广西常用中草药、壮药抗幽门螺杆菌作用的筛选研究

广西常用中草药、壮药抗幽门螺杆菌作用的筛选研究 广西常用中草药、壮药抗幽门螺杆菌作用的 筛选研究 药物研究 Themedicinestudy 中国民族民间医药 Chinesejournalofethnomedieineandethnopharmaey?19? 广西常用中草药,壮药抗幽门螺杆菌作用的筛选研究 张煜王彦峰 广西中医学院,广西南宁530001 【摘要】:目的:筛选有抗幽门螺杆菌(Hp)作用的中草药,壮药.方法:采用琼脂平板稀释法测定最低抑菌浓度 (MIC),对50味广西常用中草药,壮药进行抗Hp作用的筛选研究.结果:MIC为1:1280-1:640的药物:无.MIC为1: 640,1:320的药物有苦丁茶,金果榄.MIC为1:320,1:160的药物有:救必应,金线风,水田七,小飞扬草,望江南子. MIC为1:160,1:80的药物有毛果算盘子,杠板归,穿心莲,金银花,蒲公英,两面针,凤尾草,金盏银盘,黄藤,番木 瓜,山柰,椿白皮.MIC为1:8O一1:40的药物有古羊藤,石仙桃,小毛蒌;MIC为1:40-1:20的药物有九节茶,一枝 箭,鱼腥草,黄柏;MIC为1:20,1:10的药物有大力王,槟榔,连翘,大风艾,透骨消,毛冬青,白花蛇舌草.结论:50 味广西常用中草药,壮药以苦丁茶,金果榄等味在体外可抑制Hp的生长,而其中7味抑菌作用明显,其中12味具有中 度抑菌作用,其余药物抑菌作用低或无. 【关键词】:中草药壮药幽门螺杆菌 【中图分类号】R291.8;R965.1【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2008)10 —0019-03 幽门螺旋杆菌(Helicobacterpriori,H. pylori)是定植于人体胃黏膜面与粘膜层之间的 微需氧菌,它是胃炎,消化性溃疡的主要致病因 素[i1,与胃MALT淋巴瘤关系较为明确,几乎所 有患者胃粘膜中均可发现H.pylori【2J,并且与胃 癌的发生密切相关【引.我国是H.pylori感染率较 高的国家,无症状人群中H.pylori感染率达 50.5%-65.4%,因此如何预防H.pylori感染, 特别是大规模人群防治是当今医学界急待解决的 问.目前对H.pylori的治疗水平经历了从单一 抗菌药治疗,两种药物联合治疗到三,四联治疗 的发展过程.其临床疗效值得肯定,但又存在着 许多的临床问题.如药物过敏反应,加重消化不 良症状,对血液系统,肝肾功能的影响以及细菌 耐药等毒副作用,为此急待寻找高效,低毒,价 廉的抗H.pylori天然药物.本实验选择了5O味 广西常用中草药,壮药进行抗HP体外抑菌的筛选 研究,取得可喜结果,现报告如下: 1材料 1.1主要设备及仪器超净工作台(苏州净化设 备厂);隔水式电热恒温培养箱(上海医疗器械七 厂);752型紫外分光光度仪(上海第三仪器 厂). 1.2主要生化试剂及条件布氏肉汤和血琼脂基 础,均购自杭州天和微生物试剂有限公司(批号: 080612,080509);选择性抗生素添加剂(盐酸万 古霉素250rag,TMP150mg,多粘霉素B250IU,两 性霉素B250mg),购自北京陆桥技术有限责任公 司;脱纤维绵羊血,广西中医学院瑞康医院检验 科赠;混合气体(N85%,CO10%,025%) 由南宁气体供销有限公司提供;革兰染色剂,购 自南宁市生化药品仪器有限公司;尿素酶试纸, 珠海珠信公司生产. 1.3菌株来源全部试验菌株系从广西中医学院 附属瑞康医院胃病患者临床胃镜下所取胃粘膜组 织所得,同时将标本无菌剪碎,30min内接种于H. pylori琼脂培养基上,于5%02,10%CO2,85%N2, 湿润环境中37?培养3,4d,选择紫色带有闪光的 可疑菌落作革兰染色,镜检为G一,细长弯曲海鸥 状细菌,做快速脲酶试验4h内阳性,氧化酶,过 氧化氢酶均阳性者,确定为H.pylori,供试验用. 1,450味中草药,壮药购自南宁国医药店 2方法 2.1药物制剂取药物古羊藤,半边莲,救必应, 苦丁茶,金果榄,毛果算盘子,杠板归,穿心莲, 金线风,水田七,毛冬青,绞股兰,金盏银盘, 黄藤,望江南子,小飞扬草,鱼腥草,蒲公英, 金银花,连翘,白花蛇舌草,紫花地丁,黄柏, 凤尾草,一枝箭,三姐妹,五指枫,荞麦,九龙 藤,两面针,小毛蒌,五加皮,龙血竭,丹参, ? 20? 中国民族民fa-ll~药 Chinesejournalofethnomedieineandethnopharmacy 弱物研究 Themedicinestudy 番木瓜,钻地风,金盏菊,徐长卿,九节茶,大 力王,寻骨风,,八角,山苍子,大良姜,山柰, 槟榔,椿白皮,大风艾,透骨消,石仙桃等各味 药50g加适量水,文火煎煮2h,过滤,滤渣加适 量水,文火煎煮30min,过滤,合并两次滤液,浓 缩至每lml含原药1g的药液,并调pH值为7.4, 装瓶密封,经高压灭菌或间歇灭菌后,存冰箱备 用. 2.2布氏肉汤血琼脂培养基的配制(1升)称取 布氏肉汤粉末28g,血琼脂基础41g溶解于1000ml 蒸馏,调pH至7.4.高压灭菌15分钟,冷却至 55?左右时,于超净工作台无菌环境下加入脱纤维 绵羊血80ml,及幽门螺杆菌选择性添加剂盐酸万 古霉素250mg,TMP150mg,多粘霉素BZSOIU,两 性霉素B250mg,配制成添加剂溶液,摇匀后倒平 板,冷却凝固4?冷藏保存备用. 2.3保藏菌株的活化取0.1ml冻融的H.pylori 保存菌株置于布氏肉汤血琼脂培养基平板上,涂 布均匀,于37?微需氧环境(N285%,CO210%, O25%)下培养72h. 2.4菌悬液的制备取一环活化的H.pylori于 10ml液体培养基中,培养12~18h,根据紫外分光 光度仪的OD625值将菌悬液浓度校正为lxl09CFU/ mI. 2.5检测方法采用琼脂平板稀释法测定最低抑 菌浓度(MIC).取灭菌试管8支,将每味中药原 液(1g/m1)lml以灭菌生理盐水倍比稀释后(原 液,1:2,1:4,1:8,1:16,1:32,1:64,1:128) 加入9mL布氏肉汤血琼脂培养基,充分混匀.使 其成不同浓度(1:10,1:20.1:40,1:80,1:160,l: 表126昧中草药,壮药对HP的抑菌结果 药物名称菌株数1:8O1:160 在各稀释浓度受抑制的菌株数 苦丁茶 金果榄 救必应 金线风 水田七 小飞扬草 望江南子 毛果算盘子 杠板归 穿心莲 金银花 蒲公英 两面针 风尾草 金盏银盘 黄藤 番木瓜 山柰 椿白皮 古羊藤 石仙桃 小毛蒌 九节茶 一 枝箭 鱼腥草 黄柏 17 14 l2 16 18 17 14 1O 7 6 2O 21 (下转第44页) 2蝎m5m9798.45?B574 B堪m墙H9?碍B 875"32眩5n5m""H ?如弘巧勰? ? 44? 中国民族民间医药 Chinesejournalofethnomedicineandethnopharmaey 医疗论坛 Medicaltreatmentforum 2.5合理的功能洁净手术室的流程是指在 洁净手术室,所有人员与物品流动方向及过程, 人与物流动是影响室内空气净度的重要媒介.因 此,划分洁污流程,严格控制进出手术室的人员, 手术患者,手术用品,并采取适宜的隔离程序. 2.6严格加强手术室的卫生管理手术间每天用 消毒液擦拭地面,用抹布擦拭手术室,无影灯, 器械台,各种手术仪器与物品表面等,每台手术 结束后拖地1次,各辅助用房及通道走廊的地面 随时擦拭,保持清洁无灰尘,无血迹.每周清洁 空气滤过网,回风口,排风口.每个手术问的拖 布,抹布固定.每月做空气培养1次,使其菌值 控制在镇200CFU/m3. 总之,妇产科手术感染的防治,尽管控制术 后切口感染涉及多方面因素,但增强医务人员的 医院感染意识,严格把握无菌操作质量关,缩短 手抗术时间,开展术后监护合理选用抗生素,提 倡围术期应用抗生素,是感降低妇产科手术切口 感染的关键. 参考文献 [1]潘振朵,王秀英.妇产科手术与感染叨.中国民康医学,2006,11. (收稿日期:2008.7.20) (上接第20页) 320,1:640,1:1280);另用lmL生理盐水加入9mL 血琼脂平板内作对照,待完全凝固后用接种环接 种少量菌种于平板上,37微需氧(5%0,10% CO,85%N,相对湿度>98%的条件下培养72h. 观察结果:凡药物最高稀释平板中无菌落形成者, 即为该中药的最低抑菌浓度(MIC). 3结果 50味广西常用中草药,壮药中,以苦丁茶, 金果榄,救必应,金线风,水田七,三姐妹,望 江南子7味药物抑菌作用明显,毛果算盘子,杠 板归,穿心莲,蒲公英,金银花,两面针,绞股 兰,金盏银盘,黄藤,五指枫,荞麦,椿白皮12 味药物呈中度抑菌作用,古羊藤,毛冬青,小毛 蒌,九节茶,一枝箭,鱼腥草,黄柏7味药物呈 轻度抑菌作用(详见表1),其余24味药物抑菌作 用偏低或无.其中,MIC为1:1280,l:640的药 物:无.MIC为1:64O,1:320的药物有苦丁茶, 金果榄.MIC为1:320,1:160的药物有:救必 应,金线风,水田七,小飞扬草,望江南子.MIC 为1:160,1:80的药物有毛果算盘子,杠板归, 穿心莲,金银花,蒲公英,两面针,凤尾草,金 盏银盘,黄藤,番木瓜,山柰,椿白皮.MIC为 1:80-1:40的药物有古羊藤,石仙桃,小毛蒌; MIC为1:40,1:20的药物有九节茶,一枝箭, 鱼腥草,黄柏;MIC为1:20,1:10的药物有五 指枫,大力王,槟榔,连翘,大风艾,透骨消, 白花蛇舌草.毛冬青,绞股兰,九龙藤,五加皮, 龙血竭,丹参,钻地风,金盏菊,徐长卿,寻骨 风,八角,山苍子,大良姜,荞麦,三姐妹,半 边莲,紫花地丁17味药物的MIC大于1:10,且 有30%,90%的耐药菌株存在,所有菌株在布氏肉 汤血琼脂培养基平板上均生长良好. 4讨论 4.1本实验结果表明:中草药,壮药在体外确可抑 制Hp的生长,由实验结果证实了苦丁茶,金果 榄,救必应,金线风,水田七,三姐妹,望江南 子7味药物抑菌作用明显.为Hp的防治开辟了一 条新的途径.本研究为临床合理选药组方清除Hp, 治疗慢性胃炎,消化性溃疡伴Hp感染提供了可靠 的实验依据. 4.2在本次实验中有的供试原药液有抑菌作用,而 稀释以后没有抑菌作用;有的原药液未显示抑菌 作用而稀释以后却反而有抑菌作用;还有的药液 剂量与效果不完全成正相关作用.这可能与不 同的药物的提取方法,溶解稀释方法,贮藏时间 及实验条件有关,有待进一步研究. 参考文献: [1]GuissetM,Cotonrr,ReyP,eta1.Helieobacterpyloninfectionin developingcountries.MedTrop(Mars).1997;57(1):77N82. [2]ParsonnetJ,HansenS,Rodriguezeta1.Helicobacterpylori infectionandgas~elymphoma.NEnglJMed.1994May;330(18): 1267,1271. [3]BjorkholmB'Befrits1LJanp13,etatRapidPCRdetectionof Helieobacterpylori--associatedvirulenceandresistancegenesdirectlyfrom gastricbiopsymateria1.JClinMicrobio~1998De~3602)".3689--3690. [4]邓小英,林三仁.北京国际溃疡病会议纪要叨.中华内科杂志, 1996,35:212,213. E5]张万岱,吴炎,杨海涛,等.胃癌自然人群幽门螺杆菌感染的 血清流行病学调查叨.中华消化杂志,1995,15:276,278. (收稿日期:2008.8.27)