原因，因此，抑制牙槽骨吸收，促进牙槽骨修复重建，成为治愈各类牙周病的关键。 牙周硬组织再生的过程是成骨细胞或具有成骨潜力的细胞增殖和分化以及钙化的过程;牙周软组织再生是通过剩余牙周膜细胞的增殖，迁移和分化及分泌浙江人学硕(,:学位论文 引言胶原而实现的。人牙周组织细胞作为牙周组织中主要功能细胞，具有多向分化潜能，在创伤修复和组织再生中发挥着重要作用。 祖国传统医学辨证施治理论注重疾病的内因与外因、全身与局部的关系，其对牙周病的病因认识归结为口腔不洁、气血虚弱和肾元亏损，很早就认识到肾虚能引起牙周病。中医治疗牙周病的原则是辨证论治、兼治标本，即一方面控制炎症，一方面调动机体的防御机能，着重从总体观念治疗疾病，强调对局部病变引起的宿主机能紊乱的调整，弥补了西医在牙周病治疗上偏重局部治疗的不足。 中草药是祖国传统医学的瑰宝。中药骨碎补为水龙骨科植物槲蕨或中华槲蕨的干燥根茎【,,，是中医骨伤科方剂中常用主药，具有促进骨折愈合，强骨补肾的功效【,,，在牙周病治疗上也多有运用。现代中药药物化学研究证实骨碎补中有效成分主要为一种黄酮类化合物(柚皮苷【,,。近年来研究证实:含骨碎补一些复方药物对牙周炎有较好临床治疗效果【,,，但其对牙周炎的治疗作用机理尚不清晰。 本文以人牙周组织细胞为细胞模型，通过噻唑兰比色法(,,,法)检测细胞增殖，碱性磷酸酶(, ,,,,, ,,,,,,,,,，,,,)活性测定细胞分化，观察了含不同浓度骨碎补柚皮苷的细胞培养液对人牙周组织细胞增殖、分化作用的影响，为更好的开发利用骨碎补在人牙周炎治疗中的作用提供了新的实验数据。,浙江大学硕二,:学位论文 材料与方法,材料与方法,(,主要仪器与试剂 (,),,,培养箱:美国,,,,,,,,,,,,型。 (,),。,及(,, ,,冰箱:国产,,,(,,,,型。 (,)电动吸引器:国产,,(,,,,,,(,,,型。 (,)超净工作台:国产,,,(,,一,,型。 (,)倒置显微镜:国产,,,(,型。 (,)自动纯水蒸馏器:国产,,,,(,型。 (,)离心机:国产,,(,型。 (,)低温超速离心机:美国,,,,,,(,,,型。 (,)压力蒸汽消毒器:国产,,,(,,,,(,,,型。 (,,)酶联免疫仪:,,,,,,。 (,,)微量移液器:,,,,,,,,, (,,)微型旋涡混合器:国产,,(,,, (,,)恒温磁力搅拌器:国产,,,,,,型 (,,)分光光度剂:国产,,,型 (,,),,,,培养基:,,,;,原装,,,,培养基粉剂，双蒸水溶解，电动吸 引器负压抽滤，,,。,检菌三天，确定无菌，(,,。,保存。 (,,)胎牛血清: ,,,;,，,,。,水浴灭活,,分钟后使用。 (,,),(,,,蛋白提取试剂盒:,,,,;,公司。 (,,),,,缓冲液:,(,,,，,,,(,。 (,,)细胞消化液:,(,,,胰蛋白酶。 (,,),,,液:,,,,,公司，,(,,, ,,,(,,,(,)缓冲液配制成 ,,,,,, , ,,,溶液，于磁力搅拌器下搅拌,,分钟，浙江大学硕卜学位论文 材料与方法 充分溶解，滤过分装后,。, 冰箱保存。 (,,)二甲基亚砜:,,,,,公司。 (,,),,,乙醇:国产无水乙醇配制。 (,,)细胞裂解液:,(,,,,(,,，,,,,,,,,(,;,，,,,(,。 (,,),,,试剂盒:上海生工 (,,),,,试剂盒: 南京建成生物工程公司 (,,)柚皮苷溶液:柚皮苷品购自中国药品生物制品检定所。柚皮苷标准 品(,,,(,),(,,, ,溶于, ,, ,,,,后，配制成,, ,,,,?,。,母液，滤过 除菌，分装，(,,?保存。 (,,)含柚皮苷细胞培养液:含,,,胎牛血清的,,,,培养液中加入骨碎补 柚皮苷标准品溶液，使其终浓度分别为,,，,，,(,，,(,,，,(,,, ,,,,?,。, (,,),,,,孔板:,,,,,,公司 (,,)蛋白提取液:,,,,,裂解液，,,,,,,,，,(,,, ,,,,,,,,, (,,),(,,,显色液(,,,):国产考马斯亮兰干粉,,,,,，,,,,醇,,,,，,,, 磷酸,,,,,，加水至,,,,,，,。,避光保存。用前进行,:,,稀释。,(,细胞培养 取因正畸需要拔除的新鲜双尖牙，刮取根中,,,牙周膜组织，剪成碎块， 铺于培养瓶底。以含,,, ,,,胎牛血清(,,,)的,,,,培养液，在饱和湿 度、,, ,,,, ,,,、,,, ,,,,空气、,,?标准环境下孵育。用,(, ,,,胰蛋 白酶消化，进行传代扩增，取,(,代细胞用于实验。,(,噻唑盐比色法(,,,法) (,) 长成单层(铺满瓶底,,,)的人牙周组织细胞消化液消化，倒置显微 镜下观察大部分细胞退缩变形。,浙江人学颂:,:学位论文 材料与方法 (,) 无血清,,,,培养液洗涤。 (,) ,,,胎牛血清,,,,培养液吹散成细胞悬液，计数,,,,,,,,,,，每孔 ,,,,，,,接种于,,孔板预培养，共育三孔板，每孔板六组，等体积,,, 液空白调零，各为,复孔。 (,) 培养,,,后，吸去培养基，每 组分别加入含不同浓度柚皮苷(,(,,,， ,。,,，,(,，,，,,,,,,?,。,)的,,,, ,,,,,，分别作用,,，,,，,,小 时;添加等体积无柚皮苷,,,,细胞培养液为阴性对照组。 (,)在不同的时间点分别吸弃培养液，,,,洗涤，每孔加入,,,,,无血清培 养液和,,,,,,,液，孵育,小时。 (,),小时后，弃上清，每孔加入,,,,,, ,,,,，震荡,,分钟，酶标仪,,,,, 测定每孔,,值。,(,碱性磷酸酶(,,,)活性测定 ,(,(,蛋白提取: (,)长成单层(铺满瓶底,,,)的人牙周组织细胞消化液消化，倒置显微 镜下观察大部分细胞退缩变形。 (,)无血清,,,,培养液洗涤。 (,),,,胎牛血清,,,,培养液吹散成细胞悬液，计数,,,,,,,,,,，每孔 ,,,,,接种于,孔板预培养，共育三孔板，每孔板六组，各为,复孔。 (,)培养,,,后，吸去培养基，每组分别加入含不同浓度柚皮苷(,(,,,， ,(,,，,(,，,，,,,，,,,,?,,„)的,,,, ,,,,,，分别作用,,，,,，,,小 时;添加等体积无柚皮苷,,,,细胞培养液为阴性对照组。 (,)各时间点终止培养，各孔细胞用,。,预冷,,,洗三次( (,)每孔加细胞裂解液,,,,。 (,)冰浴,,,,,。 (,)用,(,,,蛋白提取试剂盒分别提取每孔的总蛋白。浙江大学硕上学位论文 材料与方法 ,(,(,总蛋白浓度测定: 用,,,试剂盒测定步骤,(,中所得到的总蛋白浓度。 ,(,(, ,,,测定: ,(,(,(,操作表: 测定管(〔,,) 标准管(， ,(,,,,,,酚标准液 ,, ,,,) 空白管(,,,) 细胞裂解产物 ,, ,,,,, ,, 缓冲液 ,, ,, ,, 基质液 ,, ,, ,, 充分混匀后,,。,水浴,,分钟 显色液 ,,, ,,, ,,, 立即混匀，酶标仪,,,,,测定各管,,值，并用空白管调零;,(,(,(,单位定义: ,,,,,上清在,,”,,与基质作用,,分钟产生,,,酚为,个金氏单位(,,,,);,(,(,(,计算公式: 碱性磷酸酶(,,,蛋白净测定管,,值,标准管,,值×标准管酚含量(,(,,,,,)?取样中的蛋白克数。,浙江人学硕,学位论文 材料„,方法,(,统计学分析 应用,,,,软件(,,(,)对各组数据进行方差分析，,,,(,,为差异具有统计学显著性。 , “,,结果,(,细胞培养 原代培养第,,,天组织块周围可见细胞游出，以组织块为中心(放射状排列。细胞为长棱形，胞体丰满，两端有细长突起，桩圆形或卵圆形。传代后细胞生长旺盛，呈一定方向排列，形态规则，? 宸崧 龋 巳是逦 ?田, ,天有细胞从组织块周围游离出来(,,,浙?大学顺，„学位论女 围, ,,天后，细胞逐渐增多(,,, 图,加天左右长满瓶底，成棱形或里形，胞突细长，放射状排列(×,,)浙江人学硕十学位论文 结果,(, ,,,法检测结果 与相应对照组比较，,,,,,,,?,,,，, ,,,,,,?,(,含柚皮苷培养液,,小时后，,(,,,,,?,,,含柚皮苷培养液,,小时后，,(,, ,,,,,?,,含柚皮苷培养液,,小时后均能促进人牙周组织细胞数目增加(,,,(,,)，其余浓度药物在不同时间点均无促细胞增殖作用(,,,(,,)。除,(,,,，,,,,?,,浓度组外，各浓度组的,,,,随着培养时间的延长，细胞数量均有显著性增加。(见表,，图,)表, 不同浓度含柚皮苷细胞培养液作用的人牙周组织细胞,,,法吸光度 (,,,，,，,，,,,,) 注:与对照组比较宰,,,(,,(图四同),?，学顺,,?恤论, 目，, 图,骨碎补柚度苷对人牙周组织细 胞增殖影响,(,碱性磷酸酶(,,,)检测结果 与相应对照组比较，同,,,法各组别在同一作用时问均能使细胞,,,活性升高(,,,,,)。其中，,, ,(,,,,。含柚皮苷培养液,,小时后，, ,(,,, ,『,含柚度苷培养液,,小时后，, ， ,,,,,。含柚皮苷培养液,,小时后，均能使细胞,,,活性显著性升高(,,,,,)。其余浓度药物在不同时间点均无使细胞,,,活性升高作用(,),,,)。除,,,,,,,, ,浓度组外，各浓度组的,,,,随着培养时间的延长，细胞,,,活性有显著性增加。(见表,，图五)。 结果 表,不同浓度含柚皮苷细胞培养藏作用的人牙周组担细胞,,,活性 ,,,，』拯，,?,„,注:与对照组比较;,(,,,，，，,,,,,(图五同)图,不同药物浓度作用后对人牙周组织细胞,,,活性的影响.