幽门螺杆菌检测试剂盒(原位杂交)

幽门螺杆菌试剂盒(原位杂交) 规格: 20 人份 50 人份 S30332 S30333 产品型号: 幽门螺杆菌检测试剂盒(原位杂交) 幽门螺杆菌检测试剂盒(原位杂交) (操作之前请详细阅读此说明书) 检测原理和意义 原位杂交技术的原理是采用荧光、生物素、地高辛等标记的探针，依据碱基互补配对原理，与组织切片、细胞涂片等标本中的靶序列特异杂交，经信号放大及显色后，镜下观察结果。此方法具有很高的灵敏性和特异性。 HP(幽门螺旋杆菌)是一种单极、多鞭毛、螺旋杆状细菌。研究证明，HP是引起胃炎、胃溃疡、胃非何杰金淋巴瘤和粘膜相关淋巴组织性淋巴瘤(MALT)的主要病因。HP探针是根据HP的特征性基因序列而成的，配合先进的放大系统和显色系统所组成的原位杂交检测试剂盒，具有很高的特异性和灵敏性，大大超过目前病理科常用的HP检测方法，并且不受细菌形态的影响。 试剂盒提供的和试剂 提 供 量 成 份 保存方法 20人份 50人份 1 HP杂交液 -20? 500ul 625ulx2 2 杂交增强液(100×) 4? 60ml 60ml 3 一抗 4? 1ml 2.5ml 4 二抗 4? 1ml 2.5ml 5 HRP聚合物 4? 1ml 2.5ml 6 DAB底物 4? 1ml 2.5ml 7 DAB 4? 20ul 50ul 8 18X18mm盖玻片 4?/室温 20片 50片 30ml 30ml 9 湿盒增效液 4?/室温 1 规格: 20 人份 50 人份 S30332 S30333 产品型号: (注意:HP杂交液请 -20?保存) 2 幽门螺杆菌检测试剂盒 幽门螺杆菌检测试剂盒 泰普生物TRIPLEX 用户自备材料和试剂 1. 原位杂交加热器(泰普编号:M10061) 8. 湿盒2个 2. 微波炉 9. 二甲苯 3. 37?恒温培养箱 10. 酒精 11. PBS(pH=7.6) 4. 光学显微镜 5. 移液器 12. 苏木素 6. 计时器 13. 氨水 7. 玻片染色缸和染色架 14.盐酸酒精 实验前需配试剂 A、1X杂交增强液 取适量100X杂交增强液及蒸馏水，按1:99稀释，并将此1X杂交增强液存放于4?备用。 30 B、,湿盒增效液 取湿盒增效液及蒸馏水，按3:7配制成30%湿盒增效液备用。 实验时需配试剂 DAB显色液 50的比依据需要配制DAB显色液，以可覆盖整个组织的量为宜。取DAB与DAB底物，按照1:例混匀，避光保存备用。(现配现用) 操作步骤 1(切片处理:将4um厚度的组织粘附在APES处理的载玻片上，切片于60-70?烘烤60分钟以上。 (建议每次实验同时附加阳性、阴性对照片) 2(脱蜡及水化: 溶液 次数×时间(分) 二甲苯 3 × 10 100%酒精 1 × 3 95,酒精 1 x 3 80%酒精 1 × 3 蒸馏水 1 x 3 (注意:使用过的二甲苯，应相应延长脱蜡时间，以保证脱蜡完全) (微波处理:将切片放入盛有1X杂交增强液的容器里，微波高火状态煮30分钟，自然冷却2-3分钟。3 (加热过程中，溶液应始终浸没组织。建议适时(每隔5-15分钟)补充杂交增强液)蒸馏水洗涤1 ×1分钟，小心擦干组织周围液体。 4(杂交: (约25 ul，根据组织大小增、减量)(本试剂盒配备，可根据4.1 每张切片滴加适量杂交液，并加盖玻片加入杂交液量进行剪裁); 3 幽门螺杆菌检测试剂盒 幽门螺杆菌检测试剂盒 泰普生物TRIPLEX 4.2 放置于95?原位杂交加热器上变性5分钟; 4.3 放入含30%湿盒增效液的湿盒中，37?下孵育4-16 小时。建议过夜(,16小时)以保证低拷 贝样本的杂交效果; 4.4 48?(PBS 预温)浸泡切片，小心移去盖玻片，PBS继续浸泡5分钟; 4.5 48? PBS洗涤3x 5分钟 (轻微振荡容器); 注意:盖玻片规格应与杂交液量匹配， (切片在整个试验过程中要保持湿润状态，防止干片) 5(信号放大与显色: 5.1 小心擦去组织周围液体，滴加适量一抗(约50 ul，根据组织大小增、减量)，37?，水湿盒中孵 37? 育30分钟;PBS浸泡3x2分钟(轻微振荡容器); 5.2 小心擦去组织周围液体，滴加适量二抗，室温，水湿盒中孵育(约50 ul，根据组织大小增、减量) 20分钟;室温PBS浸泡3x2分钟 (轻微振荡容器); ，室温，水湿5.3 小心擦去组织周围液体，滴加适量HRP聚合物(约50 ul，根据组织大小增、减量) 盒中孵育30分钟;室温PBS浸泡3x2分钟 (轻微振荡容器)。 5.4 小心擦去组织周围液体，滴加适量DAB显色液，室温，水湿(约50 ul，根据组织大小增、减量) 盒中孵育约10分钟(不同样本的显色时间可能有所差别，建议镜下观察显色过程);室温PBS 浸泡3x2分钟 (轻微振荡容器)。 5.5 自来水冲洗，苏木精复染(可用盐酸酒精分化及氨水返蓝)。梯度酒精脱水，中性树胶封片。 阳性结果判断:胃小凹和黏膜表面棕褐色着色。 其他事项: 本试剂保质期为12个月。客户在收到产品时请及时检查，如发现有外包装破损、试剂盒成分不全等产品问，或者在使用过程中有任何疑问，请及时与泰普客户服务中心联系，我们将及时为您解决。 公司信息: 公司名称:福建泰普生物科学有限公司 总部:福建省福州市金山金洲北路7号金山科技企业孵化器7号楼4层 邮编:350002 电话:800-804-8333，0591-2805 3600 传真:0591-2805 3700 研发中心:北京市昌平区北清路中关村生命科学园创新大厦A座207室 邮编:102206 电话:010-8072 0071 传真:010-8072 0072 4 幽门螺杆菌检测试剂盒 幽门螺杆菌检测试剂盒 泰普生物TRIPLEX 操作步骤简表 操 作 参 数 1 二甲苯 3X10’ 2 100%酒精 1X3’ 3 95,酒精 1X3’ 4 80,酒精 1X3’ 5 蒸馏水 1X3’ 6 微波加热 3x10’ 7 蒸馏水 1’ 8 加杂交液 适量 9 变性 95?，5’ 10 30,湿盒增效液的湿盒中孵育 37?，4-16h 11 PBS(用前48?预温)脱片，浸泡 1-5’+5’ 12 PBS(用前48?预温)浸泡 3X5’ 13 加一抗 37?，30’ 14 PBS(37?)浸泡 3X2’ 15 加二抗 室温，20’ 16 PBS浸泡 3X2’ 17 加HRP聚合物 室温，30’ 18 PBS浸泡 3X2’ 19 DAB显色， 室温，2-10’ 20 PBS浸泡 3X2’ 21 自来水冲洗 1’ 22 复染，脱水，封片 常规 5 幽门螺杆菌检测试剂盒 幽门螺杆菌检测试剂盒 泰普生物TRIPLEX 6