4食品卫生：四、霉菌和酵母、沙门氏菌检测

null实验四 霉菌和酵母计数 沙门氏菌检验实验四 霉菌和酵母计数 沙门氏菌检验一、实验目的一、实验目的 1.了解和学习食品中霉菌和酵母、沙门氏菌的测定原理和意义。 2.学习和掌握食品中霉菌和酵母计数的方法。 3.学习和掌握食品中沙门氏菌的检验方法。二、实验原理二、实验原理霉菌、酵母菌在自然界广泛存在，可以通过生产的各个环节污染食品，引起食品腐败，尤其是某些霉菌的有毒代谢产物还能引起各种急性或慢性中毒，危害人类。用稀释平板法进行计数。 沙门氏菌分布广，如果食品受到沙门氏菌污染，一旦条件适宜，沙门氏菌就会迅速的生长繁殖，当菌数在食品中达到一定数量，被消费者食用后就会造成食物中毒，危害人的身体健康，甚至危及生命。 沙门氏菌检验： 前增菌和增菌→平板分离→生化试验→血清学试验null沙门氏菌广泛存在于 动物肠道、内脏中引起中毒的主要是 动物源性食品中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验GB 4789.4-2003中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验GB 4789.4-2003TSI（排除A/A H2S－结果 ），靛基质，尿素，KCN，赖氨酸H2S＋ 靛－ 尿－KCN－ 赖＋（或一项不符）沙门氏菌血清学试验H2S＋ 靛＋ 尿－ KCN－ 赖＋H2S－ 靛－ 尿－ KCN－ 赖＋/－非如左述的各种反应结果沙门氏菌血清学试验沙门氏菌非沙门氏菌三、实验器材（每组的量）三、实验器材（每组的量）1.霉菌和酵母计数 （1）培养基：孟加拉红培养基（临用倒平板） 1瓶 （2）材料： 225ml无菌水三角瓶 1瓶 灭菌平皿 6（或5）付 1ml灭菌吸管 4支 9ml无菌水试管 3支 （灭菌称量纸：1张/组,灭菌镊子：1把/组） 2.沙门氏菌检验 （1）培养基：四硫磺酸钠煌绿增菌（TTB） 1瓶 DHL琼脂培养基（临用倒平板） 1瓶 三糖铁高层斜面 6（或5）支 （2）材料： 25ml无菌生理盐水三角瓶 1瓶 灭菌平皿 6（或5）付 100(或50)ml灭菌量筒 1个 （碘溶液、0.1%煌绿溶液、 2ml及1ml吸管：全班共用） （灭菌称量纸：1张/组，灭菌镊子：1把/组） 四、实验步骤四、实验步骤（一）第一次实验 1.霉菌和酵母计数 ①秤25g蛋糕+225无菌水(10-1)。可用均质器混匀 ②做10-2 、10-3、10-4稀释液，移1ml稀释液于灭菌平皿（事先在皿底做好标记）内，每个稀释度做两个平皿。 ③将已融化并凉至45℃左右的孟加拉红培养基注入平皿约15ml，并立即旋摇平皿使混合均匀。倒置于25℃ -28℃温箱内培养5d。 2.沙门氏菌检验 ①秤25g已均质新鲜鸡皮+25ml灭菌生理盐水，快速混匀器混匀。 ②每瓶（100ml）四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）+2ml碘溶液+1ml0.1%煌绿溶液。 ③量取25ml样品液+ TTB100ml，混匀，42℃培养18h-24h（二）第二次实验（二）第二次实验沙门氏菌检验 ①融化、倒6（或5）块平板（DHL琼脂培养基） ②取一环TTB增菌液，划线接种于DHL琼脂平板 ③倒置于36±1℃培养18—24小时 （三）第三次实验（三）第三次实验沙门氏菌检验 ①挑取DHL琼脂平板上数个可疑菌落，分别穿刺并划线接种于三糖铁（TSI）高层斜面（每人接一支） ②36±1℃培养18—24小时 沙门氏菌各群在各种选择性琼脂平板上的菌落特征沙门氏菌各群在各种选择性琼脂平板上的菌落特征1/5 nullDHL琼脂 无色半透明,产硫化氢菌落中心带黑色或几乎全黑色。 亚利桑那菌乳糖阳性菌株是粉色,中心带黑色。3/5 （四）第四次实验（四）第四次实验 1.霉菌和酵母计数 观察孟加拉红琼脂平板上的菌落数 2.沙门氏菌检验 在三糖铁琼脂内，各菌属的主要反应结果如表2。 表2说明：在三糖铁琼脂内只有斜面产酸同时H2S阴性的菌株可排除，其他的反应结果均有沙门氏菌的可能，同时均有不是沙门氏菌的可能，都需要作进一步的生化试验。null沙门氏菌主要 生物学性状 革兰氏阴性杆菌，需氧或兼性厌氧，最适生长温度为35～37℃，最适pH值为6.8～7.8。 不分解乳糖（亚利桑那菌除外）。分解葡萄糖产酸产气（伤寒沙门氏菌产酸不产气）。多数产生H2S，不产生靛基质，不液化明胶，不分解尿素，不产生乙酰甲基甲醇，多数能利用枸橼酸盐，能还原硝酸盐为亚硝酸盐，在氰化钾培养基上不生长。沙门氏菌主要 生物学性状 五、实验结果五、实验结果1.霉菌和酵母菌计数结果 2.沙门氏菌检验 将在三糖铁琼脂内的反应结果，记录于类似表2的表格中，出现第1~第4种情况，都需要作进一步的生化试验。null 霉菌和酵母的计数方法：通常选择菌落数在15～150之间的平皿进行计数，同稀释度的2个平皿的菌落平均数乘以稀释倍数，即为每克(或毫升)检样中所含霉菌数。稀释度选择及菌落报告方式可参考细菌菌落总数。 报告：每克(或毫升)食品所含霉菌和 酵母数以cfu/g(mL)表示。