【doc】 胰母细胞瘤一例荧光原位杂交检测

【doc】 胰母细胞瘤一例荧光原位杂交检测 胰母细胞瘤一例荧光原位杂交检测 肿瘤防治杂志2005年旦笪鲞笪塑旦!』:曼兰垦!!!!::! 胰母细胞瘤一例荧光原位杂交检测 李翎,郭猛?,王春英!,王兴武?,李胜1 1.山东省职业卫生与职业病研究院,山东j齐南250062 2.山东省肿瘤防治研究院.山东济南250117 【关键词】神经母细胞瘤;原位杂交,荧光 《短篇论着?病案报道I 【中圈分类号1R735.7【文献标识码】D【文章编号11009—4571(2005)18—1439—01 胰母细胞瘤(pancreatoblastoma,PB)是一罕见的胰腺肿 瘤,我们收治1例,对其进行了荧光原位杂交(FISH)的研究, 初步探讨其非随机染色体改变. 1临床资料 1.1一般资料 患者男,18岁.2001年1月因查体发现胰体尾肿块半年入 院.无家族遗传病史.入院查体:皮肤,巩膜重度黄染,肝脏于 右锁骨中线肋缘下5cm触及,无结节及触痛.CT:肝内胆管扩 张,肝左,右叶见3个低密度病灶,直径分别约为10.0,15cm和 8cm,胰体尾有一10.0cm×8.0cm低密度病灶.人院诊断:胰 腺癌并肝转移.人院后行胰体尾脾联合切除+肝右三叶切除 术.术后病理诊断:胰母细胞瘤,并肝脏转移.生存期26个月. 1.2荧光原位杂交 1.2.1探针及检测试剂载有8号染色体着丝粒重复序列的 质粒(plasmid),由中国医学科学院肿瘤研究所王明荣教授惠 赠.荧光直接标记试剂盒购自美国Vysis.Inc公司. 1.2.2染色体制备参照文献[1]基本.稍作改进.取手 术后肿瘤组织,手术刀片切成0.5,1.0mm,0.2?型胶原 酶消化6h;其余低渗处理和固定按常规中期制备. 1.2.3质粒DNA制备1)质粒的扩增:取含有质粒的菌种, 在超净台内分别接种于琼脂培养基上.37C过夜.次日取一单 克隆菌种加入液体培养基37?摇过夜.2)质粒的纯化:将 6mI菌液分人2个刻度离心管,做标记后离心.去上清,将液 体空于,按质粒纯化试剂盒(miniprepsDNApurificationsystem kit)说明处理纯化后质粒电泳观察纯度.测吸光度值.计算 浓度后存人,20C备用. 1.2.4探针的标记及标记物检测直接标记按Vysis.Inc公 司提供的标记试剂盒和标记程序进行,采用切口翻译掺人 SpectrumOrange-dUTP标记探针,一2Oc保存备用.用0.8 琼脂糖/TAE缓冲液凝胶电泳检测标记产物. 1.2.5荧光原位杂交杂交总面积为1O”I.操作程度如下: 1)沉积探针:取8号染色体着丝粒探针5”I.鱼精DNA 1I,人胎盘DNA2I,3M醋酸钠1.2I.双蒸水4I,无 水乙醇3OI混匀,冰浴15min后.12000rmin低温离心 30min,去上清液,真空抽干2min,加灭菌去离子水3”I.杂 交液7I混匀.72C变性5min,放人一2O?,冰浴备用.9)样 本玻片处理:标本载玻片用100/,g/mIRnase孵育1h,4mg/ mI胃蛋白酶消化10min.再置其于预温的7O%甲酰胺(D. F)2×SSC中(pH一7),72?变性3rain,一2OC的7O,8O, 100ETOH中脱水并终止变性,各2rain,晾干.3)杂交:将 变性的探针加于已变性并脱水的玻片标本上,加上盖玻片后, rubbercement封片,即刻放人潮温暗盒中,在37C的恒温箱内 杂交过夜(约15h).4)次日洗脱,取出杂交的玻片去封胶,用 含有15脱脂奶粉,0.05Tween20,4×SSC,pH7.6的封闭 液37C孵育20min,4×SSC洗涤3×5min.5)杂交信号测定: 用5/,g/mIFITC一卵白素孵育30min,再用生物素化的抗卵白 素和另一层FITC一卵白素进行信号放大.复染封片液为:1”g mI碘化丙啶(PI),1.21,4重氮二环辛烷(DAB(7O),Tris HCI:甘油(1:9,V/V).6)荧光显微镜观察.荧光显微镜为 OlympusBX-50,附有Pixera12O数码照相机和计算机分析软 件及照片打印机. 1.2.6结果实验结果发现有8号染色拷贝数=}曾.多(3体). 2讨论 Horie等一于1977年首次提出胰母细胞瘤概念.发现其结构 类似于胚胎第8周的胰腺,具有错构母细胞瘤性质.Hua等一在 临床研究和胰腺胚胎发育的基础上,提出胰母细胞瘤是胰腺原始 的内分泌细胞及胚胎性胰腺基细胞发展而成的胚胎性肿瘤. 我们研究发现此例PB8号染色体有拷贝数的异常,提示 PB在遗传机制上的改变,可能是PB非随机的染色体异常,也 可能与PB的发病机制有关,这有待于进一步研究. 【参考文献】 [1]王明荣.王秀琴.吴曼.等.荧光原位杂交在问期细胞染色体检测 中的应用[J].中华医学杂志.1996.76(6):478一l79. [2]HorieA.YanoY.KotooY.eta1.Morphogenesisofpancreato blastoma.infantilecarcinomaofthepancreas[J].Cancer.197. 39247—2j4[标签:快照]