8细菌革兰氏染色

8细菌革兰氏染色 成 都 医 学 院 教 案 首 页 2013年级 护理学专科1-2班 任课教师: 殷建华 讲授 医学微生物学与免学3 课程 题目 实验二 细菌革兰氏染色 实验 疫学 时 行课课2014年5月19日第3节至5节 第2次 时间 次 《医学免疫学与微生物学实验指导》本科教材(第一版)，林巧爱主编.浙江大学出版社.杭教 材 州.2006.07 教 具 细菌革兰氏染色 教 学 1、掌握革兰氏染色方法。 目 的 2、了解革兰氏染色方法的原理。 要 求 教学 教学重点: 革兰氏染色方法 重点 教学难点: 革兰氏染色方法的原理 难点 及其 解决:通过实验操作，加深学生对实验原理的理解，最终掌握实验方法。对实验结果解决要进行深入，及时纠正学生的不正确操作。 方案 1.沈萍.微生物学.北京:高等教育出版社.2003. 参 考 2. Lansing M. Prescott, Microbiology 5th ed 影印版，高等教育出版社，2000. 资 料 3.?医学免疫学?本科教材(第三版)，陈慰峰主编.人民卫生出版社.北京.2000.8 4.《医学微生物学》本科教材(第六版)，周正任主编.人民卫生出版社.北京.2003.12 实 施 情 况 小 结 教研室主任签名: 2014年2月21日 成 都 医 学 院 教 案 续 页 教学过程、内容及时间分配 教学方法与手段 实验二 细菌革兰氏染色 一、实验原理(20分钟) 革兰染色法是最常用的细菌鉴别染色法。同时还为分析细菌的致病性和比较革兰氏阳性菌 和阴性菌细胞壁结构的选用抗菌药物提供了依据。 区别 革兰染色的原理，主要是由于两类细菌的细胞壁成分和结构的不同。革 兰阴性菌细胞壁中含有较多类脂质，而肽聚糖含量较少。当用酒精脱色时，强调染色结果和化溶解了类脂质，增加了细胞的通透性，使结晶紫和碘的复合物易于渗出，学结构相关 细胞脱色，经复染后，染上复染液(复红)的颜色;而革兰阳性菌细胞壁中 肽聚糖含量多且交联度大，类脂质含量少，经酒精脱色后，肽聚糖层的孔 径变小，通透性降低，酒精不易进入菌体脱色，故细胞仍保留初染液(结晶 紫)的颜色。 二、实验材料及方法 实验材料 1(葡萄球菌和大肠杆菌18,24h混合培养物。 2(革兰氏染色试剂。 实验方法(90分钟) 注意在一个玻片上1(制作细菌涂片、干燥、固定。 涂三个菌膜，分别是:2(初染:涂片上加结晶紫染液数滴，染色lmin，用水冲去染液，甩干。 白色葡萄球菌，混合菌， 3(媒染:加卢戈氏碘液数滴，1min后水洗，甩干。 大肠杆菌 4(脱色:加95%酒精，频频摇动玻片，直到不再溶下染料为止，约30s， 注意干燥时不要温水洗，甩干。 度过高 5(复染:加1%复红染液1min，水洗，甩干。 6(用毛坯纸或滤纸轻轻印干，待标本充分干燥后用油镜观察。 脱色时间要控制好 三、关键步骤及注意事项(5分钟) 1(要掌握好染色的时间，尤其是酒精脱色时间，不宜过长或过短。 2(选用18,24h培养物为宜，否则影响染色效果。 总结:5min