【doc】β—兴奋剂正副作用及检测方法

【doc】β—兴奋剂正副作用及检测方法 β—兴奋剂正副作用及检测方法 CHINAANmI_^l_Q~TINEVol18,No.6,200143 文章编号:1005—994X(21301)06—0043—02 案港萋椎教捡磐 聂国荣(江西出入境捡验检疫局330002) p一兴奋剂(p—Agonist)全称 p一肾上腺素能兴奋剂(p—Adrene~ Agonist),叉叫p一激动剂,乙类 促效剂.p一兴奋剂是一种营养重 分配剂,以克伦特罗(Clenbuterol, CL)为主,到目前已有200余种. p一兴奋剂对动物具有促进肌肉生 长,减少酮体脂肪含量,从而改变胴 体瘦肉和脂肪的比例.正是由于上 述作用,国内有些养猪场非法使 用.我国政府于1997年禁止将肾上 腺素能药(如异丙肾上腺素,多巴胺 及p一兴奋剂等)等药物作为动物 促生长剂使用. 人工合成的p一兴奋剂产品主 要有:莱克多巴胺,克喘素 (clenbutero1).叉称克伦特罗,双氯 醇胺或苯甲醇胺;舒喘宁 (salbutamo1).叉称沙丁胺醇;息喘宁 (cirrmtero1),叉称塞曼特罗;舒喘灵 (ractopamine);吡啶甲醇类 1p一兴奋剂化学性质及作用 1.1化学性质p一兴奋剂是一类 化学结构和生理功能类似肾上腺素 和去甲肾上腺素的苯乙醇胺类衍生 物,能与动物体内大多数组织细胞 膜上的p一肾上腺素能受体结合, 也因此而得名. 1.2作用p一兴奋剂的主要作用 是使动物胴体的肌肉部分比例增 加,脂肪含量降低.早期p一兴奋剂 在医学上属拟交感神经作用药,能 兴奋支气管平滑肌的p2受体,使得 平滑肌松弛,支气管扩张,可用来治 疗支气管哮喘病.在以后的研究中 发现这些类拟肾上腺素的物质能够 刺激脂肪组织释放脂肪酸.并增加 蛋白质沉积.p一兴奋剂的作用 现为以下几个方面: 1.2.1对动物促生长作用p一兴 奋剂对大多数动物具有促生长作 用,尤其是反刍动物.不过,p一兴 奋剂的促生长作用与猪的生长阶段 有关试验表明,体重在60k以前 的猪使用p一兴奋剂没有效果肉 鸡和肉鸭分别在21日龄和25日龄 后使用才有效. 1.2.2对蛋白质代谢的影响p一 兴奋剂对蛋白质代谢的影响是通过 刺激蛋白质的合成从而引起肌纤维 细胞内物质增多,体积增大.不同 肌肉组织对p一兴奋剂的敏感不 同,骨胳肌组织较敏感. 1.2.3对脂肪代谢的影响0一兴 奋剂既可减少胴体的脂肪含量,叉 能减少非胴体部分的脂肪沉积. p一兴奋剂对脂肪组织的影响还包 括缩小脂肪细胞的体积,降低脂肪 合成酶的活性. 12.4对体内激素代谢的影响 生长激素(GH)是调节动物生长最 主要的激素,可对机体内大部分组 织的糖,脂肪,蛋白质,和核酸的代 谢起调节作用许多研究表明,p一 兴奋剂能促进GH的分泌,促进肌 肉生长.胰岛素是体内重要的抗脂 解激素,能够降低脂肪细胞eAMP 的浓度.并抑制脂肪分解.p一兴奋 剂能使胰岛素的受体磷酸化,导致 受体数量减少,从而提高脂肪分解 的效应甲状腺是正常生长所必需 的,p一兴奋剂使体内甲状腺素水平 升高. 2p一兴奋剂的副作用 目前,一些猪场非法使用p一 兴奋剂以提高胴体瘦肉率,使用较 多的是克喘素和舒喘宁,但副作用 明显. 21心跳加快许多研究表明. p一兴奋剂显着影响心血管系统. 如服用p一兴奋剂的动物短期内出 现血压升高,血管扩张,血流量增 大,心跳加快,呼吸加剧,体温上升, 心脏和肾脏负担加重等现象. 22影响肉质畜禽宰后糖原的酵 解可使肌肉pH值降低.p,兴奋剂能 促进肌肉中糖原分解,肌肉中糖原减 少使屠宰后肌肉的酵解作用减弱,限 制了肌肉pH值的正常降低,pH值较 高使肌肉色深,坚硬,于硬. 2.3冷收缩使用p一兴奋剂可使 背脂变薄,屠后温热屠体快速冷却 而发生.冷收缩,导致大量肌纤维分 解成肌纤维蛋白及肌凝蛋白,使肌 肉韧性增强,剪刀力加大,口感变 劣,降低肉品质. 24其他副作用有实验指出猪 日粮中舔加p一兴奋剂,跛行,蹄部 损伤发生率高. 猪使用p一兴奋剂后惧怕移 动,运动量稍大死亡率便不正常地 上升,在高温季节尤为明显. p一兴奋剂能大幅度地减少皮 下脂肪厚度,使动物对环境的调节 能力变小,适温谱变窄. 3p一并奋剂对人体健康的危害 p一兴奋剂代谢迅速,并快速从 体内排出.但是,p一兴奋剂在动物 组织中会形成残留,并通过食物链危 害人类健康.克伦特罗在牛体内的半 衰期低于24h,停药后1d,p一兴奋 剂促生长作用随即消失,3—5d胴件 改蘸作用即部分降低,第7d即作用 消失若屠宰前投有停药,则在肌肉 特别是内脏组织中会有较高浓度的 CL残留.据在犊牛的研究报道,晟高 残留在眼组织,比血液浓度高107 倍,肺,肝,肾,脾约为血液的2o9o 倍,肌肉约为血液的3,15倍.克伦 特罗大量以原型经尿液排出,尿中浓 度比血液中浓度高4O倍,毛发中的 残留也高,国际上常用尿液和毛发作 为检测样品. 人食用了有较高残留浓度克伦 特罗的动物组织会出现心跳加快,肉 震颤,心悸等症状.一般食后15min 一 44一中国动物检疫2001年第l8卷第6期 至6h出现症状.症状持续90min至 6d1990年3月至7月西班牙135 人因食牛肉及牛肝中毒住院,牛肝 中CL浓度高达1.6×10'.,2.91× l0,.同年,法国发生22人中毒. 1994至1995年西班牙又发生同样 事件,253人出现头晕,心悸,呼吸 困难,震颉,头痛症状.1995年意大 利也有l6人中毒.1996年8月意大 利Casterta市发生克伦特罗残留事 件,有62人因食用残留克伦特罗的 牛肉而产生心悸,心动过速,神经紧 张等症状,所有患者均在出现症状 前10rain至3h食用了牛肉.1998 年4月,香港卫生署证实,有9位市 民食用了残留盐酸克伦特罗的"猪 肺汤"发生中毒,表现心悸,头痛,手 震和晕眩.2000年l0月,香港叉发 现72位市民因进食"哮喘猪内脏" 而发生中毒. 美国食品药物管理局(FDA)和 世界卫生组织(WHO)建议克伦特罗 在动物组织中撮高残留限量为:肉 0.2g/kg,肝0.6kg,肾0.6g/ kg,脂肪0.2~s/ks,奶0.05~s/ks.但 至今全世界没有任何国家批准CL 作为兽用饲料添加剂. 4p一兴奋剂的检测方法 p一兴奋剂的检测方法分为色 谱技术,免疫分析技术和生物传感 技术三大类. 4.1色谱技术包括高效液相色谱 (?),高效液相色谱/二极管阵 列(HPI~/PDA),高效液相色谱/荧 光(Ht3_E/FIu),高效液相色谱/紫外 (HPLC/UV),液相色谱/质谱联用 (LC/MS),气相色谱/质谱联用(GC/ MS),气相色谱/傅立叶红外联用 (Gc/兀1R).GC/MS可用于动物毛 发,尿液及组织中CL等p一兴奋剂 定性定量分析.样品从预处理至得 出检测结果需两天时间,对p一兴 奋剂的检测下限为0.5g/ks. HPLC在实际工作中常用于检测饲 料中的cL,检测下限为1mg/kg. 4.2免疫分析技术常用酶联免疫 吸附试验(EuSA).ELISA是一种最 常用的非均相酶免疫分析法,具有 成本低,速度快,灵敏度高,仪器设 备简单等特点,适台大批量样品的 快速分析.现在对供港猪进行克伦 特罗检验,是采用英国RANDOX实 验室出品的p—AgonistELISA试 剂盒,该试剂盒用于尿和组织(肌 肉,肾,肝,视网膜)样品中p一兴奋 剂含量的测定.该试剂盒的抗体是 以撮常见的克伦特罗作为抗原(半 抗原)免疫获得的,因此在一系列的 p一兴奋剂中,检测克伦特罗的效 果最好,对克伦特罗的检出下限为 1.0~g/mL(尿样).0.5ng/g(~织), 与其相关反应率为100%.对其它 口一兴奋剂的检出下限和相关反应 率有不同的差异(详见表1). 表10一奋剂柱出下限和相关反应率 B一捡出下限相关斑应 *奋剂卑(nm】J组织(ng/g,幸(1 CI~butem]】005lot/ Ca出ur0『11 Sautxmo]0686 Methyl— 】3077jCI enbutem】 Bmmbutem【2O1(153 Terbtatine20105) Mabuteml2.21145 M?r0l321632 rbu忙ml4fJ2025 CunatemL10n50 R.actopamineI<02 Feneterol<『12 ELISA试验定量检测,所以要 求整个操作过程中,所有标准样品 和待检样品的反应时间,温度,光照 等实验条件要尽量一致,加样用的 移液器的准确性应有保证.据报 道,浓度为1mr,/ks时,假阴性率 1%,假阳性率2.5% 用?腮A试验方法检测的阳性 结果,需要用其它方法证实.确证 p一兴奋剂的方法有GC/MS,LC/MS 和GC/FF1R.通常用GC/MS确证. ELISA试验方法检测p一兴奋 剂产生假阳性的机率较高.理论上 分析,当样品中含有与克伦特罗结 构相似的化合物时,可能出现免疫 交叉反应而呈现假阳性结果.试验 表明,麻黄碱,肉毒碱,有机铬,硫酸 亚铁,土霉素,化十香等会产生假阳 性结果.其它带有苯乙醇胺或类似 结构的药物如阿托品,肾上腺素,去 氧肾上腺素,去甲肾上腺素,异丙肾 上腺素,多巴胺,多巴酚丁胺,氯苯 吡胺,芬太尼,氯霉素,氯喘通,酚丙 喘宁等,这些药物可能会产生假阳 性,但还有待于试验研究.用青霉素 +氨基比林和青霉素+安定痛分别 污染尿样,也会使检测结果呈假阳 性.如果采尿前,生猪用过磺胺类药 物(如磺胺嘧啶钠,磺胺一2甲氧嘧 啶,磺胺一5甲氧嘧啶,磺胺一6甲氧 嘧啶)进行治疗也会影响检测结果, 对此应予高度注意.因此,供港生猪 出栏前半个月不要使用抗生素和磺 胺类药物进行治疗,否则会因阳性 结果而作剔除处理. 4.3生物传感技术是一部生物传感 器外联电脑,当前的技术可检测尿 液,血清中的克伦特罗残留,检测毛 发的技术正在推出. 参考文献(略) 镶痰譬爨壤蠡谯瓣嫦缝 去年9月20日秋防期间,我县某猪场因粗心大意,误将猪肺疫13服活菌苗, 按13服剂量用生理盐水稀释,每头肌肉注射1mL,共注射47头,体重在25,4olcg 之间:早上9:30注射结束,下午6点47头突然发病.高热出现寒战,体温升至 4l?以上:颈部急剧肿大,呼吸困难,问有湿性嚷嗽,口鼻流白色泡沫或清液,部 分而呈血色:精神疲怠,食欲废绝.心跳加快,可视粘膜因缺氧而呈兰紫色.根据 注 量 余 苗情况和临床表现,我们诊断为急性猪肺疫.立即用青霉煮50000IU'/kg.~l: 肌肉注射,3攻/d,重病例4h/次.有两头严重病例,因窒息和心力衰竭死亡.其l 45头用青霉索治疗3d后基本恢复正常,颈部肿胀逐渐消退.在预防接种时, ! 定要严格按疫苗规定使用,以免造成人为的经济损失.{ (山西省临精县畜牧局尚高升徐锡眷供稿){ ………一………,一……0