复方降糖滴丸有效部位对糖尿病小鼠降血糖作用的研究_丁月平

第 31 卷 第 7 期 2 0 1 3 年 7 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 31 No． 7 Jul． 2 0 1 3 中 华 中 医 药 1666 学 刊 复方降糖滴丸有效部位对糖尿病小鼠降血糖作用的研究 丁月平，袁强 (浙江中医药大学附属第二医院，浙江 杭州 310005) 摘 要:目的:研究复方降糖滴丸有效部位(总黄酮、总皂苷和总多糖)对糖尿病小鼠降血糖的作用及机制。 方法:采用四氧嘧啶复制实验性糖尿病小鼠动物模型，将小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组、原 处方汤剂组和复方降糖滴丸有效部位高、低剂量组。给药 14 天后，检测小鼠血糖、体重、血清胰岛素(INS)、超氧 化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及糖化血清蛋白(GSP)水平。结果:与模型组相比，复方降糖方有效部位药物 能明显降低实验性糖尿病小鼠血糖(P ＜ 0． 05) ，降低糖化血清蛋白水平，增加小鼠体重，提高糖尿病小鼠血清胰 岛素水平。结论:复方降糖滴丸有效部位在一定程度上保护胰岛 β 细胞，增强机体抗氧化能力，显著降低脂质过 氧化产物的含量，从而改善和治疗糖尿病。 关键词:复方降糖滴丸;有效部位;降血糖 中图分类号:R285． 5 文献标志码:A 文章编号:1673 － 7717(2013)07 － 1666 － 03 Study on Effective Parts of Compound Jiangtang Dripping Pills on Hypoglycemic Effect of Diabetic Mice DING Yueping，YUAN Qiang (The Second Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou 310005，Zhejiang，China) Abstract:Objective:To study the hypoglycemic effect and mechanism of the effective parts of Compound Jiangtang Dripping Pills (total flavones，total saponins and total polysaccharides)on diabetic mice． Methods:The experimental di- abetic mice model was established by using alloxan，and the mice were randomly divided into six groups:normal control group，model group，positive control group，the original prescription decoction group，high dose and low dose of the ef- fective parts of Compound Jiangtang Dripping Pills groups． The mice were given medicine for 30 days respectively，then the following indexes:blood glucose，weight，serum insulin level (INS) ，superoxide dismutase(SOD) ，malondialdehyde (MDA)as well as glycosylated serum protein(GSP)was measured． Results:Comparing with the model group，the effec- tive parts of Compound Jiangtang Dripping Pills had an obvious effect on reducing the blood sugar of experimental diabetic mice(P ＜ 0． 05)and the level of glycosylated serum protein，increasing the avoirdupois of the mice and improving serum insulin levels of diabetic mice． Conclusion:The effective parts of Compound Jiangtang Dripping Pills to some extent can protect islet beta cells，enhance the ability of antioxidation，reduce the content of lipid peroxidation products significant- ly，so as to improve and treat the diabetes． Key words:Compound Jiangtang Dripping Pills;effective parts;hypoglycemic effects 收稿日期:2013 － 02 － 16 基金项目:浙江省科技厅社会发展重点项目(2007C23019) 作者简介:丁月平(1983 －) ，男，浙江杭州人，医师，学士，研究方 向:内科基础研究和临床。 通讯作者:袁强(1965 －) ，男，浙江绍兴人，教授，博士研究生导师， 博士，研究方向:中药制剂分析及新药研究。 复方降糖滴丸由栀子、绞股蓝、山药、玉竹、葛根等中药 组成，处方中栀子的主要有效成分栀子苷具有很强的降血 糖作用［1 － 2］;绞股蓝的主要有效成分是具有降血糖作用的 绞股蓝总皂苷［3 － 4］;山药、玉竹的多糖类成分对糖尿病具有 治疗作用［5 － 6］，葛根的主要有效成分葛根素有降低血糖，预 防和治疗糖尿病血管并发症的作用［7 － 9］。全方清热生津， 益气养阴，临床上主要用于Ⅱ型糖尿病的防治。 本项目组以此为基础，进行创新，从中分离出有效 部位群［10 － 16］。本实验通过化学药物四氧嘧啶(ALLoxan， ALX)复制糖尿病小鼠模型，研究复方降糖滴丸有效部位降 血糖作用，探讨其作用机制。 1 材 料 1． 1 实验动物 清洁级 ICR小鼠 70只，体重 18 ～22 g，雌性， 由浙江中医药大学动物实验中心提供，普通饲料适应性喂养 3 d。饲养条件:温度为 18 ～22 ℃、相对湿度 50% ～60%。 1． 2 药品与试剂 复方降糖滴丸有效部位(含栀子苷、绞 股蓝总皂苷、总多糖、总黄酮) ，浙江中医药大学化学实验 6661 第 31 卷 第 7 期 2 0 1 3 年 7 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 31 No． 7 Jul． 2 0 1 3 中 华 中 医 药 1667 学 刊 室自制。复方降糖滴丸由巢湖今辰药厂生产;盐酸二甲双 胍片，由北京四环制药有限公司生产，批号:20091001;四氧 嘧啶(购自美国 Sigma 公司，)胰岛素试剂盒(批号:LOK# M02301044，南京建成生物研究所) ;超氧化物歧化酶 (SOD)试剂盒(批号:20110118，南京建成生物工程研究 所) ;丙二醛(MDA)测定试剂盒(批号:20110114，南京建成 生物工程研究所) ;糖化血清蛋白(GSP)测定试剂盒(批 号:20110119，南京建成生物工程研究所)。 1． 3 主要仪器 紫外可见分光光度计 UV － 2550(日本岛 津公司) ;JA －2003 型电子天平(上海精密科学仪器有限公 司天平仪器厂) ;HH － S 型水浴锅(巩义市英峪予华仪器 厂) ;TDL80 －2B型离心机(上海安亭科学仪器厂) ，强步倍 加型血糖测定仪(美国 Lifescan公司) ，MK － 3 酶标仪(芬兰 雷勃集团) ;XW －80A型旋涡混合器(北京医用仪器厂)。 2 方 法 2． 1 动物分组及给药 实验共分 6 组:①正常对照组;选 取造模成功的 40 只小鼠随机分为 5 组，每组 8 只，分为② 模型对照组，③阳性对照组，④原处方汤剂组，⑤复方降糖 方有效部位药物高剂量组，⑥低剂量组。 复方降糖方有效部位药物组:分为高、低两个剂量组。 按处方生药用量为 85 g /(人·d) ，按 65 kg /人计算，即1． 31 g生药 /kg，按人与动物体表面积比值换算成小鼠生药量， 即小鼠用药剂量为 7． 85 g /kg，以此 2 倍剂量为低剂量，6 倍剂量为高剂量，临用前用蒸馏水分别配成浓度为 0． 8、 2． 4 g /mL(以生药计) ，按 0． 2 mL /10 g灌胃给药，1 次 /d。 盐酸二甲双胍组:规格:0． 25 g /片，临床剂量:0． 5 g(2 片)/(人·d) ，按 65 kg /人计算，即 7． 69 mg 生药 /kg，按人 与动物体表面积比值换算成小鼠生药量，即小鼠用药剂量 为 46． 15 mg /kg，以此两倍剂量为对照药剂量，用蒸馏水配 置成浓度为 4． 6 mg /mL，按 0． 2 mL /10 g灌胃给药，1 次 /d。 原处方汤剂组:按处方生药用量为 170 g /(人·d) ，按 65 kg /人计算，即 2． 62 g生药 /(kg·d) ，按人与动物体表面 积比值换算成小鼠生药量，即小鼠用药剂量 15． 69 g 生药 / (kg·d) ，临用前用蒸馏水配成浓度为 0． 8 g /mL，按 0． 2 mL /10 g灌胃给药，1 次 /d。 正常对照组及模型对照组:灌胃等体积蒸馏水，按 0． 2 mL /10 g灌胃给药，1 次 /d。 2． 2 实验性糖尿病小鼠模型的制备 取雌性小鼠 70 只， 体重 18 ～ 22 g，适应性喂养 3 d后，随机选取 10 只作为正常 对照组。其余小鼠自第 4 d禁食不禁水 12 h，按 200 mg /kg 腹腔注射现配 2%四氧嘧啶生理盐水溶液，造成实验性糖 尿病小鼠模型。于 72 h后尾静脉取血测空腹血糖值，以血 糖值不低于 11． 1 ～ 25 mmoL /L作为造模成功的标准，删除 未造成糖尿病模型者。 2． 3 指标测定 采用美国 Lifescan公司血糖仪测定血糖， 按试剂盒方法测定血清胰岛素、SOD、MDA、GSP，具体步骤 严格参照试剂盒#说明#操作。 2． 4 统计学处理 各指标检测结果均用(珋x ± s)表示，采用 SPSS 11． 5 软件，对试验各组动物数据进行检验。P ＜ 0． 05，有显著性差异且具有统计学意义，P ＜ 0． 01 有极显著 的差异且具有统计学意义。 3 结 果 3． 1 复方降糖滴丸有效部位对小鼠体重的影响 复方降 糖方有效部位药物高、低剂量组均能较好改善小鼠体重。 给药 14 d后，复方降糖方有效部位高剂量组与模型对照组 和阳性对照组相比均具有极显著性差异(P ＜ 0． 01)。结果 见表 1。 表 1 复方降糖方有效部位对实验性糖尿病小鼠体重影响 体重(g) 给药前 7 d后 14 d后 正常对照组 22． 40 ± 2． 63 25． 50 ± 1． 84 29． 32 ± 2． 30 模型对照组 22． 18 ± 3． 10 18． 84 ± 1． 63 18． 34 ± 2． 70 阳性对照组 21． 43 ± 2． 97 19． 47 ± 3． 33 19． 02 ± 2． 34 原方汤剂组 22． 25 ± 2． 18 23． 17 ± 2． 43 25． 70 ± 3． 78 降糖方高剂量组 22． 32 ± 1． 54 22． 32 ± 1． 37＊＊ 25． 02 ± 1． 43＊＊△△ 降糖方低剂量组 21． 22 ± 2． 42 20． 62 ± 3． 11 22． 58 ± 3． 50 注:与模型对照组比较，＊＊P ＜ 0． 01;与阳性对照组比较， ＊＊△△P ＜ 0． 01。 3． 2 复方降糖滴丸有效部位对小鼠血糖的影响 实验结 果见表 2，给药前各组血糖值均有显著升高，与正常对照组 相比均有极显著性差异(P ＜ 0． 01) ，表示造模成功。给药 14 d后，复方降糖方有效部位两剂量组均能显著降低小鼠 血糖，与模型对照组相比具有显著性差异(P ＜ 0． 05) ，与原 处方汤剂组效果相当。 表 2 复方降糖方有效部位对实验性糖尿病小鼠血糖影响 血糖(mmol /L) 给药前 7 d后 14 d后 正常对照组 5． 98 ± 0． 58 5． 85 ± 0． 86 6． 05 ± 0． 68 模型对照组 17． 36 ± 4． 04 14． 95 ± 3． 90 20． 22 ± 7． 78 阳性对照组 17． 32 ± 4． 27 13． 42 ± 2． 70 9． 10 ± 2． 35 原方汤剂组 17． 38 ± 4． 48 14． 60 ± 2． 65 11． 42 ± 2． 18 降糖方高剂量组 17． 53 ± 4． 56 14． 42 ± 4． 68 12． 62 ± 1． 75* 降糖方低剂量组 17． 30 ± 4． 29 16． 27 ± 2． 28 13． 45 ± 4． 33* 注:与模型对照组比较，* P ＜ 0． 05。 3． 3 复方降糖滴丸有效部位对小鼠 GSP、INS 的影响 实 验结果显示，糖尿病模型组 GSP 明显高于正常组(P ＜ 0． 05) ;给药 14 d 后，复方降糖方有效部位高剂量组、原处 方汤剂组及阳性组 GSP较模型组均有显著性降低，各组间 无显著性差异;复方降糖方有效部位低剂量组 GSP 也减 少，但效果不及高剂量组。与模型对照组相比，复方降糖方 有效部位高、低剂量组给药 14 d 后，均能提高糖尿病小鼠 胰岛素含量，且高、低剂量组间呈量效关系，效果略好于原 处方汤剂组。结果见表 3。 表 3 复方降糖方有效部位对实验性 糖尿病小鼠 GSP、INS的影响 组别 GSP(mmoL /L) INS 正常对照组 1． 95 ± 0． 16 3． 43 ± 0． 42 模型对照组 3． 70 ± 0． 29 1． 77 ± 0． 12 阳性对照组 2． 71 ± 0． 59* 2． 48 ± 0． 73 原方汤剂组 2． 92 ± 0． 33＊＊ 2． 13 ± 0． 38 降糖方高剂量组 2． 87 ± 0． 28＊＊ 2． 33 ± 0． 65 降糖方低剂量组 3． 12 ± 0． 66 1． 92 ± 0． 72 注:与模型对照组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01。 7661 第 31 卷 第 7 期 2 0 1 3 年 7 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 31 No． 7 Jul． 2 0 1 3 中 华 中 医 药 1668 学 刊 3． 4 复方降糖滴丸有效部位对小鼠血清 SOD、MDA 的影 响 实验结果显示，复方降糖方有效部位高、低剂量组给药 14 d后，能显著提高小鼠血清总超氧化物歧化酶(SOD)含 量，与模型对照组比较具有极显著性差异(P ＜ 0． 01)。复 方降糖方有效部位高、低剂量组间呈现一定的量效关系，低 于阳性对照组和原处方汤剂组。同时，复方降糖方有效部 位高、低剂量组给药 14 d 后，能显著降低小鼠血清丙二醛 (MDA)含量，优于阳性对照组和原处方汤剂组，具有显著 性差异(P ＜ 0． 05)。结果见表 4。 表 4 复方降糖方有效部位对实验性 糖尿病小鼠 SOD、MDA的影响 组别 T － SOD(U /mL) MDA(nmol /mL) 正常对照组 130． 08 ± 8． 27 6． 64 ± 1． 92 模型对照组 77． 18 ± 12． 65 9． 82 ± 4． 02 阳性对照组 156． 41 ± 13． 26 7． 33 ± 2． 02 原方汤剂组 146． 83 ± 15． 72 5． 02 ± 0． 80 降糖方高剂量组 138． 46 ± 11． 14＊＊ 3． 82 ± 0． 59* 降糖方低剂量组 131． 05 ± 16． 80＊＊ 4． 49 ± 0． 65* 注:与模型对照组比较，* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01。 4 讨 论 糖尿病有两种类型:1 型，胰岛素依赖性糖尿病，由多 种因素引起的自身免疫机制紊乱所导致的 β 细胞破坏、胰 岛素分泌缺乏。2 型，即非胰岛素依赖性糖尿病，源于 β细 胞功能低下，胰岛素相对缺乏与胰岛素抵抗。2 型糖尿病 患者至少占糖尿病患者总数的 95%以上。目前 2 型糖尿 病动物模型主要是通过化学药物损伤和手术法建立。本文 选用较为常用的化学药物四氧嘧啶(ALLoxan，ALX)复制 糖尿病模型，其主要作用机理是影响葡萄糖激酶的活性，减 少葡萄糖载体和葡萄糖激酶信使 RNA的浓度，氧化生成自 由基，使细胞膜产生脂质过氧化产物，而破坏胰岛细胞，使 胰岛素分泌不足，致使糖尿病的发生。 复方降糖方有效部位药物能明显降低实验性糖尿病小 鼠血糖和糖化血清蛋白水平，增加小鼠体重，对糖尿病具有 治疗效果;并可以增加小鼠血清胰岛素含量，改善小鼠血清 超氧化物歧化酶、丙二醛、糖化血清蛋白水平。实验研究表 明，复方降糖方有效部位药物对糖尿病的治疗作用可能是通 过增加胰岛素分泌，保护胰岛 β细胞;增加 SOD含量，提高机 体抗氧化能力;降低MDA含量，减轻机体脂质过氧化损伤。 参考文献 ［1］ 王钢力，陈德冒，赵淑杰．栀子属植物化学成分研究进展［J］． 中国中药杂志，1996，21(2) :67． ［2］ 黄洪林，杨怀瑾，刘立超，等． 栀子降血糖作用的实验研究 ［J］．中药新药与临床药理，2006，17(1) :1 － 3． ［3］ 杨静．绞股蓝化学成分研究［J］．陕西中医，2000，21(8) :377． ［4］ 黄萍，陈竞龙，张雷等． 绞股蓝皂甙 2 型糖尿病肾病的血脂、 微量白蛋白尿的影响［J］．中国现代医学杂志，2007． ［5］ 刘晓棠，赵伯涛，张玖，等． 栀子的综合开发与利用［J］． 中国 野生植物资源，2008，27(1) :19． ［6］ 黄洪林，杨怀瑾，刘立超，等． 栀子降血糖作用的实验研究 ［J］．中药新药与临床药理，2006，17(1) :1 － 3． ［7］ 茅彩萍，顾振纶．葛根素对糖屎病大鼠主动脉糖基化终产物 的形成及其受体表达的影响［J］． 中国药理学通报，2004，20 (4) :393． ［8］ 玉从容，吕俊华，王丹，等．葛根素对胰岛素抵抗综合征大鼠 血压、血脂及糖耐量的影响［J］．山东中医杂志，2005，24(6) : 367 － 369． ［9］ 杨人泽，曾靖，刘春棋，等． 葛根素对小鼠血脂作用的影响 ［J］．时珍国医国药，2007，18(10) :2496． ［10］ 杨荣平，王宾豪，方艾权，等．大孔树脂分离葛根总黄酮工艺 优化［J］．中成药，2004，26(10) :784 － 788． ［11］ 崔九成，蒙跃龙．大孔树脂分离葛根总黄酮研究［J］．西北药 学杂志，1999，14 (4) :154 － 155． ［12］ 王慧彦，方芸，王妍，等． AB － 8 大孔树脂对槐花总黄酮吸附 性能研究［J］．食品科学，2009，30(30) :146 － 150． ［13］ 金向群，刘永刚，随志刚，等． D － 140 大孔树脂分离纯化淫 羊藿黄酮的研究［J］． 中成药，2004，26(11) :872 － 875． ［14］ 张雪琼，熊富良，刘建伟，等．大孔吸附树脂纯化栀子中总环 烯醚萜苷的研究［C］/ /中国药理学会制药工业专业委员会 第十二届学术会议、中国药学会应用药理专业委员会第二 届学术会议、2006 年国际生物医药及生物技术论坛(香港) 会议论文集． 2006． ［15］ 王冰，郑凤，郭雷，等．大孔吸附树脂对栀子中环烯醚萜苷类 成分的富集行为［J］． 天然产物研究与开发，2006，18:17 － 119． ［16］ 卫志贤，冉敏，李宝璋，等． 绞股蓝皂甙在 D101 树脂上的吸 附研究［J］．化学工程，1998，26(5) : 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪 58 － 61． 口服蛭弧菌对抗沙门氏菌 在细菌的世界中，有一种堪称“杀手"的蛭弧菌，它能 攻击并消灭许多其他细菌。英国一项最新研究显示，动物 可以通过口服蛭弧菌的方式来消灭肠道中会引起疾病的沙 门氏菌，且未见不良反应。 英国诺丁汉大学的研究人员在美国《应用与环境微生 物学》杂志上报告说，他们利用感染了沙门氏菌的鸡进行 了实验。沙门氏菌是能引起一些动物和人类肠道疾病的细 菌，人感染沙门氏菌后会出现头痛、腹泻等症状，严重时会 死亡。 研究人员先让一些鸡感染沙门氏菌，然后让其口服蛭 弧菌，结果鸡体内的沙门氏菌很快就被消灭了 90%。与此 同时，研究人员还让一些健康的鸡也服用了蛭弧菌，结果没 有发现有什么不良反应。 参与研究的劳拉·霍布利说，蛭弧菌不会在鸡体内长 期生存，观察显示它主要在口服后 48 h 内生效，两天后效 果就大幅下降。这说明如果用它来完全消灭沙门氏菌，可 能要设计一个多次口服疗程。不过，本次研究证明，口服蛭 弧菌既安全又有效。 以前曾有一些研究关注蛭弧菌的杀菌能力，但多用于 器物或体表杀菌，此次研究首次探索了蛭弧菌在生物体内 的杀菌效果。在目前许多病菌对药物产生耐药性的情况 下，这种利用天然生物“以菌治菌”的方法，提供了对抗病 菌的新手段。 8661