45例再次肾移植患者hla、pra与移植肾功能关系的研究

45例再次肾移植患者hla、pra与移植肾功能关系的研究 45例再次肾移植患者HLA、PRA与移植肾功能关系的研究 【摘要】 目的 研究再次肾移植患者HLA、PRA与肾移植术后移植肾功能之间的关系。方 法 追踪了2000年3月,2010年10月收治的再次肾移植患者45例，于近期再次检测群体 反应性抗体及血肌酐、尿素氮浓度。群体反应性抗体检测采用美国One lanmbda公司提供的 酶联免疫吸附法筛选HLA-?类、?类混合抗原板。血肌酐和尿素氮检测数据由检验科提供。 结果 根据肾移植手术时间分为4组::?移植肾存活8年以上组患者3例，HLA错配2个抗 原1例，错配4个抗原的2例，肾功能正常。?移植肾存活5年以上组患者10例，HLA错 配4个抗原6例和错配2个抗原的3例，肾功能正常，PRA阴性。错配3个抗原的1例，肾 功能丧失，PRA阳性。?移植肾存活3年以上组患者17例，HLA错配1 个抗原和2 个抗原 各1例，肾功能下降，PRA阳性。HLA错配3 个抗原患者3例，2例肾功能正常，PRA阴性; 1例肾功能下降，PRA阳性。HLA错配4个抗原患者7例，肾功能正常4例，其中1例术前 和术后均有抗II类抗体，另3例PRA阴性; 3例肾功能不正常，2例PRA阳性，另1例为 第3次移植后。HLA错配5 个抗原5例，4例肾功能正常，PRA阴性;1例目前肾功能下降， PRA阳性。?移植肾存活1年以上组患者15例。HLA错配1 个抗原2例，肾功能正常，其 中1例术前术后PRA阳性。HLA错配2 个抗原患者 6例，肾功能正常，其中2例术前抗体 阳性，1例发生肾功能延迟，PRA阳性，无DSA，目前肾功能正常。HLA错配4个抗原患者2 例，肾功能正常1例，术前术后均有抗体;1例肾功能不正常，术后肾功能延迟。HLA错配 5 个抗原患者2例，肾功能正常，其中1例术前术后均有II类抗体。HLA错配6 个抗原患 者3例，目前肾功能正常2例，1例已丧失肾功能。结论 HLA配型是维系移植肾长期存活 的重要因素，而HLA抗体对移植肾长期存活和移植肾功能的影响具有重要作用。 【关键词】 再次肾移植; 人白细胞抗原(HLA); 群体反应性抗体(PRA); 肾功能 A study of relationship between HLA、PRA and renal function in 45 retransplant patients 【Abstract】 Objective To study relationship between HLA、PRA and renal function in 45 retransplant patients. Method PRA、serum creatinine and urea nitrogen were retested in 45 patients who received renal retransplant from March, 2000 to October, 2010, using LAT-1240,OneLambda and QUICKSCREE,BSCREEN,GTI. Serum creatinine level was offered by clinical laboratory. Result Patients were classified into 4 groups according to the transplant time: ? 3 patients with allograft survive more than 8 years: 1patient with 2 HLA antigen mismatch, 2 patients with 4 HLA antigen mismatch, however, renal function normal.? 10 patients with allograft survive more than 5 years: 6 patients with 4 HLA antigen mismatch and 3 patients with 2 HLA antigen mismatch, renal function normal, PRA negative; 1 patient with 3 HLA antigen mismatch, renal function loss, PRA positive. ? 17 patients with allograft survive more than 3 years: 2 patients with 1 HLA mismatch and 2 mismatch respectively, renal function decrease, PRA positive; 3 patients with 3 HLA antigen mismatch, in which 2 patients renal function normal, PRA negative and 1 patients renal function decrease, PRA positive. 7 patients with 4 HLA antigen mismatch, in which 4 patients renal function normal with HLA-II antibody positive both in pretransplant or posttransplant, 3 patients PRA negative; 3 patients renal function abnormal in which 2 patients showed PRA positive, another was third transplant. 5 patients with 5 HLA antigen mismatch, in which 4 patients renal function normal, PRA negative, 1 patients renal function decrease recently, PRA positive.?. 15 patients with allograft survive more than 1 year: 2 patients with 2 HLA antigen mismatch, renal function normal, in which 1 patient showed PRA positive both pretransplant and posttransplant. 6 patients with 2 HLA antigen mismatch, renal function normal, in which 2 patients PRA positive in pretransplant, 1 patient with delayed renal function, PRA positive, no DSA, renal function normal recently. 2 patients with 4 HLA antigen mismatch in which 1 patient renal function normal, PRA positive both in pretransplant and posttransplant,1 patient renal function abnormal, with delayed renal function. 2 patients with 5 HLA antigen mismatch, renal function normal, in which 1 patient II antibody positive both in pretransplant and posttransplant. 3 patients with 6 HLA antigen mismatch, in which 2 patients with normal renal function, 1 patient lost renal function. Conclusion HLA match is an important factor which can ensure long-term renal HLA antibody play a significant role in long-term renal survival and survival, function. 【Key words】 Renal retransplantation human leukocyte antigen(HLA) Panel Renal function reactive antibody (PRA) 再次肾移植与初次肾移植的移植效果历来是肾移植术后关注的重点，其原因在于再次移 植后发生急性排斥和肾功能延迟几率高及长期存活率低等。 HLA配型是器官移植患者术前 选择最佳移植供者的最重要检测之一，而肾移植术后群体反应性抗体(PRA)检测则是鉴别移 植物发生排斥反应的重要监测项目之一。同样血肌酐是判断肾移植术后移植肾功能的重要指 标之一。因此本文对再次肾移植受者于肾移植术后追踪其HLA配型及PRA和肾移植术后肾功 能进行了研究，如下。 1 与方法 1.1 一般资料 肾移植患者资料:追踪了2000-03/2010-04收治的再次肾移植患者45例，其中男性29例， 女性16例;最大年龄57岁，最小年龄21岁。于近期再次检测群体反应性抗体及血肌酐、 尿素氮指标。根据肾移植手术时间分为四组: ?移植肾存活8年以上组;?移植肾存活5 年以上组;?移植肾存活3年以上组;?移植肾存活1年以上组。 1.2 试验方法 1.2.1 HLA分型:采用美国莱姆德公司和美国GTI公司提供的低分辨SSP-HLA-I类、II类 分型试剂。操作步骤如下:(1)提取DNA ?取EDTA抗凝血2毫升，离心3000转5分钟。 ?吸取白细胞层，加入红细胞裂解液8-10毫升，混匀。?离心3200转8分钟。?弃上清， 加入白细胞裂解液2毫升、10%SDS 60微升、5M高氯酸钠500微升、饱和氯化钠1毫升，充 分混匀。?离心2600转15分钟。?小心吸取上清加入到4毫升异丙醇中，待DNA析出，用 70%洗两到三次。?待DNA干燥后加入400-600微升蒸馏水，溶解DNA备用。 (2)扩增?每人份取D-Mix一管，加入Taq酶7ul(5U/ul)、DNA111ul，充分混匀。? 点入96孔板，每孔10微升。?置入PCR仪扩增，扩增条件:96? 130秒，63? 60秒 1 个循环，96? 10秒，63? 60秒 9个循环，96? 10秒，59? 50秒，72? 30秒 20个循 环，4?结束。 (3)电泳?用TBE缓冲液配制备2.5%琼脂糖凝胶。?将扩增产物移置凝胶中进行电泳，150V 3-4分钟。?紫外灯下观察结果。 1.2.2 PRA检测 采用美国莱姆德公司抗原筛选板和美国GTI公司提供的ELISA筛选HLA-I类、II类混合抗原板。鉴定抗体类型采用采用美国莱姆德公司鉴定抗原板(LAT-1240)，其抗原板包含21种HLA-A抗原特异性，29种HLA-B抗原特异性，15 种HLA-Cw HLA-DR抗原特异性，7种 HLA-DQ抗原特异性。操作步骤按说明书。 抗原特异性，14种 1.2.3 血肌酐/尿素氮检测:血肌酐/尿素氮检测数据由检验科提供，由于肾移植患者术后导致肾功能下降的因素较多，故把血肌酐/尿素氮正常值115umol/L/7.14mmol/L提至130umol/L/8mmol/L，以此调整肾移植术后患者调理不当引起的肾功能不正常。凡肾移植术后血肌酐/尿素氮值高于130umol/L/8mmol/L，均认为移植肾功能下降。 1.2.4 供者特异性抗体(DSA)的确定 对群体反应性抗体(PRA)阳性的患者，根据肾移植供受者间的HLA配型来确定DSA。 2 结果 在45例再次肾移植患者中，PRA阳性患者有14例，占31.11%，移植肾功能丧失的患者2例，占4.44%， 肾功能不正常的患者8例，占17.78%，移植肾功能正常患者35例，占77.78%(见表1、2)。 表1.再次肾移植患者肾功能状态和PRA PRA+ 存活率 例数 肾功能正常 肾功能不正常 移植肾丧失 8年以上 3 3 - - - 5年以上 10 9 - 1 1 3年以上 17 10 7 - 7 1年以上 15 13 1 1 6 45 35 8 2 14 表2.再次肾移植患者HLA-A、B、DR抗原错配和PRA的关系 HLA配型错配率 例数 PRA- PRA+ 1个抗原 3 2 1 2个抗原 11 8 3 3个抗原 4 2 2 4个抗原 17 13 4 5个抗原 7 5 2 6个抗原 3 1 2 45 31 14 由表1、2可见，移植肾存活8年以上组患者3例。HLA-A、B、DR抗原错配2个抗原1例，错配4个抗原的2例，肾功能正常。 移植肾存活5年以上组患者10例。HLA-A、B、DR抗原错配4个抗原6例和错配2个抗原的3例，肾功能正常，PRA阴性。错配3个抗原的1例，肾功能丧失，PRA阳性(II:66.67%)，出现DSA，且抗体强度较高。 移植肾存活3年以上组患者17例。HLA-A、B、DR抗原错配1 个抗原和2 个抗原各1 例，肾功能下降，PRA阳性。HLA错配3 个抗原患者3例，其中2例肾功能正常，PRA阴性;1例肾功能下降，并且PRA阳性，且DSA阳性。HLA错配4个抗原患者7例，肾功能正常4例，其中1例术前和术后均有抗II类抗体，无DSA，3例PRA阴性。另3例肾功能不正常，其中2例PRA阳性，且DSA阳性;1例为第3次移植后，PRA阴性。HLA错配5 个抗原5例，其中4例肾功能正常，PRA阴性;1例目前肾功能下降，PRA阳性，且DSA阳性。 移植肾存活1年以上组患者15例。HLA-A、B、DR抗原错配1 个抗原2例，肾功能正常， 个抗原患者 6例，肾功能正常，其中2其中1例术前术后PRA阳性，无DSA。HLA错配2 例术前抗体阳性，1例发生肾功能延迟，PRA阳性，无DSA，目前肾功能正常。HLA错配4个抗原患者2例，肾功能正常1例，术前术后均有抗体，无DSA;1例肾功能不正常，术后发生肾功能延迟。HLA错配5 个抗原患者2例，肾功能正常，其中1例术前术后均有II类抗体，无DSA。HLA错配6 个抗原患者3例，目前肾功能正常2例，1例已丧失肾功能。 3 讨论 肾移植术前的尿毒症患者体内生成抗HLA抗体的主要因素有输血、妊娠和曾经历过肾移植手术而失败者。肾移植术后发生排斥的重要因素之一是群体反应性抗体(PRA)的参与，特别是肾移植术后产生抗供者特异性抗体(DSA)。DSA的产生不仅导致肾移植术后发生急性 (1)排斥反应，而且处理不当将严重影响移植肾的存活率。Lefaucheur等研究发现肾移植受者中，存有HLA-DSA的患者中8年移植物存活率(61%)低于已致敏但没有HLA-DSA的患者(93%)和非致敏的患者(84%)。当检测HLA-DSA血清的峰值达到高水平时，移植物存活率下降及(2)发生抗体介导的排斥反应(AMR)的危险系数增加。因此AMR和移植物丢失与HLA-DSA的强度有关。在本研究中可见，PRA阳性的患者中，抗HLA抗体为DSA的患者的移植肾功能基本上呈下降趋势，而无DSA抗体的患者，即使术前术后PRA阳性，移植肾功能均正常。Parameshd(3)等对142例术后抗体高敏感患者(PRA,80%)，根据HLA错配划分3组:HLA错配0-2抗原，HLA错配3-4抗原和HLA错配5-6抗原各分一组。结果表明随着HLA错配率的高低，则急性排斥发生率越高((4.4% vs. 11.4% vs. 31.3%, p < 0.01)。同时HLA错配率越高感染CMV和移植肾功能下降的患者越多。可见良好的HLA配合对降低移植肾的急性排斥发生率和降低抗HLA抗体上具有重要作用。从本研究中可见，短期内HLA配型并不能影响移植肾功能，但如出现抗HLA抗体，则可导致移植肾功能下降，因为在3年以上组，HLA错配1 个抗原和2 个抗原各1例，肾功能下降，PRA阳性。可见，即使HLA配型良好者，如出现抗HLA抗体，则也易导致移植肾功能下降。对初次移植失败的肾移植患者重新肾移植则比初次肾移植更应 (4)严格，除了良好的HLA配型外，更应检测PRA和严格的交叉配型试验(DSA)。贾保祥等在移植肾功能丧失，准备再次进行肾移植的196例患者中检测发现，PRA阳性的患者有139例，阳性率为70.92 %(139/196)。PRA强度,60 %以上的患者有72例，,60 %的患者67例。与输血+妊娠组比较，再次移植组PRA阳性几率明显增高，差异有统计学意义(P<0.05)。可见，(5)曾经的肾移植是移植患者高致敏的重要因素之一。但有研究者证实，与首次肾移植相比，虽然再次移植HLA抗体阳性率较高，但再次移植肾存活率并不低于首次移植, 而在本研究中也证实了此研究，虽然45例再次肾移植患者中，PRA阳性患者有14例，占31.11%，但有77.78%(45/35)的患者移植肾功能仍正常，仅有2例患者移植肾功能丧失，仅占4.44%，另外8例虽然肾功能下降，但移植肾仍有部分功能，占17.78% 。可见再次肾移植的长期存活有赖于HLA配型和PRA阴性，特别是DSA阴性。 血肌酐检测是肾功能正常与否的重要指标，肾移植术后1个月，6个月，12个月时血肌酐水平是预测肾存活的指标，提示这3个时间点的血肌酐水平可作为长期肾死亡丢失的最 (6)终参考指标。在本研究中，肾功能下降的患者基本上均与PRA阳性有关，特别是在3年期存活的再次肾移植患者中表现更加明显，因此再次肾移植患者在第3年更应严格检测PRA，密切关注肾功能指标，以保证移植肾能够长期存活。 总之，通过本研究表明，再次肾移植患者的供受者HLA错配的多寡，并不是产生PRA的重要 因素，但PRA的生成是影响移植肾功能的重要因素。 参 考 文 献 [1] Lefaucheur C, Loupy A,Hill GS, et al. 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